髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析北大核心CSCD

目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。     

miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响

目的：观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法：应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定;ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平,并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ratio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠,采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化;通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠,一组小鼠腹腔麻醉后用Dynabeads^TMM-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球,用于RNA和蛋白的提取;另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标...     

水通道蛋白1基因敲除对胸腔液体转运的影响

目的:探讨水通道蛋白1在小鼠胸腔液体转运的作用。方法:实验小鼠分为野生型组和基因敲除型组,每组基因型各分为高渗组和低渗组。小鼠吸入麻醉后,胸膜腔内分别注入高渗或等渗液体,处理组液体中含特布他林100μmol·L-1或阿米吡嗪200μmol·L-1。在不同时间收集胸腔液体,测量渗透压或体积。结果:胸膜腔内注入500mOsm液体后,在1,2和5min时收集胸腔液体测渗透压,野生型组中渗透压均明显高于基因敲除组(P<0.01)。胸腔内注入等渗液体后,在30,60和90min时收集胸腔液体测量体积,野生型组和基因敲除型组间无明显差异(P>0.05)。特布他林增加高渗和等渗液体胸腔转运(P<0.05),不受水通道蛋白1敲除的影响。阿米吡嗪抑制高渗和等渗液体胸腔转运(P<0.05),也不受水通道蛋白1敲除的影响。结论:水通道蛋白1促进渗透压引起的小鼠胸腔液体转运,对胸腔等渗液体清除无影响。钠通道影响胸腔高渗和等渗液体转运,水通道蛋白1基因敲除不影响钠通道的这种作用。     

基因敲除技术在2型糖尿病研究中的应用

基因敲除技术是研究基因功能的重要手段 ,近年来该技术在糖尿病的研究领域中得到普遍应用 ,尤其是条件性基因敲除技术的出现 ,进一步深化了糖尿病候选基因的在体研究。本文介绍基因敲除的基本原理及各种单基因、多基因、组织特异性基因敲除的 2型糖尿病动物模型。     

高脂饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠海马CA_3区形态学变化及mortalin蛋白表达的影响

目的 观察载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(knock-out,KO)及高脂饮食后小鼠海马CA_3区形态学及mortalin蛋白表达的变化,以探讨这些因素与记忆损伤及阿尔茨海默病的关系.方法 10只野生型小鼠予普通饲料喂养作为对照(C)组,10只ApoE KO小鼠予普通饲料喂养作为KO组,10只ApoE KO小鼠予高脂饲料喂养作为KO-HF组.小鼠3个月龄成模后,称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、尼氏染色、神经原纤维银染、免疫组织化学染色和计算机图像分析.结果 KO组体质鼍、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量与C组相比明显升高,KO-HF组升高更明显;KO组(0.301±0.031)及KO-HF组(0.261±0.020)尼氏体较C组(0.341±0.035)减少(F=18.068,P<0.05);KO组(0.322±0.060)及KO-HF组(0.391±0.041)mortalin表达较C组(0.256±0.061)升高(F=15.230,P<0.05);KO组及KO-HF组未见明显神经原纤维缠结.结论 ApoE KO及高脂饮食可致小鼠海马CA,区锥体细胞内尼氏体减少,mortalin表达升高,该蛋白的异常表达可能与阿尔茨海默病的发病相关.     

水通道蛋白4在不同类型脑水肿中的表达及其作用

<正> 脑水肿是脑组织中液体贮积过多而成,是许多颅脑疾病如颅脑挫伤、脑血管病、炎症和颅内肿瘤等引起神经功能障碍的主要病理生理过程,是影响患者致残、致死的重要因素之一。近年来,大量研究证实,水通道蛋白(aquaporin,AQP)4在脑组织中含量最为丰富,不但在脑组织水运输和正常生理调节代谢中起关键作用,而且参与了脑挫裂伤、肿瘤、炎症、脑血管病所引起的各种类型脑水肿形成和消退。现将AQP4在各种脑水肿中的表达及作用作一综述。     

ApoE基因与人类老年性疾病的关系及ApoE基因敲除小鼠在人类老年疾病研究中的应用

心脑血管疾病的病因与发病机制非常复杂,病毒因素、遗传因素、染色体及免疫功能都与其相关.目前已经发现多个基因与心脑血管疾病发生有关,其中,载脂蛋白E(Apo E)基因在心脑血管疾病中的作用被越来越多的认识.国外通过对大规模的人群进行分析,发现ApoE基因的多态性和老年性疾病息息相关[1].     

Age-related increase of early afterdepolarization in calsequestrin-2 knock-in mouse cardiomycyte

Objective To characterize early afterdepolarizations （EADs） caused triggered activity （TA） among calsequestrin-2 （CASQ2） knock-in （CASQ2 KI） mice and its relationship with aging. Methods Electrophysiological properties of ventricular myocytes from 3- month （mo, young）, 9-mo （adult-l） and 12-too （adult-2） in wild-type （WT） and CASQ2 KI mice were investigated with patch-clamp technique. Results The incidences of EADs and TA in CASQ2 KI cardiomyocytes increased with increasing age. In contrast, WT mice cardiomyocytes showed no significant change in matched-age groups. Compared with that in 3-mo CASQ2 KI mice, the 50% repolarization of action potential （APD50） showed prolongation in both 9-mo and 12-mo ones （9.2±0.9 ms of 9-mo and 10.3 ± 1.2 ms of 12- mo vs. 5.6± 0.3 ms of 3-mo）, while the 90 % repolarization of action potential （APD90） was similar among 3 age groups. Compared with 3-mo mice, the 9-mo and 12-mo CASQ2 KI mice showed markedly reduced transient outward potassium current （Ito） densities but increased L-type calcium current （ICa-L） densities. Conlcusion This study suggested that events of EADs and TA in CASQ2 KI mice increased with increasing age, It might be associated partly with the augment of cellular calcium concentration and the prolongation of APD50 induced by decrease of Ito and increase of ICa-L in adult CASQ2 KI mice     

鼻咽癌动物模型研究进展

鼻咽癌是中国最常见的头颈部肿瘤之一,发病率逐年增长,具有明显的地域性.在其多因素的发展过程中,遗传易感性、EB病毒和环境因素被认为是主要原因.鼻咽癌的发病机制、肿瘤的转移和浸润机制、中晚期及复发、转移患者更为有效的治疗方式的探寻等都成为广大研究者有待解决的问题.随着转基因、基因敲除等技术在实验动物模型中的广泛应用,建立理想的鼻咽癌动物模型,成为解决上述问题的关键之一.