褪黑素调控Nrf2/ARE信号通路延缓髓核间充质干细胞退变的实验研究

  目的  探讨褪黑素对氧化应激条件下的大鼠髓核间充质干细胞(NPMSCs)的影响及调节机制。  方法  使用差速贴壁法获取大鼠NPMSCs。显微镜下观察细胞状态,鉴定第三代细胞三系分化潜能和细胞表面免疫标志物;采用CCK-8法检测不同浓度过氧化氢和褪黑素诱导对大鼠NPMSCs活力的影响确定最佳浓度和实验分组;免疫荧光和流式细胞学技术检测NPMSCs活性氧水平;免疫印迹分析外基质标志蛋白(Ⅱ型胶原、糖胺聚糖)和通路核心蛋白(Nrf2、HO-1)表达情况。  结果  褪黑素在氧化应激下保护了NPMSCs的活性,且1 μmol/L浓度保护效应最为明显(0.717±0.018,t=7.102, P＜0.01)。褪黑素可抑制NPMSCs在H₂O₂诱导后的活性氧水平(阳性率70.0% vs. 32.7%)。此外,褪黑素还能显著提高Nrf2/ARE信号通路中关键蛋白核因子E2相关因子(1.925±0.024,t=13.150,P＜0.01)和血红素氧合酶-1(1.605±0.019,t=12.940, P＜0.01)的活性,改善NPMSCs的功能。褪黑素治疗后,细胞基质蛋白Ⅱ型胶原(0.850±0.010,t=25.200,P＜0.01)和糖胺聚糖(0.335±0.013,t=10.640,P＜0.01)表达增加。  结论  褪黑素通过调控Nrf2/ARE信号通路可以影响NPMSCs退变的生物学特性。      

褪黑素介导抗炎、抗氧化、抗骨质疏松作用在椎间盘退变修复中的研究进展

目前,椎间盘退行性疾病（disc degeneration disease,DDD）已成为临床上中老年人的常见病,且发病年龄有年轻化趋势。椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）是指椎间盘（intervertebral disc,IVD）在内外部因素共同作用下引起的老化、退化等一系列生理、病理过程,被认为是DDD的基本病理过程,是引发患者腰痛的主要原因,因此修复IDD是治疗DDD的重点。IDD过程中伴随着炎症介质的产生、炎症相关信号通路的活化以及氧化应激的发生。褪黑素作为一种吲哚类激素,具有显著的抗炎及抗氧化作用,近年来受到研究者关注,越来越多的研究表明褪黑素对IVD具有保护作用,对治疗骨质疏松症（osteoporosis,OP）也有一定的作用,其有望成为IDD修复的治疗药物。笔者拟对褪黑素在椎间盘退变修复中的最新研究进展做一综述,以期为后续研究及IDD的早期药物干预和修复治疗策略提供思路。     

褪黑素通过抑制NLRP3减轻MPP+诱导的HT22细胞焦亡/炎性损害

目的 研究褪黑素(MT)预处理抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平,减轻神经细胞焦亡,改善帕金森病症状的作用及分子机制。方法 正常培养的HT22细胞记为空白对照组（Sham组）;细胞进行10 mmol/L 1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP⁺)处理24 h,制成帕金森病细胞模型后,记为MPP⁺组;先用5 μmmol/L MT预处理6 h后,再造模后,记为MPP⁺+MT组;各组细胞处理后经培养24 h后取材。采用CCK8检测细胞死亡变化;采用荧光免疫组化法和Western-blotting方法检测NLRP3分布和表达变化;使用标准ELISA试剂盒检测IL-1β和 IL-18表达变化。结果 与Sham组相比,MPP⁺组神经细胞大量死亡,NLRP3在存活细胞的胞膜和胞浆中高表达,相应的炎症因子IL-1β和IL-18也大量释放,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。相较于MPP⁺组,MPP⁺+MT组细胞存活率升高,细胞中NLRP3染色阳性率降低,表达量也降低,相应的IL-1β和IL-18表达量也降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT可有效抑制NLRP3表达和炎症因子的释放,减轻神经细胞焦亡,从而减轻MPP⁺造成的HT22细胞损伤。     

熟地黄对阴虚模型大鼠血清褪黑素及脑内γ-氨基丁酸的影响

目的观察熟地黄对阴虚模型大鼠血清褪黑素及脑内γ-氨基丁酸（GABA）的影响,探讨其滋阴宁静的作 用机制。方法将雄性SD 大鼠随机分为正常组、模型组、熟地黄组（30 g·kg-1）,每组10 只;模型组、熟地黄 组灌胃耗阴复方药液（30 g·kg-1）,每日1 次,连续10 d;第11 天熟地黄组开始灌胃熟地黄药液,每日1 次, 连续10 d。观察大鼠的一般情况,测定体质量、饮水量,通过旷场行为学检测其活跃度;采用高通量测序检测 大鼠脑组织中阴虚相关基因的差异表达;ELISA 法检测大鼠血清褪黑素含量;高效液相色谱法检测大鼠脑组织 中GABA 含量;Western Blot 法检测下丘脑组织中GABA 合成酶Gad67 及其转录因子EGR1 的蛋白表达。 结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量明显下降（P＜0.05）,饮水量以及活跃度明显提高（P＜0.05）;促甲 状腺激素释放激素（TRH）及促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因表达量明显提高（P＜0.05）;血清褪黑素含 量、脑组织GABA 含量,以及Gad67 和EGR1 的蛋白表达量均明显下降（P＜0.05,P＜0.01）。与模型组比较, 熟地黄组大鼠体质量明显升高（P＜0.05）,饮水量以及活跃度明显下降（P＜0.05）;TRH 及CRH 基因表达量明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;血清褪黑素含量、脑组织GABA 含量,以及Gad67 和EGR1 的蛋白表达量均明显 升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论熟地黄可能通过提高大鼠血清褪黑素及脑内GABA 水平来发挥其滋阴宁静的 作用。     

美丽芍药根中黄酮类成分及其生物活性

目的研究美丽芍药Paeonia mairei Levl.中黄酮类成分及其生物活性。方法美丽芍药根70%乙醇提取物的分析采用D101、硅胶、Rp?18、Sephadex LH?20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。HEK293模型测试其体外激动褪黑素受体1活性。结果从中分离得到9个化合物,分别鉴定为橙皮素(1)、异鼠李素(2)、芹菜素(3)、柚皮素(4)、牡荆素(5)、木犀草素(6)、没食子酸乙酯(7)、齐墩果酸(8)、β?谷甾醇(9)。化合物3~4对褪黑素受体1的激动率分别为(7.16±1.14)%、(14.72±4.52)%。结论化合物1~6为首次从植物中分离得到。化合物3~4对褪黑素受体1具有激动作用。     

早年职业性睡眠剥夺对退休护士认知功能的影响

目的 探讨早期职业性睡眠剥夺对退休护士认知功能的影响及可能的机制。 方法 整群选取退休护士107人,根据其参与值夜班工作年限、每月夜班频率,将其分为睡眠剥夺组（n=82）和非睡眠剥夺组（n=25）,通过简易智能精神状态检查量表（MMSE）、蒙特利尔智能评估量表（MoCA）、画钟试验（CDT）评估其认知功能;并检测其血清中褪黑素、低密度脂蛋白、三酰甘油等指标水平,探讨睡眠剥夺影响认知功能的可能机制。 结果 与非睡眠剥夺组相比,睡眠剥夺组MMSE及MoCA评分降低,总胆固醇、低密度脂蛋白、褪黑素水平增高（均P<0.05）;组间比较发现,睡眠剥夺对定向力、注意力和计算力影响较为显著（均P<0.05）。睡眠剥夺和低密度脂蛋白是认知障碍的危险因素（均P<0.01）。 结论 护理人员青中年期职业性睡眠剥夺会对中老年期认知功能产生影响,低密度脂蛋白可能是中老年认知功能的危险因素。针对长期参与倒夜班的护理人群应早期筛查,早期干预,以降低其发展为老年性痴呆的风险。     

外源性褪黑素对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及血清相关激素含量的影响

目的通过观察不同剂量的外源性褪黑素对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及血清中5-HT、CRH、ACTH、CORT含量的影响,探讨外源性褪黑素对抑郁症的治疗作用。方法 48只SD大鼠随机分为4组:空白对照组、模型对照组、褪黑素高剂量组、褪黑素低剂量组,每组12只。采用慢性轻度不可预见性应激和孤养方法复制慢性应激抑郁模型,灌胃给予治疗组不同剂量(5.0、10.0 mg·kg-1)的褪黑素加以干预,以体重、糖水试验、旷野试验观察实验前后大鼠行为学的改变。应用酶联免疫吸附法对大鼠血清中5-HT、CRH、ACTH、CORT的含量进行检测。结果从第7天开始,模型组、褪黑素低量组、褪黑素高剂量组的体重增长趋势开始降低,从第14天开始,模型对照组大鼠体重有下降趋势;从第14天开始褪黑素低剂量组、褪黑素高剂量组的糖水摄入量增长趋势降低,模型对照组的糖水摄入量呈下降趋势;第21天,与模型对照组相比,褪黑素低剂量和褪黑素高剂量组大鼠的水平和垂直运动次数都有显著性增多。与空白对照组相比,模型对照组血清5-HT的含量降低、血清CRH、ACTH、CORT含量升高,与模型对照组相比,褪黑素低剂量组和褪黑素高剂量组的血清5-HT含量均显著升高,血清CRH、CORT、ACTH含量均显著降低。结论外源性褪黑素对慢性应激抑郁模型大鼠抑郁行为有改善作用,也可以提高慢性应激抑郁模型大鼠血清中5-HT的含量,降低慢性应激抑郁模型大鼠血清中CRH、ACTH、CORT的含量,但它们之间的具体量效关系有待进一步研究。     

褪黑素与心血管疾病关系研究的进展

褪黑素(MT)是松果体分泌的一种神经内分泌素。它具有广泛的生物学作用,对生物的昼夜节律、免疫反应、肿瘤、衰老等均有调节作用。目前,MT与肿瘤、老年性疾病和心血管疾病的关系,已成为生命科学研究中的一个热点。本文就其生理功能及对心血管系统疾病的影响等研究进行综述。     

褪黑素,自由基与衰老

关于衰老的机制，自由基对组织的损伤是一个不容铁视的因素。褪黑素具有多方面的抗衰老作用，清除自由在作用是其中一个重要方面。褪黑素可从多个环节防治自由基损伤；直接清除自由基、抑制脂质过氧化反应、保护生物大分子，并与其它抗氧化剂协同作用，共同承担本的抗化防御机能。     

褪黑素对脓血症诱导的鼠回肠和膀胱组织中病理变化的抑制作用

目的 探讨褪黑素对鼠脓血症模型组中回肠和膀胱组织伤害的抑制作用。方法 通过盲肠结扎和穿孔来诱导大鼠发生脓血症，假手术（对照）和盲肠结扎穿孔组在术前30min或术后6h接受盐水和褪黑素处理（10mg／kg），术后16h断颈处死，立即取出凹肠和膀胱组织进行收缩率试验并测定丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）含量及髓过氧化物酶（MPO）活力。结果 与对照组相比，在盲肠结扎穿孔组中回肠和膀胱组织MDA水平显著增加（P〈0．01），GSH水平显著下降（P〈0．01），MPO活力显著增加（P〈0.01）。另外，褪黑素处理可显著降低MDA（P〈0.01，）和MPO水平（P〈0．01），而GSH含量则恢复至对照水平（P〈0.01）；与对照组相比，在盲肠结扎穿孔组中，盲肠和膀胱的收缩率明娃下降（P〈0．01），而褪黑素处理能使这些反应恢复。结论 褪黑素处理能使盲肠结扎穿孔所诱导的鼠膀胱和回肠组织功能紊乱得到恢复，能降低脂质过氧化产物、MPO活力及减少内生GSH的含量，降低脓血症对组织的氧化损伤。