黑种草子总皂苷对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的：研究黑种草子总皂苷提取物（TSNG）对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、凋亡和自噬等生物学行为的影响。方法：将SiHa细胞分为空白对照组和不同浓度（0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.4、1.6、1.8 mg/mL）的TSNG作用组,以及10 μmol/L羟氯喹（HCQ）干预组;四甲基噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的生长抑制率;划痕实验检测细胞的相对迁移率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核凋亡现象;单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察细胞内自噬体数量;Western blot实验检测LC3-Ⅱ和p62蛋白表达。结果：与空白对照组相比,TSNG对细胞的生长有抑制作用且呈剂量效应关系（P<0.05或0.01）;0.9、1.0、1.1 mg/mL TSNG处理组细胞相对迁移率分别为（20.40±2.49）%、（15.14±0.39）%、（5.05±1.04）%,均低于空白对照组的（36.63±2.52）%（P<0.01）;1.0、1.2、1.4 mg/mL TSNG处理组细胞的凋亡率分别为（39.10±0.22）%,（68.37±0.58）%和（80.93±0.12）%,均高于空白对照组的（10.73±0.82）%（P<0.05或0.01）;与空白对照组比较,TSNG处理组细胞核表现出凋亡现象细胞数量增多,且细胞内自噬体数量增加,LC3-Ⅱ和p62蛋白表达上升（P<0.05或0.01）;相较于TSNG作用组,HCQ预处理组LC3-Ⅱ蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论：TSNG对SiHa细胞体外增殖、迁移表现出明显的抑制作用,并在诱导细胞凋亡的同时阻断细胞自噬流。     

人参茎叶皂甙对吗啡耐受性的影响

本文研究了人参茎叶皂甙对吗啡耐受性产生的影响。实验结果表明，人参茎叶皂甙５０ｍｇ／ｋｇ灌胃给药能够明显对抗吗啡引起的小鼠自主活动增强现象，并抑制吗啡镇痛（小鼠对夹尾压痛）的耐受作用。长期应用吗啡对小鼠体重增长抑制的作用逐渐减弱。人参茎叶皂甙能够加强吗啡抑制体重增长的作用。上述结果提示，人参茎叶皂甙对吗啡耐受性的产生有一定的抑制作用     

三七皂甙对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨三七皂甙对大鼠脑缺血再灌注后的保护作用。方法采用线栓法建立鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型。于缺血2h再灌注22h,测定脑梗死体积并观察血脑屏障破坏的程度。结果再灌注后22h,三七皂甙治疗组可有效降低脑梗死体积,明显减轻脑缺血区血脑屏障破坏的程度。结论三七皂甙对脑缺血再灌注有确切的脑保护作用,并能减轻脑缺血再灌注对血脑屏障破坏的程度。     

人参二醇皂苷对小鼠颈椎稳定性异常致脑功能损伤的影响

目的观察人参二醇皂苷（PDS）对小鼠颈椎稳定性异常引起智力下降和脑组织损伤的影响。方法44只小鼠随机分为正常对照组、模型组、PDS高剂量组和低剂量组各11只，手术制备小鼠颈椎失稳模型，PDS腹腔注射（高剂量组：14mg/kg；低剂量组：7mg/kg）50d，采用水迷宫、跳台实验方法检测小鼠学习记忆能力；用试剂盒检测脑组织超氧化物岐化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。结果水迷宫实验：与模型组比较，PDS高剂量组小鼠游全程时间缩短、错误次数减少（P〈0.05）；跳台实验：与模型组比较，PDS高剂量组小鼠反应期明显缩短、错误次数明显减少（P〈0.01）；PDS组小鼠脑组织SOD、LDH活性明显增强（P〈0.01），MDA、NO含量降低（P〈0.01，P〈0.05）。结论人参二醇皂苷对小鼠颈椎稳定性异常引起的学习记忆能力下降和脑损伤具有一定的改善和保护作用。     

A mathematical model for quality evaluation of total saponins of Panax japonicas based on hypolipidemic activity

Objective: The chemical finger printing-based methods for evaluating TCMs quality can report partial of TCMs quality without linking to effective constituents. In this study, a mathematical model was established for the quality evaluation of total saponins of Panax japonicus(TSPJ), a folk medicine in China and Japan for treating diseases, through coupling the dynamic changes of chemical constitutions with corresponding activities.Methods: High-performance liquid chromatography(HPLC) fingerprints were applied to establish the chromatographic database of TSPJ. The associated hypolipidemic activity database was determined by TG assay using Hep G2 cell model. Correlation analyses of two databases were performed by partial least squares(PLS) for calculating regression coefficients, and the interval value of YZL value(the ratio of positive and negative peak-to-peak area coefficient) closely related to hypolipidemic activity was refined by the formula of Norminv function to value the quality of TSPJ.Results: In this study, the chromatographic data of 16 common peaks were obtained from 20 batches of TSPJ. After the estimate by this mathematical evaluation model, seven peaks were positively correlated with hypolipidemic activity, and nine peaks were negatively correlated with hypolipidemic activity.When the YZL value was less than 0.7861, the quality of sample was inferior, while YZL value was more than 6.6992, and the quality of samples was superior. The quality of another ten batches of TSPJ was further assessed to verify this method.Conclusion: These results indicated that the established model could be usefully applied to evaluate the quality of TSPJ in the hypolipidemic activity.     

基于AMPK/SREBP1信号通路探究黄芪葛根汤有效组分对糖尿病大鼠脂代谢及炎症反应的作用机制

目的探讨黄芪葛根汤有效组分及其配伍对糖尿病大鼠肝脏脂代谢及炎症反应的作用机理。方法将86只SD大鼠随机分为正常组、模型组、金芪降糖片组、总黄酮组、总皂苷组、总黄酮与总皂苷组。一次性腹腔注射STZ(按46 mg·kg^-1)诱导糖尿病大鼠模型。生化分析仪检测TG、CHO的水平,Real-time PCR法检测肝组织AdipoR1、AMPK、P38MAPK、PPARγ、LXRα、SREBP1mRNA表达。结果同正常组比较,模型组各项指标均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,总黄酮能显著降低血清中CHO的浓度;总黄酮、总皂苷均能降低TG水平,且能增强AdipoR1、LXRαmRNA降低P38MAPK、SREBP1mRNA的基因表达。对于促进AMPK、PPARγmRNA基因的表达,总黄酮的作用更显著,总皂苷及两药的交互作用不明显。结论总黄酮发挥降脂抗炎作用可能主要与AMPK、PPARγmRNA表达有关;总皂苷的降脂抗炎作用可能主要与P38MAPKmRNA表达有关;两组分配伍的作用可能与激活AMPK/SREBP1信号传导通路有关。     

人参茎叶总皂苷的人肠内细菌生物转化

目的:研究人参茎叶总皂苷的人肠内细菌生物转化。方法:采用液相色谱-电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱法(LC-ESI-Q-TOF-MS)负离子监测模式,对人参茎叶总皂苷样品和人肠内细菌转化的人参茎叶总皂苷样品进行定性分析,将采集的原始数据导入分析软件进行碎片和相对分子质量匹配,根据高分辨质谱信息推导可能的裂解碎片;部分化合物通过与对照品比对进行解析,比较2个样品中人参达玛烷三萜化合物的差别。结果:在人参茎叶总皂苷样品中共鉴定出83个化合物,在人肠内细菌转化人参茎叶总皂苷的样品中共鉴定出67个化合物,包括区别性化合物20(S)-25-OH-原人参三醇[20(S)-25-OH-PPT]、20(R)-25-OH-PPT、人参皂苷O(G-O)、绞股蓝皂苷Ⅸ、绞股蓝皂苷ⅩⅦ、25-OH-G-Rh₂、20(22)E-G-Rg₉、G-Rs₃、20(R)-G-Rs₃、G-Mc、G-Y、G-Mx、20(S)-25-OH-原人参二醇[20(S)-25-OH-PPD]、G-CK和G-CK异构体。结论:人参茎叶总皂苷经人肠内细菌生物转化后产生了低极性的达玛烷型人参三萜类化合物;提示人参茎叶总皂苷经人肠内细菌生物转化后更利于其吸收进入系统循环。     

基于SNP双峰法的人参花 西洋参花 三七花及其混合物的快速鉴定

目的:建立人参花、西洋参花、三七花及两两之间混合物的快速鉴定方法。方法:收集市售人参花、西洋参花和三七花共计22份,获取样品内转录间隔区2(ITS2)序列。通过数据比对发现,在19~47 bp存在这3种花的单核苷酸多态性(SNP)位点,据此建立混合粉末的双峰法检测方法,判断混合物的物种组成。结果:市售22份商品的DNA条形码序列经BLAST鉴定均为正品,但经SNP位点分析发现,有2份西洋参花样品(S1和S7)SNP位点处出现双峰[胸腺嘧啶(T)/胞嘧啶(C)]、(C/T),判断掺杂有人参花。结论:SNP双峰法可以作为BLAST分析的补充手段,应用于混合物的鉴定,为花茶类产品的市场监管提供参考。     

人参二醇组皂苷对再生障碍性贫血小鼠造血组织MAPK/ERK信号通路的诱导作用

目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对免疫介导型再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路蛋白激酶及脾脏调节性T细胞的诱导作用,探讨其治疗再障的作用机制。方法:用[60Co]-γ射线5.0 Gy全身照射BALB/c小鼠,后经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液,制备免疫介导型再障小鼠模型。60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,PDS低、中、高剂量组,环孢素组。不同浓度药物灌胃治疗14 d测定各组小鼠外周血象,观察骨髓病理切片,Western blot法及免疫组织化学法测定骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平,流式细胞术检测脾脏调节性T细胞比例。结果:再障小鼠外周血全血细胞减少,骨髓呈抑制状态;PDS治疗能够显著升高再障小鼠外周血象,增加脾脏调节性T细胞比例,呈剂量依赖性(P0.05)。PDS中、高剂量组显著上调骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(P0.05)。结论:PDS能有效促进造血,上调再障模型小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路多种蛋白激酶的表达,可能是PDS促进骨髓造血功能恢复的作用机制之一。另外,PDS对再障模型小鼠的免疫功能有一定的调节作用。     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。