Smad4在胰腺癌发病机制中的研究进展

Smad4基因是一个新发现的胰腺癌候选抑癌基因，其编码的蛋白质在TGF—口信号转导过程中起着重要的作用。近年来，随着分子生物学的研究进展，Smad4基因在胰腺癌发病机制中的作用受到人们的广泛关注。[第一段]     

胶质细胞源性神经生长因子家族成员及其受体介导的胞内信号转导

GDNF家族成员是TGF β生长因子超家族的一个亚家族 ,在神经元的存活 ,生长 ,分化 ,再生 ,轴突生长 ,神经损伤和神经退行性疾病中都有重要作用。神经细胞中存在GDNF的RET依赖性和非RET依赖性两条信号转导途径。本文就GDNF家族成员及其受体介导的胞内信号转导机制研究的最新进展进行简述     

蛋白转导结构域介导乙型肝炎病毒聚合酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制

Objective To study a functional variable fragment of heavy chain(VH)antibody against the terminal protein(TP)region of hepatitis B virus(HBV)polymerase introduced by human immunodeficiency virus Tat protein transduction domain(TAT)and the inhibitive activity of TAT-VH on the replication of HBV in vitro.Methods The gene encoding TAT-VH was cloned into prokaryotic expression vector pET28a(+).Recombinant plasmid was transduced into E coli BL21(DE3)LysS,then the protein was expressed and purified.The purified TAT-VH fusion protein was added into HepG2.2.15 cell culture.The transduction efficiency was evaluated by indirect fluorescence assay(IFA).The cytotoxicity of TAT-VH was detected by Methabenzthiazuron(MTT)assay.HBV DNA level in HepG2.2.15 cell culture was measured using quantitative polymerase chain reaction(PCR).The data were analyzed by one-factor analysis of variance and t test.Results TAT-VH fusion protein was successfully expressed and purified.It was confirmed by IFA and MTT assay that TAT-VH was introduced into HepG2.2.15 cells and the cell growth was not affected.The level of HBV DNA in supernatant of HeDG2.2.15 cell culture with 5 000 nmol/L TAT-VH was(1.211±0.132)lg copy/mL,which was significantly lower than control group[(5.325±0.041)lg copy/mL,t=72.91,P＜0.05].Meanwhile,the level of intracellular HBV DNA was(3.521±0.411)lg copy/mL,which was significantly lower than control group[(8.532±0.132)lg copy/mL.t=28.41,P＜0.05].Conclusion The HBV replication is inhibited by anti-TP TAT-VH antibodies in vitro,which provides valuable experimemal basis for developing therapy of HBV infection with intracellular antibody.     

原位转导胞嘧啶脱氨酶自杀基因对大肠肿瘤的杀伤作用

目的通过胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因对接种于裸鼠肿瘤的直接杀伤作用研究，探索原位转自杀基因抑制大肠肿瘤的治疗方法。方法 将含ＣＤ基因的逆转录病毒载体进行包装，收获病毒上清后，将含ＣＤ基因的重组病毒上清直接注射到患病部位。结果 在给予前药５－ＦＣ后，观察到明显的肿瘤杀伤作用。结论ＣＤ基因直接转导到肿瘤部位的治疗结果，提示其可以做为大肠癌综合治疗的有效手段之一。     

转化生长因子β1介导的心肌肥厚发生机制研究进展

转化生长因子β是迄今为止已知的最为有效且功能较多的多肽类物质之一。由多种细胞以自分泌、旁分泌和内分泌的方式通过多种受体信号转导通路促进蛋白质的合成,参与调节胚胎发育、细胞生长和分化、细胞增殖与凋亡、胞外基质合成、炎症、创伤修复及免疫反应等许多生物学过程。它分成多个亚型,其中转化生长因子β1促进心肌细胞外基质合成与沉积,是最重要的促心肌纤维化细胞因子,并与多种激素、细胞因子相互作用,促进心肌肥厚的发生发展,本文就此作一综述。     

方剂学:药物相互作用网络与细胞分子信号动态转导网络的药物作用靶标

<正>在以往的药物设计中,常用针对单一分子靶点的高特异性和高活性化合物筛选的策略(Onegene,Oneprotein,Onedrug),但愈益增多的研究表明,对于像肿瘤、糖尿病、炎症、高脂血症、老     

复黄生肌愈创油膏对糖尿病大鼠创面肉芽组织中TGF—β1与smad3、smad7 mRNA

目的：探讨复黄生肌愈创油膏（简称复黄膏）对糖尿病创面愈合的促进作用及可能的作用机制。方法：将雄性Wistar大鼠随机分为正常创面对照组、糖尿病模型组、复黄膏治疗组。制备糖尿病合并皮肤创面模型,模型组给予生理盐水纱布外敷,治疗组给予复黄膏外敷,1次／d。造模后分别于第3天和第11天分批处死动物,采用实时荧光定量PCR技术,观察不同时段创面中TGF-β1与smad3、smad7 mRNA含量变化。结果：在创面修复的第3天,治疗组TGF—β1、smad3 mRNA表达均明显高于模型组（P〈0．05）,且与正常组比较无统计学差异;第11天,治疗组TGF-β1、smad3 mRNA表达均明显低于正常组（P〈0．05）,但与模型组比较无统计学差异。第3天时,smad7含量各组比较无统计学差异;而第11天时,治疗组明显高于模型组（P〈0．05）,虽然与正常组比较无统计学差异,但药物干预组smad7 mRNA含量高于正常组。结论：复黄生肌愈创油膏在糖尿病溃疡创面愈合过程中可能动态调节smad3、smad7及TGF—β1 mRNA的表达,从而起到促进创面愈合的作用,同时可一定程度上减少瘢痕形成。     

Smad3介导补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响

目的：探讨smad3是否介导了补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响,从而阐明补肾中药具有促进骨形成的机制。方法：分离6月龄和16月龄SD大鼠成骨细胞,采用组织块翻转方法培养,通过倒置显微镜观察细胞形态,并以矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。将SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、单味补阳组（固本壮骨粉）、复方补阳组（金匮肾气丸）、复方平补组（补肾益精方）、复方补阴组（知柏地黄丸）和西药对照组（阿法骨化醇片）,制备药物血清;当成骨细胞汇合达60％,换无血清培养液培养细胞24h后,加入含药血清（浓度为10％）再继续培养3d。采用RT-PCR方法检测含药血清干预后成骨细胞smad3和VDR mRNA的表达。结果：在增龄成骨细胞smad3 mRNA表达是下降的,这与增龄所致VDR mRNA表达下降相一致;单味补阳组、复方补阳组和西药对照组上调smad3 mRNA的趋势与它们上调VDR mRNA的趋势相一致。结论：补阳中药可能通过启动Smad3 mRNA表达而上调VDR mRNA表达,从而促进骨形成。     

重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响

目的 探讨重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响.方法 采用剪切消化法分离大鼠前脂肪细胞,培养液中添加重组PTD-NPY融合蛋白,检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的形态学变化、细胞中甘油三酯含量和甘油磷酸脱氢酶(GPDH)活性.结果 重组PTD-NPY融合蛋白处理大鼠前脂肪细胞72 h,细胞体积增大,细胞数量增加,细胞甘油三酯含量和GPDH活性升高;重组PTD-NPY融合蛋白处理成熟脂肪细胞48h后,细胞体积明显增大,细胞内脂肪滴数量增加并融合成较大的脂滴,甘油三酯含量和GPDH活性均显著升高.结论 重组PTD-NPY融合蛋白明显促进前脂肪细胞的分化,促进脂肪细胞中甘油三酯的合成与沉积.为重组PTD-NPY融合蛋白在动物生产及人类疾病治疗中的实际应用奠定理论基础.     

p53-TAT融合蛋白的克隆表达及其对HepG 2细胞的促凋亡作用

目的研究连接TAT蛋白转导域的p53融合蛋白对人肝癌细胞株HepG 2的促凋亡作用。方法用反转录法从人正常肝细胞株L-02中获得野生型p53基因cDNA,构建原核表达质粒pET-27b/p53及pET-27b/p53-TAT。IPTG诱导表达重组蛋白,重组蛋白经N-i NTA柱纯化后,加入HepG 2细胞培养液上清,采用四唑氮盐比色法(MTT法)和单细胞凝胶电泳法检测p53及p53-TAT融合蛋白对HepG 2细胞生长的影响。结果成功构建质粒pET-27b/p53及pET-27b/p53-TAT,表达纯化了p53蛋白及p53-TAT蛋白。MTT法和单细胞凝胶电泳法结果表明,与p53蛋白相比,p53-TAT融合蛋白能更有效地抑制HepG 2细胞生长、促进凋亡。结论 p53-TAT融合蛋白能够有效促进HepG 2细胞凋亡。