急性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒序列的研究

目的:研究急性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒序列。方法:提取急性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,扩增其表面抗原序列,测序并相互比较。结果:测定5例急性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒均为adw亚型,其中3例同源性>99%。结论:adw亚型HBV感染后较多为急性病变,由于病毒变异少,机体有可能清除HBV。     

深圳市某校一起诺瓦克病毒性胃肠炎疫情调查分析

目的:调查以发热呕吐、腹泻为主要症状的胃肠炎的病因,查找传染源,以采取相应的控制措施。方法:采用流行病学调查方法对病例进行调查,对病人以及食堂员工肛拭、粪便以及环境样品采用实时荧光PCR进行定性检测。结果:经诺瓦克病毒基因检测,学生样本3例阳性;教师食堂员工样本阴性;环境样本1例阳性。6月15、19日对73名学生食堂员工进行诺瓦克病毒基因检测,分别有7例(9.6%)和5例(6.9%)阳性。25日,再次对73名食堂员工进行检测,全为阴性。通过测序分析比对,从食堂员工以及学生中检测出的诺瓦克病毒为同一型诺瓦克病毒。结论:该校学生胃肠炎是由诺瓦克病毒感染引起,学生食堂员工带毒是引起此次诺瓦克病毒发生流行的传染源。     

基于动态筛选策略的SMO改进算法

提出了一种基于动态筛选策略的SMO(Sequential Minimal Optimization)改进算法,它能快速地筛选出绝大多数的边界支持向量和非支持向量,并将非边界支持向量限定在很小的范围内。仿真实验结果表明:样本规模无论大小,这种策略都能使Keerthi的改进算法2的性能得到大幅提升。     

参附注射液对大鼠缺血/再灌注损伤期间心肌细胞基因表达的影响

目的 对参附注射液抗心肌缺血/再灌注损伤可能的分子机制进行初步探讨.方法 SD大鼠19只,分为2组,对照组和参附注射液组,分别为生理盐水组,心肌缺血30 min/再灌注10 min+参附注射液组.建立心肌缺血/再灌注损伤模型,分别收集各组大鼠心肌组织,提取心肌细胞总RNA,利用Affymetrix Rat 230A芯片进行基因差异表达分析,用Microarray Suite 5.0软件读取并进行数据处理.结果 心肌缺血/再灌注10 min后,给药组与对照组比较明显上调基因222条,明显下调基因246条.与心肌缺血/再灌注损伤密切相关的主要基因有,超氧化物岐化酶、谷胱苷肽S转移酶、巨噬细胞移动抑制因子、热休克蛋白、钙通道电压依赖相关基因及金属硫因等基因.这些基因主要与抗氧自由基损伤、抑制细胞凋亡、心肌保护、抑制炎症及抑制心肌缺血/再灌注损伤时的钙超载等机制相关.结论 参附注射液对心肌起到保护作用的分子机制主要是通过调节抗氧自由基损伤相关基因、炎症相关基因及钙转运酶等相关基因,进而参予调控心肌缺血/再灌注损伤疾病过程中细胞信号转导.通过抗过氧化脂质损伤作用,减轻缺血时被激活的白细胞聚集等炎症反应,抑制缺血/再灌注期间钙超载所致的细胞凋亡发生,从而提高心肌细胞的防御能力,起到保护心肌的作用.     

SiRNA逆转人红白血病细胞株(K562/ADM)阿霉素耐药性的实验研究

目的:研究小分子干扰RNA片段(small inteffering RNA,siRNA)对人红白血病细胞株K562/ADM细胞mdr1基因表达及药物敏感性的影响,探索新的耐药逆转途径.方法:siRNA根椐GeneBank已知序列设计,在脂质体介导下转染K562/ADM细胞;用流式细胞仪检测K562/ADM细胞Pgp的表达;用MTT检测其对阿霉素ADM的敏感性;用PCR-ELISA法检测K562/ADM细胞的端粒酶活性.结果:siRNA转染后K562/ADM细胞Pgp的表达明显下降,对阿霉素ADM的IC50从8.7μg/ml降到5 μg/ml,端粒酶活性明显下调.结论:siRNA有效逆转了mdr1介导的耐药性,不失为一种新型、有效的肿瘤耐药逆转途径.     

应用系统发育分析方法鉴别近缘病原菌

目的:以gyrB基因序列为基础,采用系统发育分析方法构建进化树,对种系关系密切的病原菌进行区分鉴别。方法:测序获得本地区19株大肠埃希菌、13株志贺菌、2株豚鼠气单胞菌、2株嗜水气单胞菌、1株维隆气单胞菌的gyrB基因序列,并将其同公共数据库已有序列合并,构建进化树。分析各序列在树中的聚类关系,以此对菌株进行种水平分类鉴别,并同BLA ST查询结果相比较。结果:除鲍氏和痢疾志贺菌外,对检测的所有序列,在进化树上与之最邻近的5条序列均为该种菌株。而对一部分菌株,其BLA ST查询结果中含有其它菌种的或分类关系不明确的序列。结论:以系统发育方法对种系发生关系密切的病原菌序列进行鉴别,具有较好的分辨力和准确度。     

c-erbB2 ASODN-Folato(FA)诱导乳腺癌细胞凋亡的体外研究

目的本研究通过癌基因反义寡脱氧核苷酸抑制癌基因表达的原理,研究c-erbB2癌基因反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞SK-Br-3凋亡和蛋白表达的影响。方法采用DNA末端原位标记染色和Annexin-V荧光标记法检测ASODN-FA对乳腺癌细胞凋亡的作用,用免疫组化法检测对p185蛋白表达的影响。结果DNA末端原位标记染色实验表明,c-erbB2 ASODN-FA能诱导SK-Br-3细胞晚期凋亡,其凋亡指数AI为(17.37±2.78)%,与对照组[(4.60±1.76)%]比较有显著差异(P=0.000)。Annexin-V检测发现,c-erbB2 ASODN-FA能诱导SK-Br-3细胞早期凋亡,早期凋亡细胞阳性率为(18.62±1.80)%,与对照组[(2.75±1.09)%]比较有显著差异(P=0.000)。免疫组化测定细胞p185表达情况,ASODN-FA组的平均光密度为0.11±0.02,与对照组(0.31±0.06)比较明显降低(P=0.000)。结论c-erbB2反义寡脱氧核苷酸能诱导乳腺癌细胞SK-Br-3的早期和晚期凋亡,使p185蛋白表达降低。     

GFP-HPVl8 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础.方法 用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-Cl载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定.结果 阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb、618 bp和243 bp附近的片段.DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确.结论 成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD.     

人肺癌高低转移细胞株差异表达基因的筛选

目的 筛选高低转移能力人肺癌细胞株PG-BE1和PG-LH7间差异表达基因.方法 进行两次抑制性消减杂交,第一次以PG-BE1细胞株为实验方、PG-LH7株为驱动方构建正向消减文库;第二次以PG-LH7株为实验方、PG-BE1为驱动方构建反向消减文库.筛选出来的阳性克隆进行测序,并在Gene Bank数据库中进行同源性比较.结果 2个消减文库共得到122个阳性克隆,随机选取10个克隆测序并进行同源性分析,发现其中9条序列来自于已知基因,另外1条序列为新的基因序列标签.结论 成功构建了高低转移力人肺癌细胞株的双向消减杂交文库.     

多重定量荧光PCR在21-三体及性染色体多倍体畸变诊断中的应用

目的探讨多重定量荧光PCR(QF-PCR)技术在染色体非整倍体畸变诊断中的应用价值。方法抽取脐血样本16份,羊水样本73份,21、X、Y染色体数目异常患者及其父母外周静脉血71份,针对21号染色体和X、Y染色体上7个基因位点21S1435、D21S11、D21S1411、AMXY、DXS981、DXS6809和X22应用QF-PCR方法进行多重扩增,毛细管电泳法检测并分析结果。所有样本同时进行染色体核型分析。结果染色体核型分析中有129例为正常核型46,XX(XY);26例21-三体(其中1例为易位型,余为标准型);1例45,XO/46,XX;2例47,XXX;1例47,XXY;1例45,XX,der(13,21)。QF-PCR结果中,确诊1例47,XXY,26例21-三体征中23例确诊,2例47,XXX被提示可能存在性染色体数目异常,其余为阴性结果。结论多重定量荧光技术可用于染色体非整倍体畸变的快速诊断。