miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

粪便SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化检测在大肠肿瘤筛查中的临床应用

目的 评估检测大肠肿瘤患者粪便中SEPT-9和微RNA（miRNA）-34b/c基因甲基化对大肠肿瘤筛查的临床性能。方法 采用病例对照研究方法,使用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法检测大肠肿瘤患者（大肠癌组35例、大肠腺瘤组47例）和正常对照人群（正常对照组52名）粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因是否存在甲基化,来评估其筛查大肠肿瘤的性能。结果 大肠癌组SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率分别为68.6%、71.4%,大肠腺瘤组分别为57.4%、63.8%,正常对照组分别为9.6%、11.5%。3组的SEPT-9、miRNA-34b/c基因甲基化阳性率比较差异均有统计学意义（²_SEPT-9 = 37.185,²_miRNA-34b/c = 40.040,P均< 0.001）,利用Bonferroni法进行两两比较,大肠癌组和大肠腺瘤组的甲基化阳性率比较差异无统计学意义,两者与正常对照组比较差异均有统计学意义（P均< 0.001）。3组联合检测SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率为88.6%、76.6%、13.5%,大肠癌组和大肠腺瘤组联合检测的甲基化阳性率均高于SEPT-9单基因检测和miRNA-34b/c单基因检测（P均< 0.05）。结论 检测粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化具有效好的大肠肿瘤筛查性能,或许可作为大规模人群筛查大肠肿瘤新的生物标志物组合;多基因甲基化联合检测筛查的性能优于单基因。     

Inhibition of miR-93 promotes interferon effector signaling to suppress influenza A infection by upregulating JAK1

Type I interferons play a critical role in host defense against influenza virus infection. Interferon cascade induces the expression of interferon-stimulated genes then subsequently promotes antiviral immune responses. The microRNAs are important regulators of innate immunity, but microRNAs-mediated regulation of interferon cascade during influenza infection remains to be fully identified. Here we found influenza A virus (IAV) infection significantly inhibited miR-93 expression in alveolar epithelial type II cells through RIG-I/JNK pathway. IAV-induced downregulation of miR-93 was found to upregulate JAK1, the target of miR-93, and then feedback promote antiviral innate response by facilitating IFN effector signaling. Importantly, in vivo administration of miR-93 antagomiR markedly suppressed IAV infection, protecting mice form IAVs -associated death. Hence, the inducible downregulation of miR-93 feedback suppress IAV infection by strengthening IFN-JAK-STAT pathway via JAK1 upregulation, and in vivo inhibition of miR-93 bears considerable therapeutic potential for suppressing IAV infection.     

皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的影响

目的探讨皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达以及其对促血管新生因子VEGF-A和VEGFR-1的影响。方法 Northern blotting检测原代人黑素瘤细胞、黑素瘤细胞株A375和原代人表皮黑素细胞miRNA-34c表达。构建miRNA-34c基因过表达与基因敲低的黑素瘤细胞株A375细胞系即高表达miRNA-34c组和低表达miRNA-34c组,以空载体转染黑素瘤细胞株A375作为空载体对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性。qRT-PCR和Western blotting分别检测各组VEGF-A、VEGFR-1 mRNA和蛋白表达。结果与原代人表皮黑素细胞相比,黑素瘤细胞株A375和原代人黑素瘤细胞中miRNA-34c的表达降低(P<0.05)。高表达miRNA-34c组、低表达miRNA-34c组和空载体对照组细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)。高表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体对照组降低(P<0.05)。低表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体组升高(P<0.05)。结论 miRNA-34c在皮肤黑素瘤中呈现特异性下调,miRNA-34c可能通过对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的下调参与皮肤黑素瘤的发生与发展。     

miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤中的表达及意义

目的miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤的表达及其诊断意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术分别检测11例MB患者癌组织(实验组)和癌旁组织(对照组)的miRNA-9和miRNA-218表达水平并进行统计分析。结果MB患者组织中miRNA-9相对表达量(0.44±0.40)低于癌旁组织,miRNA-218相对表达量(0.55±0.32)低于癌旁组织,两者差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-9和miRNA-218的表达与肿瘤大小、分期、是否转移无关(P>0.05)。结论MB患者组织中miRNA-218和miRNA-9均表达下降,提示其参与了MB的发病机制并在其中发挥重要作用,且两者可成为MB有效治疗靶点。     

miR-218在大肠癌中的表达及其临床意义

目的研究miR-218在大肠癌与正常组织中表达的差异。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测60例大肠癌及相应正常组织中miR-218的表达水平,计算其相对表达量。结果60例大肠癌组织中miR-218的相对表达量为0.33±0.12,显著低于对照组,miR-218的表达差异有统计学意义(P<0.05);miR-218在不同性别、年龄、肿瘤大体形态、组织学类型、临床分期、浸润深度、肿瘤分化程度上表达差异无统计学意义(P>0.05),有淋巴结转移较无淋巴结转移者表达量低(P<0.05)。结论 miR-218在大肠癌中呈低表达,其表达水平越低可能提示淋巴结转移越早,miR-218可能作为抑癌基因参与肿瘤的发生、发展。     

唾液中miRNA-21对早期喉鳞状细胞癌的诊断价值

目的 初步探讨喉鳞状细胞癌患者唾液中miRNA-21对早期喉鳞状细胞癌（LSCC）的诊断价值。方法 收集20例喉鳞状细胞癌患者和15例喉息肉患者及15例健康对照组的唾液,采用RT-PCR定量检测比较miRNA-21的相对表达情况,监测比较6例LSCC患者手术前和手术后6月的miRNA-21的变化。结果 喉鳞状细胞癌患者的唾液中miRNA-21的表达水平较健康对照组显著上调（P=0.036）。ROC曲线分析miRNA-21对LSCC的诊断价值发现,唾液中miRNA-21在ROC曲线下面积 （AUC）为 0.792（95%CI: 0.5353~0.885, P=0.036）。手术后6月的miRNA-21相对表达水平较手术前明显下降（P=0.041）。结论 喉鳞状细胞癌患者唾液中的miRNA-21存在高表达,将来可能有望成为早期诊断喉鳞状细胞癌的指标。     

miRNA-302d在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系

目的:探讨miRNA-302d在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法:应用Real-time PCR方法检测42例子宫内膜癌组织及42例正常子宫内膜组织中miRNA-302d的相对表达量,并分析miRNA-302d在不同临床病理参数的子宫内膜癌组织中表达的差异性。结果:miRNA-302d在子宫内膜癌组织中的表达水平低于其在正常子宫内膜组织中的表达水平(P=0.020<0.05)。手术分期为Ⅰ期与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的子宫内膜癌组织中miRNA-302d的表达存在统计学差异（P=0.034<0.05）;在不同的肌层浸润深度（深度＜1/2肌层、深度≥1/2肌层）的子宫内膜癌组织中miRNA-302d的表达具有统计学差异（P=0.006<0.05）;而miRNA-302d在子宫内膜癌组织中的表达水平与组织学分化程度、淋巴转移及脉管浸润等临床病理参数之间无明显统计学关系（P>0.05）。结论:miRNA-302d在子宫内膜癌组织中的表达明显低于其在正常子宫内膜组织中的表达,并且与不同手术病理分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期）、肌层浸润深度（深度＜1/2肌层、深度≥1/2肌层）有关;提示其可能在子宫内膜癌组织中发挥抑癌基因的作用。