miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响

目的：观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法：应用CRISPR/Cas9技术，选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组，未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定；ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平，并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ratio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠，采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化；通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠，一组小鼠腹腔麻醉后用Dynabeads^TMM-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球，用于RNA和蛋白的提取；另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标...