分离肝细胞纯化培养方法的比较研究

目的 评价一种可提高肝细胞纯度和存活率的分离培养方法。方法 以体外两步胶原酶灌流法分离肝细胞,然后将其分成两组,对照组在接种培养前不经进一步处理,试验组则在应用适宜的Percoll梯度液离心纯化之后再行培养。藉台盼蓝拒染法比较两组肝细胞的存活率,采用MTT法动态比较两组肝细胞的增殖状态,在相差显微镜下观察细胞的纯度和形态。结果 未经进一步纯化处理的猪肝细胞存活率为90％±5％,鼠肝细胞存活率为80％±5％,两者纯度均约90％;经Percoll梯度液离心纯化后,其高活力肝细胞比率均提高至98％±2％,纯度可达99％以上。从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,试验组比对照组肝细胞的时间有所缩短。结论 用Percoll梯度液纯化新分离肝细胞,可提高肝实质细胞的活力与纯度。     

Establishment of Germ-line Competent C57BL/6J Embryonic Stem Cell Lines

Objective To establish C57BL/6J embryonic stem （ES） cell lines with potential germ- line contribution Methods ES cells were isolated from blastocyst inner cell mass of C5 7BL/6J mice, and cultured for 15 passages, and then injected into blastococels of ICR mice blastocysts to establish chimeric mice. Results Three ES cell lines （mC57ES1,mC57ES3, mC57ES7） derived from the inner cell mass of C57BL/6J mice blastocysts were established. They were characteristic of undifferentiated state, including normal XY karyotype, expression of a specific cell surface marker “stage-specific embryonic antigen-I” and alkaline phosphatase in continuous passage. When injected into immunodeficient mice, mC57ES1 cells consistently differentiated into derivatives of all three embryonic germ layers. When mC57ES1 cells were transferred into ICR mice blastocysts, 4 chimeric mice have been obtained. One male of them revealed successful germ-line transmission. Conclussion We have obtained C57BL/6J ES cell lines with a potential germ-line contribution, which can be used to generate transgenic and gene knock-out mice.     

大鼠成体心肌细胞的分离和培养

目的: 探索稳定的大鼠成体心肌细胞的分离和培养方法. 方法: 应用主动脉逆行生物酶(5 g/L胰蛋白酶及1 g/L胶原酶)灌流法分离大鼠成体心肌细胞,免疫荧光染色法鉴定分离的心肌细胞,比较有无血清培养对心肌细胞的影响. 结果: 心肌细胞的存活率为95%以上;存活细胞呈杆状,形态完整,长宽比约为4～6∶ 1;无血清培养心肌细胞只能存活1 wk,形态不发生改变;而加血清培养心肌细胞可存活2 wk以上,但超微结构发生了改变,且不同血清浓度对成纤维细胞生长具有不同的作用. 结论: 主动脉逆行生物酶(胶原酶和蛋白酶)灌流法是比较理想的心肌细胞分离方法;血清对成体心肌细胞的培养起着重要作用.     

乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测

目的 为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法 采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果 采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×10~(10),活性超过95％。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。结论 采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。     

姬松茸多糖的抗炎作用

[目的 ]观察姬松茸多糖的抗炎作用 .[方法 ]制作二甲苯所致小鼠耳急性炎症模型、角叉菜胶所致大鼠关节肿胀模型、小鼠棉球肉芽肿亚急性炎症模型和大鼠佐剂关节炎模型 ,给予 4 0 ,80 ,16 0mg/kg的姬松茸多糖 .[结果 ]姬松茸多糖明显抑制上述各类型炎症反应 .[结论 ]姬松茸多糖具有抗炎作用 .     

3种培养基体外培养人芽囊原虫的效果观察

目的　观察人芽囊原虫在 3种培养基中的生长繁殖情况 ,以探讨最佳的培养方法。　方法　从大学生粪便中分离人芽囊原虫 ,转种至 3种不同培养基 ,定时观察人芽囊原虫的生长繁殖情况 ,根据原虫密度评价培养效果。　结果培养 96h后 ,Locke’s鸡蛋血清 (LES)双相培养基中的人芽囊原虫密度最高 ,改良Jones单相液体培养基次之 ,Locke’s琼脂血清 (LAS)双相培养基原虫密度最低 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;观察 3种培养基中的原虫密度高峰持续时间分别为 3 60h、96h和 72h ,最长存活时间分别为 5 5 2h、3 3 6h和 168h。　结论　Locke’s鸡蛋血清双相培养基较适用于人芽囊原虫体外增殖培养。     

囊胚期冷冻胚胎移植的临床应用探讨

目的探讨囊胚期冷冻胚胎移植的临床应用价值.方法对2002年10月～2003年12月在湘雅医院生殖医学中心接受囊胚培养并行囊胚期冷冻胚胎移植的病例进行分析,了解囊胚期与卵裂期冷冻胚胎解冻后的胚胎成活率、植入率及妊娠率.结果冷冻囊胚解冻后胚胎数、胚胎成活率、植入率和妊娠率与卵裂期冷冻胚胎无显著差别(P＞0.05),囊胚解冻后经15 h过夜培养,42枚中有22枚成活,其中8枚Ⅰ,Ⅱ级继续发育或囊胚腔扩张,3例获得妊娠,妊娠率为37.5%.结论囊胚期冷冻胚胎移植同样能达到卵裂期冷冻胚胎移植的临床效果,同时增加解冻与移植间隔时间可更好地选择冻融囊胚移植,对提高妊娠率可能有一定意义.     

还原型谷胱甘肽和L-NAME对体外培养的脊髓运动神经元的影响

目的 :探讨还原型谷胱甘肽 (GSH)和L NAME对体外培养的脊髓运动神经元的保护作用。方法 :不同浓度的GSH和L NAME作用于脊髓运动神经元 ,3d后计算存活率。并测量存活率高的两组和对照组的免疫细胞化学标本的神经元形态学指标。结果 :GSH 10mmol·L-1和L NAME 1× 10 -3 mol·L-1组存活率最高。两实验组轴突长度、树突总长度、树突分叉点数目和胞体面积高于对照组。结论 :抗氧化剂和NOS抑制剂可以提高脊髓运动神经元的存活率 ,促进神经元生长     

Postnatal formation of the blood-testis barrier in the rat with special reference to the initiation of meiosis

Summary Postnatal formation of the Blood-Testis Barrier (BTB) in the rat was studied by either fixation in hypertonic fixative or employing lanthanum tracer. After 15 days of age, meiosis has reached different stages of spermatogenesis in differnt zones of the seminiferous cords. Only in those parts where germ cells are in the pachytene stage of meiosis do Sertoli cells form an effective barrier or tight compartment. Between 16 and 19 days of age, final formation of the BTB, which is to be found in the adult rat testis, occurs by zygotene and then leptotene stages successively entering the tight compartment. Thus, formation of a BTB by Sertoli cells does not occur synchronously along the length of the seminiferous cord but in accordance with the stage of meiosis of the associated germ cells.