外源基因在大肠杆菌中的表达

随着生物技术的迅猛发展,采用基因工程方法大量制备一些有用蛋白质,特别是医用蛋白质药物已成为可能.目前,表达系统可分为原核表达系统和真核表达系统.原核表达系统主要是指大肠杆菌表达体系,其它尚有枯草杆菌体系等;真核表达系统包括酵母细胞表达体系、杆状病毒-昆虫细胞表达体系和哺乳动物细胞表达体系.各种表达体系都     

构建MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1表达的腺病毒载体

目的：构建串联的MYC反应元件修饰人端粒酶逆转录酶（hTERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1表达的复制缺陷型腺病毒载体。方法：将串联的MYC反应元件修饰的hTERT核心启动子及下游酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1克隆到穿梭质粒pDC316上，上辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞获得重组复制缺陷型腺病毒并在HEK293细胞中扩增重组病毒。PCR法及斑形成实验鉴定重组腺病毒和病毒滴度。结果：成功获得由6倍和18倍MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的复制缺陷型腺病毒载体。结论：MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的腺病毒载体为进一步研究骨肉瘤转录靶向基因治疗奠定了基础。     

NF—κB与脑胶质瘤的研究进展

核转录因子κB(Nuclear factor-kappa b,NF—κB）是一类广泛存在于细胞中的多显性核转录因子，属Rel基因家族。在肿瘤细胞中其具有调控多种基因转录表达的能力，与肿瘤细胞的生长、增殖和浸润、转移的关系密切，还能调控肿瘤细胞的凋亡和免疫活性，是研究胶质瘤分子生物学的一个很好的切入点。     

TNFα导致肝星状细胞激活的观察

目的：通过电镜观察，探讨TNFα和肝星状细胞激活的关系。方法：采用体外培养大鼠HSC，将细胞分为对照组和TNFα组，收集细胞制作电镜标本，在透射电镜下观察HSC的形态学的改变。结果：电镜下见TNFα组细胞体积增大，可见粗面内质网数量明显增多，线粒体、内质网呈轻度扩张，呈明显激活样改变。结论：TNFα对HSC有增殖激活的作用。     

羟乙基淀粉对内毒素感染大鼠肺部毛细血管通透性的影响

目的 观察羟乙基淀粉(HES 200/0.5)对内毒素感染大鼠肺部毛细血管通透性的影响。方法 雄性Wistar大鼠42只随机分为对照组,内毒素组(LPS,6 mg/kg),LPS HES组(HES,3.75、7.5、15、30ml/kg)及HES对照组(30ml/kg)。分别于LPS注入后4 h检测肺组织毛细血管通透性、肺湿干重比、肺组织中性粒细胞(PMN)浸润,2 h检测肺组织核转录因子kappaB(NF-κB)水平。结果3.75 ml/kg和7.5 ml/kg HES显著降低肺毛细血管通透性、湿干重比和PMN浸润(P<0.05),3.75、7.5和15 ml/kgHES显著降低肺NF-κB活性(P<0.05)。结论较低剂量HES具有抑制感染状念下毛细血管漏的作用,这种作用的产生可能与其降低肺组织PMN浸润、抑制核转录因子NF-κB有关。     

拉米夫定停药后1年HBV无症状携带者进展为早期肝硬化1例报告

目前全世界公认的有效的慢性乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗药物主要是干扰素和以拉米夫定为代表的新一代核苷类似物。拉米夫定在全球广泛应用的同时也遇到了一些新问题，本例报告反映了乙肝抗病毒治疗适应症不当拓展和不正规治疗的副面效应，值得临床重视。     

cAMP信号途径和基因表达调控

环腺苷酸(cAMP)是细胞内广泛存在的第二信使,其含量取决于影响其合成与降解的多种酶与蛋白质的活性.cAMP途径可通过调控转录因子来调节细胞的增殖、分化和凋亡.本文就cAMP信号途径以及该途径所影响的部分转录因子加以综述.     

人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略

目的在人源化抗体构建过程中，采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2／0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时，不用常规的TRIZOL法抽提总RNA，而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit，将polyA^＋的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量，提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^＋RNA。采用RT-PCR，我们成功地克隆到了轻链可变区序列，序列分析证实读码框完全正确，属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征，具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^＋ mRNA富集技术，成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb（4F1）单克隆抗体的轻链、重链可变区基因，成功地消除了SP2／0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。     

PPARγ研究进展

过氧化物酶体增殖体激活受体γ（PPARγ）是核受体中的超家族，其从转录水平参与许多细胞功能及病理生理的调控过程，包括脂肪细胞分化，糖，脂代谢，炎性反应，动脉粥样硬化，癌细胞的分化形成等，PPARγ的激动剂除用于治疗糖尿病外，将来尚可能用于动脉粥样硬化，肿瘤，炎性疾病等治疗。