用羟基磷灰石纳米粒作内耳基因治疗新载体的体内外研究

目的 研制羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAT)纳米粒,评价其作为新的内耳基因转染载体的可能性.方法 用化学共沉淀-水热合成法制备HAT载体.经DNA电泳做不同pH值和HAT含量的DNA结合实验,了解HAT纳米粒对DNA的结合和保护作用;用四甲基偶氮唑盐法观察HAT纳米粒对宫颈癌上皮Hela细胞的毒性;用Hela细胞和小鼠耳蜗原代螺旋神经节细胞做神经营养素3(neurotrophin 3,NT3)体外转染实验(绿色荧光蛋白基因荧光显微镜法)及NT3的蛋白印迹分析,观察HAT介导的NT3基因对活细胞的体外转染能力和基因表达情况;经实验性兴奋性耳毒性损伤豚鼠的耳蜗外淋巴腔灌注HAT纳米载体-含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒载体-NT3基因复合物(HAT-pEGFPC2-NT3),用免疫组化(二氨基联苯胺法)观察NT3在耳蜗的表达,以了解HAT纳米载体在活体动物耳蜗介导基因转染的能力.结果 含量250.0 μg/ml,pH值3～7是这种长约40～50 nm的短棒状HAT纳米粒能完全结合重组质粒pEGFPC2-NT3的最低含量混悬液和最佳pH环境,并可有效保护基因不被核酸酶(DNase Ⅰ)破坏.四甲基偶氮唑盐法观察HAT纳米粒从62.5 μg/ml至500.0 μg/ml 4种混悬液对Hela细胞存活率无明显影响,细胞形态无变化.EGFP荧光显微镜观察显示,HAT纳米载体对Hela细胞的基因转染率为15.7%±2.6%(-x±s);将HAT-pEGFPC2-NT3转染培养的小鼠耳蜗神经元,也可见明显的EGFP表达.NT3免疫组化显示,向实验性兴奋性耳蜗损害豚鼠的耳蜗外淋巴腔灌注HAT-pEGFPC2-NT3,可见活体耳蜗神经元内有明显的NT3蛋白表达.结论 HAT纳米粒不仅可介导NT3基因的体外转染,而且可介导其耳蜗活体转染;尽管转染率有待提高,但由于没有病毒载体转染造成的生物威胁,仍不失为一种很有研究价值的非病毒型内耳基因治疗载体.     

ABGⅠ代髋臼杯假体翻修原因分析

目的分析半球形ABGⅠ代羟基磷灰石(HA)涂层髋臼杯假体翻修原因,评价其中长期随访结果。方法对299例(366髋)行半球形ABGⅠ代HA涂层髋臼假体置换患者的病历和X线片进行回顾性研究,截止2004年7月30日随访121例(141髋),其中68例(77髋)髋臼杯进行了翻修,男48例(53髋),女20例(24髋);年龄30～72岁,平均51.4岁;全髋翻修7髋,髋臼杯翻修70髋。测量髋臼假体外展角和前倾角位置,将外展角>50°、前倾角>20°、髋臼杯露出髋臼外>10%定义为髋臼假体位置不良,并根据测量随访时正位X线片上的股骨头偏移距离计算内衬磨损率。根据X线片对髋臼假体翻修原因进行分析。结果翻修68例77髋中术后5年内翻修11髋,6￣12年翻修66髋,翻修病例集中在术后7～9年。X线片示假体松动42髋、严重骨溶解43髋、轻度骨溶解12髋,均有不同程度内衬磨损。翻修患者中髋臼杯位置不良18髋,髋臼发育不良患者髋臼植骨6髋,术后外伤2髋,术后脱位2髋,其余49髋的翻修原因推测与假体有关。内衬磨损率为每年(0.26±0.10)mm。翻修手术中取出的假体表面没有很好的骨生长。结论ABGⅠ代HA涂层髋臼假体的中期随访结果较好,长期随访结果不满意。导致翻修率高的原因包括髋臼发育不良、髋臼假体安放位置不正确、高内衬磨损率和过多的螺钉孔导致的骨溶解松动。     

种植体周骨缺损时羟基磷灰石颗粒植入的实验研究

目的为研究羟基磷灰石颗粒在即刻人工种植体的愈合过程中的作用。方法作者应用国产ＨＡ层钛种植体植入犬股骨中进行观察，术后１、２、３、４个月处死动物，通过Ｘ线检查及扫描电镜观察标本。结果即刻种植组中，用ＨＡ充填空隙后，其愈合情况在术后３个月与延期种植无明显差异，种植体和骨组织结合紧密；无ＨＡ充填的标本中与延期种植存在差异，４个月时颈部尚有部分骨组织缺损。结论即刻种植术中，在植入种植体的同时植入ＨＡ颗粒。有助于种植体的稳定，对种植体与周围骨组织早期愈合起到较大作用。     

羟基磷灰石复合骨诱导蛋白“夹心”式植入牙槽嵴加高术

为解决粘膜裂开、溃疡形成及术后变形等问题，采用羟基磷灰石（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ，ＨＡ）复合骨诱导蛋白（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＢＭＰ）“夹心”式植入修复牙槽嵴萎缩。动物实验术后行光镜和扫描电镜观察，临床病例术前术后进行Ｘ光片检查。结果显示：实验动物术后植入物牢固，周围有大量新骨形成且多面与宿主骨连接。由于牙槽嵴顶部外形、解剖结构完好，临床检查见修复效果可靠，并发症较少，术后义齿修复满意。结果表明：采用ＨＡ－ＢＭＰ复合物“夹心”式植入修复牙槽嵴萎缩有如下优点：①利用ＨＡ与ＢＭＰ共同作用，生物相容性好，具备骨引导和骨诱导双重功能，新骨形成快而多；②植入物与原牙槽嵴多面结触，诱导新骨形成作用强，植入物固位好，术后牙槽嵴不易变形，增加高度大、可靠；③保持了牙槽嵴顶的原解剖结构，不易形成粘膜破裂及溃疡；④形成的新骨与原宿主骨为直接连结，强度大；⑤手术简捷、安全。     

自体骨髓基质干细胞-珊瑚羟基磷灰石修复下颌骨节段缺损的实验研究

目的应用骨髓基质干细胞（BMSCs）复合珊瑚羟基磷灰石（CHA）构建组织工程化骨，修复犬下颌骨节段性缺损。方法体外分离培养，成骨诱导扩增犬BMSCs，将第2代细胞复合CHA后修复5只犬自体下颌骨右侧3cm的节段缺损；6只犬植入单纯CHA作为对照，术后12、26、32周通过影像学、大体形态、组织学和生物力学的方法检测骨缺损的修复效果。结果BMSCs-CHA复合物生长良好。随时间延长，X线片和CT显示实验组连接处骨痂形成，实验对照组连接处始终愈合较差；32周大体观察实验组骨修复较好，组织学显示有板层骨形成，连接处骨性愈合，实验对照组有编织骨形成，连接处纤维愈合。实验组与正常对照组下颌骨力学强度差异无统计学意义。结论自体成骨诱导BMSCs复合CHA形成的组织工程化骨可修复犬下颌骨节段缺损。     

新型骨修复材料PDLLA/HA/DBM的生物相容性

评价用悬浮液分散共混合法制备的新型骨修复材料PDLLA／HA／DBM的生物相容性。按照我国卫生部《生物材料和医疗器材生物学评价的技术要求》中的标准，对PDLLA／HA／DBM进行急性毒性实验、热原实验、溶血实验、兔肌肉内种植实验和PET实验。结果表明，PDLLA／HA／DBM无毒性，无热原性，不引起溶血反应，植入兔肌肉后逐渐发生降解并被软骨组织和骨组织取代，不引起全身和局部葡萄糖代谢改变。新型骨修复材料PDLLA／HA／DBM具有良好的生物相容性。     

纳米相羟基磷灰石胶原复合材料与人骨髓基质干细胞体外相容性的研究

目的探讨纳米相羟基磷灰石胶原复合材料(nano-HAP／Collagen，NHAC)与人骨髓基质干细胞(hBMSC)相容性，为应用组织工程方法修复骨缺损提供依据。方法将人骨髓基质干细胞与纳米相羟基磷灰石胶原复合材料体外复合培养，进行形态学和功能测定。结果骨髓基质干细胞能在纳米相羟基磷灰石胶原复合材料上良好地粘附、增殖、生长。细胞的活性和碱性磷酸酶活性未受到纳米相羟基磷灰石胶原复合材料的影响。结论纳米相羟基磷灰石胶原复合材料具有良好的细胞相容性，可作为骨组织工程理想的骨载体材料。     

成骨诱导人脐带间充质干细胞复合nHA/PA66支架异位成骨作用的实验研究

[目的]探讨了成骨诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)复合nHA/PA66支架材料在裸鼠体内异位成骨的情况,为进一步骨缺损动物实验提供理论依据.[方法]将成骨诱导人脐带间充质干细胞接种nHA/PA66支架材料复合培养;分别将成骨诱导后hUCMSCs悬液、单纯nHA/PA66支架材料、成骨诱导hUCMSCs与nHA/PA66支架复合体植入裸鼠背部肌袋内,观察其异位体内成骨情况.术后取材观察HE染色及骨钙素蛋白免疫组织化学染色表达情况并扫描电镜观察其成骨能力.[结果]成骨诱导后hUCMSCs组、单纯nHA/PA66支架材料组在裸鼠背部肌袋中无骨质形成,成骨诱导hUCMSCs与nHA/PA66支架复合体组有骨质形成,同时材料部分降解.[结论]成骨诱导的hUCMSCs与nHA/PA66支架材料复合后制备的生物复合材料在裸鼠体内具有异位成骨能力.     

万古霉素/羟基磷灰石/二氧化钛纳米管的抗菌性能

BACKGROUND: Present studies have proved that titanium coating nanotubes cannot only promote the biological activity of the material itself, but also be used as a drug carrier loading antibiotics and growth factors.     

纳米羟基磷灰石复合树脂材料细胞毒性及在牙体缺损修复中的应用

BACKGROUND: It has been found that the compressive strength and flexural strength of nano- hydroxyapatite combined with light-cured resin matrix can neet the requirements of dental restorative materials. OBJECTIVE: To detect the cytotoxicity of nano-hydroxyapatite/composite resin, and to analyze its effects on the dental restoration. METHODS: In vitro test: passage 5 periodontal ligament fibroblast-like cells and L-929 cells suspensions were cultured in the 10%, 50%, 100% of nano-hydroxyapatite/composite resin extracts, respectively, and fresh maintenance medium functioned as negative control group. Absorbance values were detected within 7-day culture. In vivo repair test: 57 cases with tooth defect were enrolled containing 37 males and 20 females aged from 15 to 31 years old, and all were subjected to nano-hydroxyapatite/composite resin treatment. A 3-year follow-up was undergone to detect the completeness, marginal adaptation and color matching of the restoration, as well as the periodontal probing depth, sulcus bleeding index, tooth mobility, dental plaque index, gingival crevicular fluid and aspartate aminotransferase level. RESULTS AND CONCLUSION: In vitro test results showed that the different concentrations of nano- hydroxyapatite/composite resin extracts had no effects on both periodontal ligament fibroblast-like cells and L-929 cells. In vivo repair test results found that after 3 years of follow-up, the periodontal probing depth, sulcus bleeding index, tooth mobility, dental plaque index, gingival crevicular fluid and aspartate aminotransferase level of patients were significantly decreased than those before repair (P < 0.05), but the alkaline phosphatase level revealed no significant change (P > 0.05). Unfortunately, three cases with incomplete restoration, four cases with color mismatching, and three cases with the inadaptable edge occurred. To conclude, the nano-hydroxyapatite/composite resin holds good biocompatibility and no cytotoxicity, which can maintain a good periodontal health condition in the dental restoration.