大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的ＤＮＡ聚合酶可用于ＰＣＲ检测     

琼脂糖等电聚焦法快速测定碱性磷酸酶同工酶

本研究的目的是建立高灵敏度分离碱性磷酸酶同工酶的方法，具体采用琼脂糖等电聚焦法分离其同工酶，电泳前先用神经氨酸苷酶对几种组织提取液和病人血清进行处理。该法可将肝、骨、小肠以及胎盘同工酶分离出多条区带，具有操作简单、灵敏度和分辨率高、重复性好的优点     

酵母菌2号培养最佳条件的选择

成人特发性乳糖酶缺乏症的发生率极高，这些人进食牛奶后会出现胃肠胀气、腹痛、腹泄等对牛奶不耐受的消化不良症状。为解决这一问题，自１９８９年起，国内外不少学者是主张有产替代疗法，即将人工培养制备纯化的乳糖酶直接加入牛奶中以水解其中的乳糖来弥补成人乳糖酶的缺乏。     

高血糖对非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞（Ca~（2＋）－Mg~（2＋））－ATP酶的影响

为了解高血糖对非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－Ａｒｐ酶的影响，采用改良的Ｈａｎａｈａｎ和Ｌｕｔｈｒａ法测定了红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性。结果表明，ＮＩＤＤＭ患者红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性降低，且与空腹血糖、糖化血红蛋白、果糖胺及红细胞变形指数呈负相关，后者与红细胞内Ｃａ２＋浓度呈正相关。说明（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性下降时，红细胞变形能力降低，可能与患者红细胞膜蛋白的过度糖化及细胞内Ｃａ２＋浓度的增高有关。     

酶活性法测定GAD抗体及其初步临床应用

目的建立测定谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）抗体的方法，以探讨该抗体对胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的预测、早期诊断及其发病机制研究的意义。方法用专用酶反应试管建立放射性同位素底物测定ＧＡＤ活性的分析方法。结果底物浓度为４ｍｍｏｌ／ｍｌ（３７ｋＢｑ）时，酶活性测定在一定浓度范围内剂量效应呈直线关系（ｒ＝０９８９）。结合免疫沉淀与酶活性分析，建立了免疫沉淀酶活性分析测定ＧＡＤ抗体的方法，２份ＩＤＤＭ患者ＧＡＤ抗体阳性血清与酶活性免疫沉淀指数存在剂量效应关系。用免疫沉淀酶法测定１５例正常人及２０例病程１年以内的ＩＤＤＭ患者血清，两组酶活性免疫沉淀指数分别为０１９３±００８７和０３８１±０１２１，差异有显著性（Ｐ＜００１）。按照超过正常人组免疫沉淀指数ｘ＋２ｓ为阳性区分，２０例ＩＤＤＭ患者血清中ＧＡＤ抗体阳性９例，占４５％。结论该方法简单，能直接反映酶活性的改变，无需高纯度的ＧＡＤ，特别适用于刚开始从事ＧＡＤ抗体研究的实验室及阳性血清筛查。     

尿NAG早期监测核糖霉素肾毒性

尿ＮＡＧ早期监测核糖霉素肾毒性青岛市儿童医院（２６６０１１）朱慧娟，江崇才，孙蓓蒂青岛港防疫站任嘉庆核糖霉素是一种新型的氨基甙类抗生素，近年在儿科领域应用广泛。有报道核糖霉素可致急性肾衰［１］。为了早期预测其肾毒性作用，我院对应用核糖霉素的４０例患儿...