Characterization of a cosmid library from flow-sorted chromosomes 11

A cosmid library specific for human chromosome 11 has been constructed from flow-sorted chromosomes. The flow-purified chromosomes were prepared from the hamster/human hybrid line J1 which contains chromosome 11 as the only human chromosome. Individual clones were sampled in 187 microtitre plates, resulting in a total of 17 952 colonies. Hybridization analysis revealed that 83.7% of these clones were of human and 10.4% of hamster origin. The average insert size was estimated at 33.6 kb, and only 2.4% of insert fragments appear to be rearranged. This should result in 494 487 kb of cloned human DNA representing 3.5 chromosome 11 equivalents. We have prepared high-density nylon membranes of the arrayed library containing 1 536 single colonies per filter. We have demonstrated the usefulness of the library in the molecular genetic analysis of human chromosome 11 by testing for the presence of possibly polymorphic simple repeat motifs, by identifying cosmids that contain inserts from the telomeric ends of chromosome 11 and by assessing the potential of the library for rapid chromosome walking.     

安徽省有焦虑症状大学生的社会人口特征及社会心理分析

目的:了解安徽省大学生焦虑症状流行状况及其社会人口和社会心理影响因素。方法:对所有省属高校按专业分层,以校为整群抽样(每专业1校),抽取该校在校生的15%。采用无记名问卷调查,共获得有效问卷4178份。调查工具包括焦虑自评问卷(SAS)和青少年负性生活事件量表(ASLEC)。结果:6.94%的大学生存在焦虑,其中男生7.22%,女生为6.35%。理工学生焦虑检出率最高(10.08%),西医学生最低(3.59%)。卡方检验显示焦虑症状与社会人口特征中的出生地、年级、学习成绩、专业及父亲学历有关;与社会心理因素中的生活事件与生活经历,家庭环境中的大部分特征都有统计意义的相关性。多元逐步回归模型进一步发现焦虑症状受社会人口特征中理工类专业(OR=1.77,95%CI:1.30～2.41)和成绩差(OR=1.45,95%CI:1.09～1.93)的显著影响,同时也受社会心理因素中的负性生活事件(OR=4.76,95%CI:3.36～6.77)、消极社会经历(OR=3.35,95%CI:2.43～4.62)以及家庭环境特征中的亲密度(OR=0.65,95%CI:0.49～0.85)和情感表达(OR=0.71,95%CI:0.54～0.94)的显著影响。结论:大学生焦虑症状受社会人口特征及社会心理各方面的综合影响,大学生焦虑症状的预防需家庭、学校和社会的共同参与和促进。     

大学生电脑游戏成瘾量表的编制和信效度检验

目的:编制适合大学生使用的电脑游戏成瘾量表(CGAI),并检验其信效度。方法:对477份来自北京市8所大学大学生的CGAI测试结果进行探索性因素分析,对405份来自北京市5所大学大学生的CGAI测试结果进行验证性因素分析。结果:探索性因素分析获得33个条目的CGAI问卷,分为4个因素可解释总方差的55·1%,四个维度依次为:依赖/成瘾行为表现维度、情绪唤起维度、功能损害维度、对现状羞耻或不满维度;验证性因素分析验证了4因素模型,其结果为χ2/df=2·304;IFI=0·885;CFI=0·884;NFI=0·813;RSMEA=0·057。该问卷的内部一致性信度(r=0·77~0·94)、重测信度(r=0·907,P<0·001)和效标效度(成瘾组被试CGAI四维度评分均高于正常对照组)均符合测量学的要求。结论:该量表具有良好的信度和效度,可在大学生中使用。     

从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物

采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 ,有可能作为肿瘤诊断的标志物     

登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定

目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位，并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体随机12肽库，将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导，通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比，初步确定E蛋白的抗原表位；用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验，确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS，其展示肽与DEN2E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390～399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应，并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390～398AA)线性序列为免疫优势表位，其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。     

干扰素基因定向进化库的建立及初步筛选

目的构建α干扰素基因家族定向文库。方法利用D NAshuffling技术对人、鸡和猪α干扰素基因进行人工改造，结合噬菌体展示技术构建噬菌体基因改组文库，并对文库进行验证。结果构建了α干扰素基因家族定向文库，其容量为3．5×10^7pfu；测序得到了3条与猪、人α干扰素基因高度同源的序列。结论得到了1个高质量的α干扰素基因家族定向文库，为今后筛选高效的α干扰素奠定了基础。     

利用噬菌体肽库技术获得与人Fas结合的多肽基序

目的　利用噬菌体随机肽库技术获得与人Fas胞外区结合的多肽及其多肽基序 ,观察多肽基序的生物学功能。方法　以人Fas胞外区与IgGFc段的融合蛋白Fas .Fc为筛选配基 ,筛选噬菌体随机九肽库 ;微量淘洗与ELISA相结合鉴定阳性克隆 ,DNA测序和分析。化学合成多肽进行竞争性ELISA以及细胞增殖抑制实验。结果　经过 4轮亲和筛选 ,微量淘洗鉴定 ,获得 4 2个阳性克隆 ;固定ELISA实验显示筛选到的噬菌体短肽能与Fas .Fc特异性结合 ,并呈剂量依赖关系 ;随机选取 13个阳性克隆进行DNA测序 ,其序列及出现几率分别为 :PRKARVDTS(2 / 13)、YKKKSLQVQ (2 / 13)、YKKKSMLQA(2 / 13)、SRKKYDQYA(4/ 13)、YARKIKPTA(2 / 13)和ARKKTEGAG(1/ 13)。经多重序列分析 ,获得多肽基序 : R/KKK A。在ELISA和竞争性ELISA实验中 ,化学合成多肽EGEFYKKKSM LQADPAK (P3)可抑制Fas与抗人Fas单抗Apo 1的结合 ,且呈剂量效应关系 ;P3不能抑制Fas与FasL的结合。细胞增殖实验表明 ,多肽可抑制Jurkat细胞增殖 ,且随多肽剂量的增加而加强。多肽与单抗Apo 1联合作用对Jurkat细胞增殖的影响与单独使用P3没有明显差别。结论　通过噬菌体随机肽库技术获得与Fas结合的多肽及其多肽基序 ,它们可能模拟了抗Fas抗体Apo 1对Fas的结合位点 ,为基于Fas凋     

噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位

目的：利用噬菌体随机肽库分析抗HIV－1核心区抗原p24单抗体在抗原上的识别位点。方法：用抗HIV－1 p24单抗2C7和3H10作为筛选分子，对噬菌体肽库进行生物洗（biopanning)，并通过DN测序、ELISA效价测定等对所获得的噬菌休克隆进行鉴定，最后对合成的7肽位点通过间接ELISA及免疫抑制试验进行血清学分析。结果：序列分析结果表明，单抗2C7和3H10在HIV－1 p24上的抗原识别表位的保守序列分别为DHPXPXX和XXXXKAF。分别合成这2个7肽氨基酸序列P－C1（DHPSPWG）和P－H3（SPWLKAFGGS），并分析其免疫学结合特性，结果表明与P－H3相比，单抗2C7的抗原识别表位P－C1的固相结合特性较好，固相P－C1检测血样，13份抗HIV阳性本中，12份为阳性（检出率为92．3％），19份抗HIV阴性样本中，仅1份为假阳性结果（特异性为94．7％），与P－C1相比，单抗3H10的抗原表位P－H3的固相结合能力极差，但液相结合活性较好，血样与P－H3的抑制试验表明，13份抗HIV阳性样本中12份样本对P－H3的抑制率大于60％（12／13），而9份抗HIV阴性样本中仅1份对P－H3的抑制率大于50％，结论：用抗HIV－1 p24单抗筛选噬菌体随机肽库，获得单抗在p24抗原上的识别表位的氨基酸序列，血清学结果表明这2个抗原表位存在于p24自然抗原上，在抗HIV－1的感染检测中具有潜在的应用价值。     

Construction of a highly enriched marsupial Y chromosome-specific BAC sub-library using isolated Y chromosomes

The Y chromosome is perhaps the most interesting element of the mammalian genome but comparative analysis of the Y chromosome has been impeded by the difficulty of assembling a shotgun sequence of the Y. BAC-based sequencing has been successful for the human and chimpanzee Y but is difficult to do efficiently for an atypical mammalian model species (Skaletsky et al. 2003, Kuroki et al. 2006). We show how Y-specific sub-libraries can be efficiently constructed using DNA amplified from microdissected or flow-sorted Y chromosomes. A Bacterial Artificial Chromosome (BAC) library was constructed from the model marsupial, the tammar wallaby (Macropus eugenii). We screened this library for Y chromosome-derived BAC clones using DNA from both a microdissected Y chromosome and a flow-sorted Y chromosome in order to create a Y chromosome-specific sub-library. We expected that the tammar wallaby Y chromosome should detect ∼100 clones from the 2.2 times redundant library. The microdissected Y DNA detected 85 clones, 82% of which mapped to the Y chromosome and the flow-sorted Y DNA detected 71 clones, 48% of which mapped to the Y chromosome. Overall, this represented a ∼330-fold enrichment for Y chromosome clones. This presents an ideal method for the creation of highly enriched chromosome-specific sub-libraries suitable for BAC-based sequencing of the Y chromosome of any mammalian species.     

人泌尿系上皮肿瘤疫苗的初步研究

目的通过筛选噬菌体随机12肽库获得MUC1糖链抗原模拟表位。方法利用纯化获得的M a695抗体筛选噬菌体随机12肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了14个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:KHYDPFHHRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI,MTPIHYWNHNRV。鉴定结果表明4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列KHYDPFH-HRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI,及MTPIHYWNHNRV模拟了MUC1抗原表位。