大鼠原生殖细胞的形态学及分化特性

目的 研究大鼠胚胎原生殖细胞（Primordial germ cells, PGCs）的形态及其分化特性。方法 取受精后10.5 d的大鼠胚胎作HE染色,取受精后11.0~12.5 d的大鼠胚胎生殖嵴进行PGCs原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶 (ALP) 染色检测细胞的分化程度。结果 大鼠PGCs位于卵黄囊内胚层深部的间充质内,体积大,呈椭圆形或不规则形;核大,染色质细密,含1~2个核仁。体外培养可见PGCs大而圆,散在分布,或聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,ALP反应呈阳性;培养4~5 d,PGCs形态不规则,有伪足,ALP反应减弱,进一步分化可形成神经元样细胞、表皮细胞、心肌细胞、分泌细胞以及类似血管、心脏的管腔样结构等。由PGCs分化来的细胞ALP反应均呈阴性。结论 大鼠生殖嵴来源的PGCs是一种具有发育全能的、可分化形成3个胚层衍生物的胚胎多能干细胞。     

应用二甲基亚砜体外诱导P19细胞分化为心肌细胞

目的观察P19细胞经二甲基亚砜（DMSO）诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程.方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d.观察细胞跳动情况,用α-sarcomeric actin、cardiac Troponin T（cTnT）抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化.结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%.结论 DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动.     

人骨髓间充质干细胞的分化与端粒酶活性

目的：研究人骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs)的分化特征及其端粒酶活性。方法：取人胚胎股骨骨髓,分离,培养,扩增MSCs,原位杂交法检测MSCs的端粒酶性。将MSCs种植于裸鼠皮下,4周后观察MSCs的分化情况。结果：人MSCs呈端粒酶反应阳性。植入裸鼠体内后可分化成骨,软骨,脂肪,骨骼肌,肌腱样组织和无髓神经纤维束样结构。结论：人MSCs是一种具有多向分化能力的干细胞,具有较高的端粒酶活性。     

骨骼肌肌细胞增殖及分化过程中凋亡现象

目的 对骨骼肌分化中的凋亡现象进行初步研究,方法 本实验采用体外培养的C2C12肌母细胞分化模型,用流式细胞仪检测肌细胞分化过程中细胞周期的变化,提取细胞基因组DNA进行电泳分析,用原位末端标记法进行了凋亡细胞染色,电子显微镜观察凋亡小体的形成。结果 Ｃ２Ｃ１２细胞在肌分化诱导２４h和４８h,检测出凋亡现象;而对照组、肌分化诱导７２h组均未检出凋亡现象。结论 在肌肉分化、发育的过程中,某些细胞会按自身程序主动死亡,以凋亡细胞的形式排除。而且具有明显的时间性,终末分化的肌管不易出现凋亡。     

五氧化二钒的体外发育毒性研究

采用胚胎肢芽细胞进行原代微团培养 ,培养物经不同浓度的五氧化二钒 (V2 O5 )对细胞肢芽细胞经 5天增减形成细胞集落 ,V2 O5 对体外肢芽细胞的分化有明显抑制作用 ,并有较明显的剂量 -效应关系 ,其半数生长抑制浓度(ICV5 0 )和半分化抑制浓度 (ICD5 0 )分别为 12 .6和 1.6μg ml,V D值为 7.9。表明抑制细胞分化可能是V2 O5 致发育危害的重要作用机理     

MMP—9在THP—1分化过程中的表达及调节

基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）主要降解基底膜中的Ⅳ和Ⅴ型胶原,在细胞穿经基底膜的过程中起关键作用。为探讨前单核细胞ＴＨＰ－１分化过程中ＭＭＰ－９的表达及其信号传导途径,作者采用细胞粘附实验、流式细胞术和凋亡检测的方法,检测了佛波脂（ＰＭＡ）诱导ＴＨＰ－１分化过程中,ＰＫＣ、Ｐ１３Ｋ、ＮＦ－κＢ抑制剂Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ Ｃ、ＬＹ２９４００２、ＰＤＴＣ和地塞米松对细胞粘附、ＭＭＰ－９表达及细胞凋亡的影响。结果表明：在ＴＨＰ－１分化过程中有ＭＭＰ－９的表达,各种抑制剂及地塞米松可抑制细胞粘附及ＭＭＰ－９的表达,Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ凋亡检测发现ＰＤＴＣ是以诱导细胞凋亡的方式而发挥作用的。因此,ＭＭＰ－９可作为前单核细胞向单核细胞分化的标志,ＰＫＣ、Ｐ１３Ｋ、ＮＦ－κＢ都参与了ＭＭＰ－９上调的信号传导。抑制ＭＭＰ－９的     

五氧化二钒的体外发育毒性研究

采用胚胎肢芽细胞进行原代微团培养,培养物经不同浓度的五氧化二钒（Ｖ２Ｏ５）对细胞肢芽细胞经５天增减形成细胞集落,Ｖ２Ｏ５对体外肢细胞的分化有明显抑制作用,并有较明显的剂量－效应关系,其半数生长抑制浓度（ＩＣＶ５０）和半分化抑制浓度（ＩＣＤ５０）分别为１２．６和１．６μｇ／ｍｌ,Ｖ／Ｄ值为７．９。表明抑制细胞分化可能是Ｖ２Ｏ５致发育危害的重要作用机理。     

锌促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

目的　研究锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法　从大鼠颅骨分离出成骨细胞,于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验设置４ 个组,分别为对照组和１０ μｍｏｌ／ Ｌ、２５ μｍｏｌ／ Ｌ及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ ３ 个剂量组,采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入法确定成骨细胞在不同时点 Ｄ Ｎ Ａ 的合成状况,应用流式细胞仪技术分析细胞周期、３ Ｈ脯氨酸参入法测定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果　３ 个锌剂量组细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量在各个时点均明显高于对照组;２５ μｍｏｌ／ Ｌ 及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 可以促进成骨细胞从 Ｇ０／ Ｇ１ 期向 Ｓ期转化。３ 个锌剂量组胶原蛋白、骨钙素的合成量、碱性磷酸酶活性均高于对照组。结论　锌能够促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

人参总甙及单体对脐血CD34+细胞体外增殖及分化的影响

目的：探讨人参总甙、人参皂甙单体对脐血CD34^ 细胞体外增殖及分化的影响。方法：用MethoCult^TM H4435半固体培养基加入不同浓度的人参总皂甙(GS)、Rgl、Rbl，计数CFU—E、BFU—E、CFU—GM集落。结果：GS、人参皂甙单体Rg1、Rb1具有刺激脐血CD34^ 细胞集落形成的作用，人参皂甙单体的作用优于GS。不同浓度的人参皂甙对脐血CD34^ 细胞集落刺激不同，但其集落形成能力明显高于对照组。GS的最佳浓度为50mg／L，Rg1和Rb1最佳浓度为5mg/L。高浓度的GS、Rgl、Rb1集落形成能力下降，但并不显示抑制作用。结论：人参总甙、人参皂甙单体能促进造血干或祖细胞增殖，并且能诱导定向分化，具有类似生长因子和协同生长因子作用。     

转化生长因子-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化影响的研究

目的 了解转化生长因子-β1(transforming growth factor-betal，TGF—β1)和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法 体外培养人鼻中隔软骨细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢和^35S-Na2SO4掺入的检测比较不同浓度TGF-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞的增殖以及软骨基质蛋白多糖合成的影响，观察TGF-β1和胰岛素对软骨细胞表型的影响。结果 在15％血清的培养条件下，TGF-β1和胰岛素均能显著促进软骨细胞增殖，且在各自一定的浓度范围内呈量效关系，联合作用效果累加；TGF—β1、TGF—β1和胰岛素联合作用促使软骨基质蛋白多糖的合成量明显提高；TGF-β1使传代软骨细胞去分化提前。结论 一定浓度的TGF—β1、胰岛素和TGF-β1 胰岛素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞具有显著的促增殖作用。