miR-101在维吾尔族妇女子宫颈癌中的表达及其与COX-2的关系

目的研究miR-101与其靶基因环氧合酶-2(Cyclooxygenase,COX-2)在维吾尔族妇女慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)及子宫颈癌组织中的表达,以探讨miR-101及其与COX-2的关系。方法应用锁定核苷酸原位杂交技术(LNA-ISH)检测维吾尔族妇女慢性宫颈炎、CINⅠ～Ⅲ和子宫颈癌组织中miR-101的表达情况;应用免疫组化Envision两步法检测COX-2在维吾尔族妇女慢性宫颈炎,宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及子宫颈癌组织中的表达情况,并进行相关性分析。结果 miR-101在慢性宫颈炎、CINⅠ～Ⅲ及子宫颈癌中的表达率分别为80%、72%、48%、24%和8%,差异具有统计学意义(χ2=37.828,P=0.000)。慢性宫颈炎组织中未见COX-2阳性表达;CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ以及子宫颈癌组织中COX-2阳性表达率分别为12%、36%、60%、84%,差异具有统计学意义(χ2=28.846,P<0.05)。miR-101与其靶基因COX-2呈负相关性(R=-0.997,P=0.000)。结论 miR-101与其靶基因COX-2可能与子宫颈癌的发病机制有关。     

HeLa细胞中miRNA-214靶基因Mek3的确定

目的 探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用.方法 通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因,合成miRNA-214和对照序列,将miRNA-214、对照序列、Mek3的3'非翻译区(3' UTR)以及突变的Mek3 3'UTR分别克隆到表达载体上,转染HeLa细胞,转染48 h后提取蛋白,检测绿色荧光蛋白的表达水平; HeLa细胞转染miRNA-214后,Trizol抽提RNA,通过荧光定量PCR检测Mek3 mRNA的表达水平;Western印迹检测Mek3的蛋白表达水平.经过以上实验从mRNA和蛋白水平上验证了在HeLa细胞中miRNA-214对靶基因Mek3的作用效应.结果 生物信息学方法显示miRNA-214和Mek3存在可能的结合位点.经过实验验证了miRNA-214可以下调Mek3的mRNA和蛋白水平.结论 miRNA-214可以负调节靶基因Mek3的表达.     

反义miRNA-221/222上调p27kip1抑制胶质瘤细胞生长的体外研究

目的 探讨敲低miRNA-221/222表达上调p27kip1抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长的效果及机制.方法 脂质体共转染反义miRNA-221/222下调U251人脑胶质瘤细胞株miRNA-221、miRNA-222的表达.使用Northern blot方法 鉴定转染后U251细胞miRNA-221、miRNA-222表达水平下调;MTT法评价反义miRNA-221/222抑制U251细胞生长效果;流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布;Western blot分析p27kip1蛋白的表达变化.结果 Northern blot显示反义miRNA-221/222共转染组使miRNA-221、miRNA-222的表达水平明显下降.反义miRNA-221转染组仅使miRNA-221的表达水平明显下降,反义miRNA-222转染组仅使miRNA-222的表达水平明显下降.转染无意序列组及对照组的miRNA-221、miRNA-222表达水平没有改变.MTT结果 显示反义miRNA-221/222共转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组、转染无意序列组、转染反义miRNA-221组、转染反义miRNA-222组.流式细胞术检测可见反义miRNA-221/222共转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞且明显高于其他各组.Western blot显示反义miRNA-221/222共转染组的p27kip1蛋白表达明显上调.结论 反义miRNA-221/222通过上调p27kip1蛋白表达来抑制胶质瘤细胞U251的生长.     

miRNA-22在脂肪基质细胞体外脂向分化过程中的表达

背景：脂肪基质细胞在特定条件下可以向脂肪细胞分化, 然而,脂肪基质细胞脂向分化的分子机制仍不明确！ 目的：明确miRNA在脂肪基质细胞脂向分化过程中是否发挥作用及其可能机制。 设计、时间及地点：观察对照试验,于2007-10/2008-03在四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成。 材料：出生30 d健康雄性SD幼鼠8只,取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞。 方法:采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养。建立脂肪基质细胞体外脂向分化细胞模型,采用miRNA芯片技术筛选脂肪基质细胞向脂肪细胞方向分化的相关miRNA,使用实时定量聚合酶链反应技术对芯片结果进行验证。 主要观察指标：①细胞形态学。②PPARγ免疫细胞化学染色和油红O染色。③miRNA芯片结果。④实时定量聚合酶链反应结果。 结果: ①经显微镜下观察、油红O染色及PPARγ免疫细胞化学染色检测证实脂肪基质细胞已经脂向分化。②miRNA芯片发现诱导组中miRNA-22的表达量呈下降趋势。③实时定量聚合酶链反应结果证实miRNA-22的表达量与对照组相比显著减少(P < 0.05)。 结论: miRNA-22在脂肪基质细胞脂向分化后的表达有显著降低,提示miRNA-22可能参与脂肪基质细胞的脂肪分化调控过程,生物信息学分析提示,该过程可能通过对其靶基因MAPK7(ERK5)的调控而实现。     

TSG101蛋白表达与胃癌转移关系研究

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)在原发性胃癌、癌旁及其对应转移灶中表达情况,及与胃癌临床参数特别是转移的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测TSG101蛋白在67例原发性胃癌组织、癌旁及其中28例转移灶中表达情况,分析其在转移及非转移性胃癌原发灶中表达水平的差异与患者临床病理资料的相关性,并分析其在所有67例原发灶与28例转移灶表达水平的差异。结果:TSG101在胃癌组织阳性表达率高于其对应癌旁组织(P<0.05);在原发灶中阳性表达率与其分化及转移呈正相关(P<0.05),而与性别及分期间差异无统计学意义(P>0.05);在转移灶中阳性表达率高于原发灶(P<0.05)。结论:TSG101在胃癌组织中表达水平与胃癌分化及转移呈正相关,提示可能在胃癌转移过程中起着重要的作用。     

miRNA-122a靶基因预测及生物信息学分析

目的:利用基因芯片技术分析肝癌HepG2细胞和正常肝上皮LO2细胞中miRNA的表达,并对HepG2细胞中低表达的miRNA-122a进行靶基因预测及相关生物信息学分析,为以miRNA-122a为靶点的基因治疗提供理论和实验基础.方法:利用基因芯片技术检测HepG2细胞和LO2细胞中miRNA-122a表达水平,通过生物信息学预测miRNA-122a的靶基因,并对其靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway-analysis)和蛋白质相互作用网络分析.结果:与LO2细胞比较,miRNA-122a在HepG2细胞中呈低表达.miRNA-122a预测靶基因有1 104个,其靶基因集合功能分别富集于碳水化合物生物合成、核苷酸代谢、细胞因子受体结合、细胞周期等生物学过程(P<0.001);信号转导通路显著富集于JAK-STAT信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、ErbB信号通路、细胞周期等信号转导通路(P<0.001).结论:miRNA-122a在HepG2细胞中呈现低表达,miRNA-122a预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

miRNA-21与肿瘤相关研究新进展

小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程.研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关.本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述.     

Identification of differential and functionally active miRNAs in both anaplastic lymphoma kinase (ALK)+ and ALK? anaplastic large-cell lymphoma

Aberrant anaplastic lymphoma kinase (ALK) expression is a defining feature of many human cancers and was identified first in anaplastic large-cell lymphoma (ALCL), an aggressive non-Hodgkin T-cell lymphoma. Since that time, many studies have set out to identify the mechanisms used by aberrant ALK toward tumorigenesis. We have identified a distinct profile of micro-RNAs (miRNAs) that characterize ALCL; furthermore, this profile distinguishes ALK⁺ from ALK⁻ subtypes, and thus points toward potential mechanisms of tumorigenesis induced by aberrant ALK. Using a nucleophosmin-ALK transgenic mouse model as well as human primary ALCL tumor tissues and human ALCL-derived cell lines, we reveal a set of overlapping deregulated miRNAs that might be implicated in the development and progression of ALCL. Importantly, ALK⁺ and ALK⁻ ALCL could be distinguished by a distinct profile of “oncomirs”: Five members of the miR-17–92 cluster were expressed more highly in ALK⁺ ALCL, whereas miR-155 was expressed more than 10-fold higher in ALK⁻ ALCL. Moreover, miR-101 was down-regulated in all ALCL model systems, but its forced expression attenuated cell proliferation only in ALK⁺ and not in ALK⁻ cell lines, perhaps suggesting different modes of ALK-dependent regulation of its target proteins. Furthermore, inhibition of mTOR, which is targeted by miR-101, led to reduced tumor growth in engrafted ALCL mouse models. In addition to future therapeutical and diagnostic applications, it will be of interest to study the physiological implications and prognostic value of the identified miRNA profiles.