食管癌3p24等位基因LOH及其扩增产物克隆的研究

目的；研究3p24EAβMD位点与食管癌的关系。为寻找该位点附近可能存在的抑癌基因奠定基础。方法：采用PCR—RFLP法检测45例食管癌患者3p24位点杂合缺失情况。并对该片段进行克隆。结果：在22例食管癌信息个体中共检出9例杂合缺失。并通过序列分析可知变化为点突变。结论：3p24EAβMD较高的杂合缺失率显示该位点附近可能存在潜在的抑癌基因。     

人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(+) /P4 0 和P( ) /P3 5,然后再将二者串联克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+)中得到P(+) /IL 12质粒。脂质体转染HepG2后 2 4,48hELISA检测细胞培养上清内hIL 12蛋白质表达。结果 :P(+) /IL 12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确 ,序列无突变 ;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL 12蛋白质。结论 :成功构建P4 0 和P3 5双亚基真核共表达质粒———P(+) /IL 12 ,为模拟hIL 12生理表达方式 ,简化hIL 12基因治疗操作奠定了基础。     

胃癌组织中EphB2受体胞外区结构域的克隆和序列测定

目的对胃癌组织中酪氨酸蛋白激酶EphB2受体胞外区结构域进行克隆。方法从胃癌患者手术切片标本中提取RNA，进行RT—PCR，将扩增片段克隆人pUC19质粒，进行测序及酶切鉴定。结果克隆片段序列正确。结论为进行表达、筛选与之相互作用的蛋白，阐明其生理功能打下基础。     

核酸杂交反应中影响因素分析

以光敏生物素标记的R3 cDNA克隆为模型,采用正交设计的方法,对影响核酸杂交反应的主要因素:杂交反应温度,反应时间,探针浓度及甲酰胺浓度作了综合性分析。当探针浓度为800μg/L,甲酰胺浓度为10mol/L,50℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度(10pg)。     

B淋巴细胞克隆清除治疗类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎（RA）是一种以关节滑膜炎症为主要病理改变的慢性进展性自身免疫性疾病。有较高的致残率。随着对滑膜中各种炎症细胞包括巨噬细胞、纤维母细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞以及相关细胞因子在致病机理的深人认识，针对免疫细胞或免疫分子的靶向治疗将RA引人了生物治疗的新阶段。目前，针对肿瘤坏死因子α（TNFα）的单克隆抗体（etanercept，infliximab，adalimummab）、白介素1受体拮抗物（IL-1Ra，anakina）已经上市，并取得了较好的疗效。近来研究发现，B淋巴细胞在RA滑膜炎的免疫致病机理中有非常重要的作用，B淋巴细胞克隆清除对于RA的治疗是又一项新的生物治疗的突破。本文旨在就B淋巴细胞在RA滑膜炎发病机理、B淋巴细胞克隆清除对RA的治疗作用以及其安全性方面的研究进展进行综述。     

凋亡素原核表达载体的构建和表达

目的 构建凋亡素原核表达系统，以制备抗原物质凋亡素融合蛋白。方法 通过PCR方法，以pcDNA-VP3质粒为模板，扩增出凋亡素VP3基因。将其克隆到原核表达载体pET-DsbA的多克隆位点，构建成凋亡素的高效原核表达栽体pET-DsbA-VP3，将该质粒转化到大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS中，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside，IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果 转化有凋亡素原核表达载体pET-DsbA-VP3的大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS经IPTG诱导后，聚丙烯酰胺凝胶电泳出现38300的目的蛋白条带。结论 凋亡素原核表达栽体pET-DsbA-VP3能高效表达出凋亡素融合蛋白。     

吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库的构建

目的:构建吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库.方法:建立大鼠吗啡躯体依赖模型后,取鼠脑进行总RNA的抽提、mRNA的纯化,以mRNA为模板合成第一链cDNA后用LD-PCR方法合成双链cDNA,用限制性内切酶SfiⅠA、B分别双酶切双链cDNA与pTRG载体,连接后的cDNA文库转化XL1-Blue MRF′ Kan 超级感受态并收菌,完成cDNA文库构建.结果与结论:PCR结果显示,cDNA片段连接效率＞90%,cDNA插入片段在1 kb左右.吗啡依赖大鼠脑cDNA文库总容量为3.05×106,满足下一步细菌双杂交文库筛选要求.     

鼠髓样白血病细胞株NFS-60不依赖细胞的克隆

目的构建诱导型表达载体pTKS3-CAT，并转染人表达G-CSF受体的NFS-60不依赖细胞，将粒细胞集落刺激因子（G-CSF）依赖的细胞株鼠髓样白血病细胞株NFS～60，筛选为NFS-60不依赖细胞的克隆。方法在培养体系中加入0．5-10ng/ml浓度的rhG-CSF，培养、传代。结果得到NFS-60不依赖细胞株的克隆，其细胞表面包含G-CSF相应受体，而增殖曲线不依赖于G-CSF因子浓度。结论克隆NFS-60不依赖细胞作为工程细胞用于G-CSF样活性化合物发现的研究。     

Construction of Eukaryotic Expression Plasmid of Human PRX3 and Its Expression in HEK-293FT Cells

To construct the eukaryotic expression plasmid of human PRX3 and measure its expression in the HEK-293FT cells, the full-length coding region of human PRX3 was cloned by PCR and inserted into the eukaryotic expression vector pcDNA4-Xpress (A). HEK-293FT cells were transiently transfected with the recombinant plasmid. Western blot and immuofluorescence were used to detect the expression of the fusion protein. In the experiment, restriction analysis identified the construction of the recombinant plasmid and the inserted sequence was identical with that published on GenBank. Western blot and immunofluorescence confirmed the expression of the recombinant protein in transfected HEK-293FT cells. It was concluded that the eukaryotic expression plasmid of human PRX3 was constructed successfully and the recombinant could he expressed efficiently in HEK-293FT cells, which provides a sound basis for the further study on human PRX3.