高良姜超临界萃取物肠管解痉作用胆碱能机制的研究

目的:通过在体实验从胆碱能通路初步探讨高良姜超临界萃取物的肠道解痉作用机制.方法:用肠推进、肠管悬挂和贴壁压敏法观察高良姜超临界萃取物对在体动物肠管的作用.结果:本实验提示高良姜超临界萃取物具有拮抗毒蕈碱样受体的作用,可能是其治疗脘腹冷痛的作用机理之一.     

基于matK基因的高良姜及其同属混伪品的分子鉴别

目的:建立基于matK基因的高良姜及其同属混伪品的分子鉴别方法。方法:采用通用引物对高良姜样品matK基因进行PCR扩增和双向测序,并从Gen Bank下载10种同属混伪品的matK基因序列。采用Clustal X、MEGA软件进行序列比对分析、计算遗传距离以及构建聚类树。结果:获得的高良姜及其同属混伪品matK基因序列长度为732 bp,变异位点41个。高良姜种内遗传距离为0.000,与混伪品之间的最小遗传距离为0.003。基于matK序列构建的系统发生树显示高良姜样品聚在一起,能直观地与混伪品区分。结论:matK基因可以有效地鉴别高良姜及其同属混伪品。     

高良姜降血糖部位纯化工艺的优化

目的优化高良姜降血糖部位的纯化工艺。方法以5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-3-庚酮、高良姜素、山柰素、7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-4-烯-3-庚酮、1,7-二苯基-5-羟基-3-庚酮含有量为评价指标,树脂类型、上样液(乙醇)体积分数、上样量、洗脱液(乙醇)体积分数为影响因素,优化纯化工艺,并对纯化部位进行药效学验证。结果最佳条件为以AB-8型大孔吸附树脂为填料,上样液体积分数40%,吸附树脂量与生药比例1∶1.5,洗脱液体积分数80%,5个成分平均总含有量57.9%(RSD3%)。与模型组相比,80%乙醇洗脱部位可明显降低急性高血糖小鼠的血糖水平(P0.05)。结论该方法稳定可行,可为高良姜干预2型糖尿病药物的研发提供依据。     

高良姜素对肺癌肿瘤细胞DNA 拓扑异构酶的抑制及细胞杀伤作用

目的：探讨高良姜素对肺癌肿瘤细胞DNA拓扑异构酶(Topo I)的活性的影响及对肺癌肿瘤细胞株A549和 H46生长的抑制作用。方法：采用MTT 法研究高良姜素对肺癌肿瘤细胞株A549和H46生长的抑制作用,利用琼脂糖凝 胶电泳法测定高良姜素对Topo I活性的影响,在此基础上通过荧光光谱和分子对接研究高良姜素与Topo I的相互作用 机制,最后进一步探讨高良姜素对Topo I结构的影响。结果：高良姜素对肺癌肿瘤细胞株A549和H46的生长起抑制作 用 (半抑制率IC50分别为0.221 mmol/L和0.173 mmol/L);琼脂糖凝胶电泳显示高良姜素对Topo I的活性有较好的抑制作 用;荧光光谱分析显示高良姜素能显著猝灭Topo I的荧光,且疏水作用力是二者相互作用的主要驱动力;圆二色谱分 析表明高良姜素诱导Topo I构象的解折叠,使α-螺旋含量增加,而不利于其形成活性中心,进而导致Topo I活性的降 低;分子模拟结果表明：高良姜素能够优先结合到Topo I的活性中心附近,并与催化基团Arg364和Asn352形成氢键。 结论：高良姜素能够抑制Topo I的活性,而使肿瘤细胞DNA单链解旋的速率降低,从而在诱导肺癌肿瘤细胞株A549和 H46凋亡的过程中起重要作用。     

高良姜素对H_2O_2诱导A375细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨高良姜素对人A375黑素瘤细胞氧化损伤的保护作用。方法以700μmol·L-1的H2O2处理人A375黑素瘤细胞,建立氧化损伤模型,并以1,5和10μg·mL-1的高良姜素拮抗其作用。用倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT比色法检测细胞存活率;并检测各组细胞上清液中丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。结果高良姜素能明显改善H2O2损伤后的A375细胞形态,显著提高人A375黑素瘤细胞的存活率。与模型组相比,高良姜素给药后均能提高A375细胞T-AOC、CAT、SOD和GSH-Px活力(P<0.05),而MDA和NOS明显降低(P<0.05)。结论高良姜素对H2O2诱导的A375细胞氧化损伤具有保护作用。     

高良姜不同提取部位对实验性胃溃疡的影响及作用机理研究

目的:筛选高良姜抗胃溃疡有效部位,探讨抗溃疡作用机理。方法:将高良姜提取分离为不同部位,观察各部位对无水乙醇、阿司匹林诱导的小鼠胃溃疡模型溃疡指数、胃组织病理切片、血浆胃泌素(GAS)、白介素1(IL-1)、环氧酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的影响。结果:与模型组小鼠比较,高良姜水提物、80%乙醇洗脱物可以显著减少胃溃疡模型小鼠的胃溃疡指数,显著降低血浆GAS、IL-1、TNF-α浓度,显著升高血浆COX-2、PGE2浓度,30%乙醇洗脱物、95%乙醇洗脱物对溃疡指数无显著影响,但可调节血浆GAS、IL-1、PGE2浓度。结论:高良姜各提取分离部位中水提物、80%乙醇洗脱物具有较好的抗胃溃疡效果,抗溃疡作用可能通过减少血浆GAS、IL-1、TNF-α浓度,提高血浆COX-2、PGE2浓度产生。     

高良姜素在大鼠肠道的吸收机制

摘要目的 探讨高良姜素在大鼠肠道的吸收机制。方法采用大鼠在体单向肠灌流吸收实验模型,以质量法校正灌流液体积,采用反相高效液相色谱法测定灌流液中高良姜素浓度,考察不同肠段、药物浓度和P糖蛋白（P gp）抑制药对高良姜素吸收的影响。结果高良姜素在整个肠段都有吸收,在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数Ka分别为（5.12±1.14）×10－2,（2.23±1.02）× 10－2,（4.61±0.75）× 10－2和（2.68±0.70）×10－2·min－1,同时它在回肠的吸收不受自身浓度和P gp抑制药盐酸维拉帕米的影响。结论高良姜素在肠道吸收良好,吸收过程以被动扩散为主,不受P gp外排蛋白的影响。     

高良姜素下调Bcl-2通过线粒体途径促进人肝癌Hep3B细胞凋亡

目的 研究高良姜素对人肝癌Hep3B细胞凋亡的影响并探讨相关机制. 方法 体外培养人肝癌Hep3B细胞,经高良姜素处理后,RT-PCR和Western blot检测Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法测定细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,流式细胞仪分析线粒体膜电位,Western blot检测Caspase-3、9及Cytochrome C蛋白的表达水平. 结果 高良姜素使Hep3B细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显下降.不同剂量的高良姜素(40、80、120 μmol/L)对细胞生长抑制率分别为6.38％±1.32％,21.58％±1.97％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(t低剂量组=13.01,t中剂量组=15.12,t高剂量组=14.79,均P＜0.01);细胞凋亡率分别为21.58％±1.97％,34.18％±3.89％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(分别t低剂量组=24.67,t中剂量组=32.35,t高剂量组=25.89,均P ＜0.01);线粒体膜电位绿色荧光蛋白表达百分比分别为18.93％±2.3％,31.11％±2.67％和46.06％±2.95％,明显高于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=31.38,t高剂量组=48.15,均P ＜0.01);Caspase-3、9和胞质内Cytochrome C表达水平明显高于对照组(Caspase-3:分别t低剂量组 =11.94,t中剂量组=10.18,t高剂删量组=18.82,均P＜0.01;Caspase-9:分别t低剂量组=15.11,t中剂量组=20.41,t高剂量组=21.25,均P＜0.01;Cytochrome C:t低剂量组=15.11,t中剂量组=28.47,t高剂量组=16.01,P＜0.01),而线粒体中Cytochrome C表达水平明显低于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=12.00,t高剂量组=27.61,均P＜0.01). 结论 高良姜素可下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达促进人肝癌Hep3B细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径相关.     

高良姜提取物对2型糖尿病小鼠的降糖作用

目的：研究高良姜提取物对2型糖尿病小鼠的降糖作用。方法采用高脂高糖饮食加小剂量链脲佐霉素(STZ)注射诱导2型糖尿病小鼠模型,饲养过程中动态监测小鼠的血糖水平、体质量变化,待小鼠血糖水平达到实验要求后,以高良姜提取物稀释不同倍数、二甲双胍、生理盐水灌胃。30 d后测定小鼠的空腹血糖、糖耐量等指标,并观察小鼠肝组织病理切片。结果高脂高糖饲料饲喂联合小剂量注射STZ诱导的2型糖尿病小鼠,高良姜提取物能显著降低糖耐量试验2 h血糖浓度(P<0.05),对体质量也具有一定的调节作用(P<0.05),50 mg/kg剂量组在给药后空腹血糖表现出显著改善(P<0.05),但对肝损伤、脂肪性病变无明显改善作用。结论高良姜提取物对糖尿病小鼠的血糖水平有一定的降糖作用。     

高良姜不同部位胃肠解痉及镇痛作用的比较研究

目的比较高良姜水煎液及不同部位(黄酮、二芳基庚烷、挥发油)的胃肠解痉及镇痛作用,为探讨高良姜调理脾胃的药效物质基础提供依据。方法采用小肠炭末推进法观察高良姜不同部位对正常小鼠小肠运动的影响;以冰番泻叶致小鼠脾胃虚寒泄泻模型考察其抗寒证腹泻作用;采用扭体法及甲醛致痛法考察其镇痛作用;采用兔体外回肠试验观察其对正常肠肌收缩和氯化乙酰胆碱(Ach)、氯化钡(BaCl2)所致体外肠肌收缩及对Ach诱导兔回肠平滑肌内钙释放和外钙收缩的解痉作用。结果高良姜水煎液、黄酮部位、二芳基庚烷部位能明显降低脾胃虚寒小鼠的腹泻指数(P<0.01,P<0.05);仅黄酮部位高剂量对正常小鼠小肠推进运动有明显抑制(P<0.05);高良姜水煎液、黄酮部位、二芳基庚烷部位能不同程度减少小鼠的扭体次数,缩短甲醛致痛后小鼠舔后足时间(P<0.01,P<0.05),其中二芳基庚烷部位作用最强;高良姜水煎液、黄酮部位、二芳基庚烷部位能明显抑制正常情况下体外肠收缩(P<0.01,P<0.05);高良姜3个提取物的低、中、高浓度组对Ach、BaCl2所引起的体外肠收缩均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.05),抑制率与药物终浓度呈一定量效关系;对Ach诱导兔回肠平滑肌内钙释放和外钙收缩均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论高良姜黄酮部位和二芳基庚烷部位为其解痉止痛治疗脾胃寒证相关疾病的主要有效部位,其中胃肠解痉作用以黄酮类较强,镇痛作用则以二芳基庚烷部位更强。