黄蜀葵花中金丝桃苷的提取分离及纯度检测

目的 研究黄蜀葵花中金丝桃苷的提取、分离、纯化方法.方法 采用聚酰胺柱层析、梯度洗脱方法提取分离黄蜀葵花中的金丝桃苷,以氢谱和碳谱鉴定其结构,以薄层色谱法、HPLC法进行纯度检查.结果 制得的金丝桃苷经薄层色谱法检查无杂质斑点,经HPLC法检测其纯度98.5%以上.结论 所建立的分离、纯化方法简便,成本低.     

重组人αD型干扰素的纯化研究

αD型干扰素(IFN αD,亦称白细胞干扰素)具有广谱的抗病毒、抑制肿瘤细胞及免疫调节等多种重要的生物活性。现行的IFN αD纯化工艺存在着纯化效率低、时间长、影响因素多等不足。本研究建立了新的纯化工艺流程。该工艺将制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳,放在了阴离子纤维素层析之前,并省略了阳离子纤维素层析的步骤。这种改进的主要优点是提高了IFN     

包装菌株XL-pⅢ的构建及缺陷型辅助噬菌体的制备

目的构建能用来制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株。方法采用重叠延伸PCR方法将完整的噬菌体基因Ⅲ和氯霉素抗性基因体外拼接起来,利用λRed重组系统将其整合到E.coliXL1-Blue染色体上的组氨酸操纵元位点构建包装菌株,用氯霉素抗性进行筛选,并用PCR及组氨酸表型鉴定;用PCR法构建功能基因Ⅲ缺失的噬菌体基因组,将其转化到包装菌株中培养制备辅助噬菌体,以集落形成来测定滴度。结果重组菌株能在氯霉素抗性平板上生长,PCR扩增可得到目的片段,组氨酸表型缺失,说明靶基因定向重组到了细菌染色体的靶位点,将重组包装菌株命名为XL-pⅢ,以其制备的缺陷噬菌体滴度可达到3.7×108,只具备一次感染力。结论成功构建包装菌株,并能制备辅助噬菌体,有望用于选择感染性噬菌体(SIP)体系。     

应用同源重组技术构建小鼠Cchl1a3基因R528H突变型打靶载体的策略

目的构建小鼠Cchl1a3基因R528H突变型基因敲入打靶载体,模仿低血钾周期性麻痹患者中的对应发现。方法采用置换型载体,分为长短、短臂设计（1.5～2.0kb）,以便用聚合酶链反应（PCR）方法筛选中靶载体和ES细胞（embrgonic stem cell）。首先以Cchl1a3基因为模板设计引物,并引入与质粒内插入位点酶切序列相配的内切酶序列,扩增用于套取的同源臂a和b,以及用于插入筛选基因和实行定点突变的同源臂c和d,c和d首尾相接,用点突变特异性PCR在c内实现R528H突变。将a和b定向插入pBR322,借助于温度敏感的pSC101-BAD-gba-（tet）质粒的表达Red/ET重组酶,使其与携带Cchl1a3基因的细菌人工染色体（BAC）实现同源重组,套取含目的突变点、长约8kb的Cchl1a3的基因片断,形成pBR322-Cchl1a3。将c和d定向插入PL451质粒Frt-Neo-Frt片段两侧,酶切c-Frt-Neo-Frt-d片断纯化后,再与pBR322-Cchl1a3质粒一同转入含Red/ET重组酶基因的大肠杆菌EL250菌株,在重组酶的催化下再次实现同源重组,在Cchl1a3基因的给定位点实现R528H突变并插入包含筛选基因和重组酶识别位点的Frt-Neo-Frt片断,完成载体的构建。载体构建过程中,酶切位点变化导致的片断程度改变作为初筛,PCR产物测序结果作为最后的鉴定依据。结果打靶载体符合设计要求。结论运用点突变特异性PCR,结合Red/ET重组技术构建基因定点突变的基因敲入型打靶载体,在重组酶催化下仅需要2次同源重组即可完成。该策略成熟简便,省时省力,构建的载体易于鉴定。     

三联疗法与维拉帕米合用根除幽门螺杆菌的临床观察

戴宁等[1] 报道维拉帕米能增强甲硝唑对幽门螺杆菌 (ＨＰ)耐药菌的体外抗菌活性 ,同时维拉帕米还能增加ＨＰ对多种抗生素的敏感性。本研究在法莫替丁、阿莫西林及甲硝唑合用的基础上加用维拉帕米 ,观察其临床疗效 ,现报道如下。1　资料与方法1 1　病例选择　选择 18～ 70岁的门诊或住院患者 ,3ｄ内经胃镜检查和胃粘膜ＨＰ检测 ,证实有ＨＰ感染的活动期十二指肠溃疡 (溃疡直径 5～ 2 0ｍｍ ,数目≤ 2个 ,无严重并发症 ) ;1周内未接受铋剂或抗生素治疗 ,未因其他疾病服用非甾体类抗炎药或皮质激素 ;无严重心、肺、肝、肾功能损害。进入本研究…     

肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建

目的 构建大肠杆菌ＣＳ３菌毛呈现载体,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法 通过对ＣＳ３亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析,确定外源表位的插入位点,重叠延伸ＰＣＲ方法进行定点突变,将口蹄疫病毒ＶＰＩ插入到ＣＳ３中以验证表现呈现能力;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果 在大肠杆菌ＣＳ３的１３６位氨基酸残在后突变插入ＢａｍＨⅠ酶切点构建成呈现载体,全细胞ＥＬＩＳＡ、电镜和免疫     

抗乙肝病毒表面抗原单链抗体在大肠杆菌中的高效表达

在大肠杆菌中高效表达抗乙肝表面抗原的单链抗体。方法：通过ＰＣＲ将单链抗体基因重组到原核细胞表达载体ＰＴ１７中,构建单链抗体高效表达载体ＰＴ７ＳＣ。将ＰＴ７ＳＣ质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１,ＴＰＴＧ诱导进行表达。     

抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

采用ＷｅｓｔｅｒｎｔＢｌｏｔ对表达产物进行分析鉴定。重组抗ＨＢｓＡｇ－碱性磷酸酶双功能抗体非还原态分子量为２００ＫＤ左右，显著，其为有活性的双聚体；为了评价重组双功能抗体在临床检测中的应用价值，     

海水浸泡对大鼠晶状体Na+,K+-ATP酶表达的影响

目的研究大鼠晶状体海水浸泡伤后Na^＋，K^＋浓度和Na^＋，K^＋-ATP酶在mRNA水平的表达与形态学损伤之间的关系。方法用逆转录聚合酶链式反应法测定大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶α亚单位在mRNA水平的表达状况，并与Na^＋，K^＋浓度和超微结构的变化进行对比分析。结果海水浸泡大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶的α1，α2，α3亚单位mRNA水平的表达首先代偿性增高，随后呈失代偿性降低，并随时间的延长而逐渐降低。海水浸泡30min缝合伤口观察1周组的α1及α2亚单位的表达高于对照组，α3亚单位的表达基本恢复正常。结论在晶状体海水浸泡伤的病变过程中，Na^＋，K^＋-ATP酶亚单位活性的表达有不同变化。     

外源基因在大肠杆菌中的表达

随着生物技术的迅猛发展,采用基因工程方法大量制备一些有用蛋白质,特别是医用蛋白质药物已成为可能.目前,表达系统可分为原核表达系统和真核表达系统.原核表达系统主要是指大肠杆菌表达体系,其它尚有枯草杆菌体系等;真核表达系统包括酵母细胞表达体系、杆状病毒-昆虫细胞表达体系和哺乳动物细胞表达体系.各种表达体系都