中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

外周血细胞DNA、RNA及血红蛋白同时提取法

采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞,经细胞裂解液处理,上清提取RNA,沉淀提取DNA,用分离液分离所得红细胞沉淀制备血红蛋白溶液。经对抽提物质量进行评价,发现3种提取物质量均高。本法能从少量外周血中同时分离DNA、RNA及血红蛋白,高效易操作,值得推广。     

白血病细胞p16基因突变分析

目的探讨ｐ１６基因突变在白血病发生中的作用及基因突变的机制。方法利用点突变检测仪、水平和垂直板电泳对ｐ１６基因的外显子１、外显子２的ＰＣＲ扩增产物作缺失和点突变分析。结果在白血病３５例临床标本中有２２例发生缺失突变，６例发生点突变，突变率约８０％。在２２例缺失突变病例中，有１０例为不完全缺失突变即有低于外显子５０９ｂｐ的扩增产物。结论ｐ１６基因含有“ＧＣ”ＤＮＡ重复顺序，易发生ＤＮＡ重组及易位和重排。在白血病发生中起重要作用     

As2O3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测

目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化.方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA.cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交.结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关.结论我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化.     

CpG DNA预防小鼠哮喘模型的形成

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 ,然后生理盐水激发 2次。CpG组在致敏前腹腔注射CpGDNA 10 0 μg/ 10 0 μL ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后 2 4h测外周血OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a,并处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　CpG组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞明显低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;CpG组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度明显高于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组外周血OVA特异性IgE和IgG1均低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组IgG2a较OVA组为高 ,P <0 .0 5。结论　CpGDNA能预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成     

Sequence-dependent Termination of Mammalian DNA Polymerase Reaction by a New Platinum Compound, (–)-(R)-2-Aminomethylpyrrolidine(1,1-cyclobutane-dicarboxylato)-2-platinum(II) Monohydrate

We examined the mechanisms of the inhibition of DNA synthesis by a new platinum compound, (-)-( R )-2-aminomethylpyrrolidine(1,1-cyclobutane-dicarboxylato)-2-platinum(II) monohydrate (DWA-2114R), a derivative of the antitumor drug cis- diamminedichloroplatinum(II) (CDDP), using prokaryotic and eukaryotic DNA polymerases. Preincubating activated DNA with CDDP or DWA-2114R reduced its template activity for prokaryotic and eukaryotic DNA polymerases in a dose-dependent manner. DWA2114R required six times greater drug concentration and two times longer incubation time to show the same decrease of the template activity compared to CDDP. Treatment of primed pUC118 ssDNA templates with the two drugs followed by second-strand synthesis by prokaryotic and eukaryotic DNA polymerases revealed that DWA2114R bound to DNA in a similar manner to CDDP and these adducts blocked DNA elongation by DNA polymerases of eukaryotes as well as of prokaryotes. With these two drugs, the elongations by E. coli DNA polymerase I (Klenow fragment), T7 DNA polymerase and calf thymus DNA polymerase α were strongly arrested at guanine-guanine sequences (GG). Stop bands were also observed at adenine-guanine sequences (AG) guanine-adenine-guanine sequences (GAG) and mono-guanine sequence (G). Calf testis DNA polymerase β was also arrested efficiently at AG, GAG and G, but much more weakly at GG. This pattern was common to DWA2114R and CDDP.     

紫外线照射后哺乳动物细胞DNA的期外合成

本实验用~3H-TdR掺入,液体闪烁测量法测定细胞DNA期外合成的方法,测定了小鼠和大鼠的肠淋巴结细胞、人和大鼠外周血淋巴细胞、S-180V肿瘤细胞等经紫外线照射后的UDS,观察到UDS掺入量随辐照度增加而增加。在同一辐照剂量下,以小鼠肠淋巴结细胞的UDS值最高,其次是人外周血淋巴细胞和S-180V肿瘤细胞,而大鼠外周血淋巴细胞和肠淋巴结细胞最低。     

二乙酰二脱水卫矛醇对小鼠白血病L1210细胞增殖的影响

目的　研究二乙酰二脱水卫矛醇 (1 ,2 :5 ,6 dianhydro 3 ,4 diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制。方法　用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法、DNA掺入法、流式细胞仪和Westernblot法 ,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L1 2 1 0 细胞的作用 ,并探讨作用机制。结果　DADAG对DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0 有明显的抑制作用 ;对体外白血病L1 2 1 0 细胞同样有很强的抗增殖作用 ,其IC50 值为 2 4 6mg·L- 1 。DADAG不可逆地抑制L1 2 1 0 细胞内DNA的生物合成。DADAG 2 4mg·L- 1 处理L1 2 1 0 细胞 6h后 ,细胞发生G2 /M周期阻滞 ,2 4h后达最高峰。细胞周期素B1 蛋白水平在DADAG处理 2 4h后开始下降 ,而磷酸化的细胞周期依赖性激酶CDK1在DADAG处理 6h后开始上调 ,并呈时间依赖性。结论　DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖密切相关     

Discussing options between patients and health care professionals in genetic diagnosis: ethical and legal criteria

The specific characteristics of genetic data lead to ethical-legal conflicts in the framework of genetic diagnosis. Several international organisations, including UNESCO and the Council of Europe, have enacted rules referring to the use of genetic information. This paper discusses possible legal and ethical criteria that could be used in genetic testing.