虎杖苷改善氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的机制

目的探讨虎杖苷对氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的影响及其可能机制。方法A549细胞分为4组:对照组接受0.1%浓度的DMSO处理60 min;模型组给予同等浓度DMSO预处理30 min后以H 2O 2250μmol/L刺激30 min;治疗组接受虎杖苷50μmol/L预处理30 min后予以H 2O 2250μmol/L刺激30 min;抑制剂组接受线粒体自噬抑制剂mdivi-110μmol/L及虎杖苷50μmol/L预处理30 min后以H 2O 2250μmol/L刺激30 min。Western blotting法检测线粒体膜蛋白[线粒体外膜转位酶(TOM20)和线粒体内膜转位酶(TIM23)],及线粒体生成调节因子[线粒体转录因子(mTFA)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)],同时Keima法检测细胞红色/绿色荧光面积以反映线粒体自噬水平。JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP)。DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)水平。荧光素-荧光素酶法检测细胞ATP水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。结果(1)线粒体自噬水平。与对照组比较,模型组细胞TOM20及TIM23表达显著下降;与模型组比较,治疗组TOM20及TIM23表达显著下降;与治疗组比较,抑制剂组TOM20及TIM23显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。但4组细胞mTFA及PGC-1α水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。Keima法显示,4组细胞红色/绿色荧光面积比值变化趋势与TOM20及TIM23水平变化相反。(2)MMP水平。对照组、模型组、治疗组与抑制剂组MMP分别为(100.0±5.9)%、(54.2±4.8)%、(70.8±3.6)%和(56.0±6.1)%。与对照组比较,模型组细胞MMP显著下降,治疗组MMP较模型组显著增加,而抑制剂组MMP较治疗组显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)ROS水平、细胞活性及ATP水平。与对照组比较,模型组细胞ROS水平显著上升,细胞活性、ATP水平显著下降;与模型组比较,治疗组ROS水平显著下降,细胞活性、ATP水平显著增加;与治疗组比较,抑制剂组细胞ROS水平显著上升,细胞活性、ATP水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论虎杖苷可以显著改善氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤,其机制可能与上调线粒体自噬有关。     

UPLC法同时测定金欣口服液中8种指标成分

目的 建立UPLC法同时测定金欣口服液中芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素8种指标成分的量。方法 采用UPLC法,Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）,乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,体积流量0.4 mL/min,梯度洗脱,检测波长280 nm,柱温35 ℃;分别对线性关系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率进行考察。结果 被测定的8种指标成分分别在选定的范围内线性关系良好,平均加样回收率99%～102%,RSD均小于3.1%。结论 本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于金欣口服液的质量控制。     

高效液相色谱法同时测定维血宁中虎杖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄

目的建立雏血宁中虎杖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚4种化学成分的含量测定的HPLC方法。方法采用Kromasil C18（4．6mm×250mm,5p,m）色谱柱;0．1％的磷酸溶液和乙腈进行梯度洗脱;柱温30℃;流速1mL·min^-1;检测波长223nm。结果在HPLC法中,虎杖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚的线性范围分别是：0．009～0．072mg·mL^-1（r=0．9991）、0．048～0．386mg·mL^-1（r=1．0000）、0．027～0．214mg·mL^-1（r=1．0000）、0．024～0．188mg·mL^-1（,=1．0000）;平均回收率分别为98．8％、97．1％、95．5％、96．8％,RSD分别为0．6％、0．4％、0．3％、0．4％。结论所建立的方法专属性强,重复性好,可用于维血宁的质量控制。     

虎杖苷对体外培养乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞增殖的影响

目的研究虎杖苷对新生乳鼠离体培养心肌细胞和成纤维细胞增殖的影响及其抗氧化作用。方法剪取新生SD大鼠左心室,采用差速贴壁法分离并培养心肌细胞和成纤维细胞,将培养成功的成纤维细胞和心肌细胞均分为5组,即正常对照组、虎杖苷对照组(10-4mol/L)、模型组[10-6mol/L异丙肾上腺素(ISO)]、虎杖苷低浓度组(10-5mol/L+ISO 10-6mol/L)和虎杖苷高浓度组(10-4mol/L+ISO 10-6mol/L),进行相应干预。孵育2天后,采用考马斯亮兰法测定心肌细胞蛋白质含量,并测定其超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;测定成纤维细胞增殖及其培养液中SOD和GSH-Px及NO浓度。结果与正常对照组比较,模型组可诱导心肌细胞蛋白含量增多,明显降低SOD及GSH-Px活力(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高低浓度组心肌细胞蛋白含量明显降低,且SOD及GSH-Px活力明显升高(P0.05);虎杖苷高浓度对GSH-Px活性的升高明显较低浓度强,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组可诱导成纤维细胞增殖,明显降低SOD及GSH-Px活力和NO含量(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高浓度组能抑制成纤维细胞的增殖,显著升高NO含量和SOD及GSH-Px活力(P0.05)。结论虎杖苷对ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大和成纤维细胞增殖有一定对抗作用,其作用机制与其抗氧化作用以及影响NO生成有关。     

虎杖苷药理作用及机制研究进展

虎杖苷是从传统中药虎杖中分离出的一种多酚类单体化合物，是虎杖的主要有效成分，具有多种药理活性。近年来，有关虎杖苷药理作用及机制的研究日益增多。现代药理学研究表明，虎杖苷对神经系统，心脑血管系统，呼吸系统等均有保护作用，对肝、肾、肺等器官亦作用明显，其调节血糖血脂的作用对抗动脉粥样硬化效果显著；其抗纤维化的作用对肝、肾保护效果明显。虎杖苷对多种肿瘤细胞均有抑制作用，可抑制肿瘤细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡。虎杖苷还具有抗炎，保护骨髓，促进创面愈合，抗辐射等药理活性。笔者查阅有关虎杖苷的药理作用文献发现其单个药理作用机制往往受多靶点蛋白、多条通路调控，但大多还未明确其作用靶点，有待深入研究。该文就近5年来有关虎杖苷的药理作用及机制研究进展进行归纳总结，并对其研究现状及未来研究方向提出相关建议，以期拓宽科研者的研究思路，加快明确其发挥药效作用的靶点，为虎杖苷的进一步开发利用提供科学的理论依据。     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

Protective effects of polydatin against CCl4-induced injury to primarily cultured rat hepatocytes

ＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＰｏｌｙｇｏｎｕｍｃｕｓｐｉｄａｔｕｍＳｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ．（Ｐｏｌｙｇｏｎａｃｅａｅ）ｉｓａｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｄｒｕｇ,ｗｉｔｈｂｉｔｅｒｔａｓｔｅａｎｄｃｏｌｄｎａｔｕｒｅ．Ｉｔｍａｉｎｌｙ...     

虎杖苷对心肌细胞收缩性的影响

目的　探讨虎杖苷对心肌细胞收缩性的直接影响及其作用机制。方法　原代培养幼鼠心肌细胞 ,利用计算机图象分析系统测定虎杖苷处理后心肌细胞收缩频率和收缩幅度的变化。结果　当加入 0 1mmol·L-1虎杖苷到培养细胞中时 ,心肌细胞收缩频率显著加快 ,收缩幅度增强 ;当加入洋地黄类药物西地兰时 ,心肌细胞收缩幅度增强 ,搏动频率也加快。而加入D Hanks液的对照组心肌细胞搏动情况在 30min内未发生变化。给予虎杖苷后 ,心肌细胞内钙荧光强度呈现进行性上升趋势 ,上升到最初的 2 2 4 0 %± 2 4 33%。结论　虎杖苷可能通过促使心肌细胞内钙离子浓度升高而直接增强心肌细胞的收缩性     

虎杖苷对大鼠脑出血性损伤脑脊液中兴奋性氨基酸动态变化的影响

目的:观察虎杖苷对大鼠脑出血损伤后脑脊液中兴奋性氨基酸动态变化和脑组织含水量的影响,探讨虎杖苷对脑出血损伤的治疗作用及其作用机制。方法:采用微透析-高效液相色谱法建立天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(G lu)的测定方法;用Ⅶ型胶原酶诱导建立大鼠脑出血模型,观察虎杖苷对大鼠脑出血后0,6,12,24,36,48,60,72,84,96,108 h脑脊液内天门冬氨酸、谷氨酸含量的动态变化,并断头取脑检测脑组织含水量。结果:天门冬氨酸和谷氨酸含量在大鼠脑出血后24 h内迅速升高,并于24 h达到最高,随后逐渐开始降低。虎杖苷治疗后,天门冬氨酸和谷氨酸含量均上升缓慢,分别在12~72,6~84 h与同时段模型组比较有显著性差异(P0.01或P0.05),84,96 h后与同时段模型组相比无显著性差异。与假手术组比较,模型组脑含水量明显较高,虎杖苷组则明显降低(P0.01)。结论:虎杖苷能抑制脑出血后脑脊液中ASP,G lu含量升高,能明显抑制脑出血造成的脑水肿,表明虎杖苷抗脑出血损伤的作用机制可能与其抗脑出血后兴奋性氨基酸含量的升高有关。     

众生丸生产过程影响因素探讨(二)

目的:探讨众生丸提取工艺过程中所存在的问题及解决方法.方法:采用HPLC测定众生丸提取工艺过程中咖啡酸、芍药苷、虎杖苷、黄芩苷的提取率,分析众生丸生产过程中提取工艺的影响因素.结果:黄芩、虎杖、赤芍等致密结构的根茎类药材应做必要的前处理,同时采用沸水投料是保证苷类成分提取率的重要条件.结论:研究结果中为众生丸大生产推广提供参考.