低温冷冻和孵育对人精子氧化应激水平的影响

目的：探讨低温冷冻和孵育对人精子氧化应激水平的影响。方法：60份精液，每份分成5份分别列入5组（处理前对照组、低温冷冻空白实验组、低温冷冻样本组、孵育空白实验组和孵育样本组）。以晚期氧化蛋白产物（AOPP）为蛋白氧化指标，丙二醛（MDA）为脂质过氧化指标，用分光光度法分别检测AOPP和MDA的水平。结果：低温冷冻样本组MDA水平明显高于处理前对照组和低温冷冻空白实验组（P〈0．05），但AOPP水平无明显差异（P〉0．05）。孵育样本组AOPP和MDA水平均高于处理前对照组、孵育空白实验组及低温冷冻样本组（P〈0．05）。结论：精子的低温冷冻和孵育，均存在氧化应激损伤。低温冷冻主要造成精子的脂质过氧化损伤，孵育可致精子的脂质过氧化损伤和蛋白氧化损伤。     

p38在二硫苏糖醇与顺铂诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的作用

将人食管癌Eca109细胞分为七组,其中三组分别加二硫苏糖醇(DTT,Ds)、顺铂(Cs)及二药联合(Ds Cs)处理细胞,另三组则先用磷酸化p38特异性抑制剂SB203580孵育,再分别加Ds、Cs及Ds Cs处理细胞,未加药组作为对照(C′).采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率.结果与C′比较,各组均存在明显差异(P均＜0.01); SB203580孵育细胞后,与相应组别比较,Ds 、Cs 、Ds Cs凋亡率均明显下降(P均＜0.01).证实p38 MAPK在Ds 和Cs诱导食管癌Eca109细胞凋亡中被显著激活,p38 MAPK的激活可能是多种上游凋亡信号传导必经的共同通路.     

人精子顶体反应与孵育时间的关系

以人新鲜及冷冻精子在不同孵育时间内及不同Ａ２３１８７浓度下进行实验。采用低渗溶液处理以观察精子的死活及顶体反应情况，比较不同条件下，精子顶体反应的变化。结果表明：（１）新鲜及冷冻精子均可受Ａ２３１８７诱发，而出现顶体反应；（２）Ａ２３１８７可使部分精子在极短时间内出现顶体反应；（３）一定范围内延长孵育时间，可提高Ａ２３１８７的诱发效率；（４）人精子间存在明显不均一性。     

酶组织化学技术中孵育液过滤方法的改进

酶组织化学技术中配置酸性磷酸酶（ACP）与三磷酸腺着酶（ATP）的孵育液时，常产生絮状沉淀，需过滤后才能使用。过滤后的孵育液的pH值常发生改变。常规方法是将过滤后的孵育液再测pH值，然后用NaOH或HCI调孵育液的酸碱度至所需的适宜值。边滴加NaOH或HCI边测pH值，常常反复滴加反复测试。此种方法操作既繁琐又会因操作步骤多而影响孵育液的质量。笔者通过反复实验摸索改进了此方法。材料与方法：l、ACP孵育液的配备将2％硝酸铅0．6Inl溶于10all巴比妥醋酸缓冲液中，再缓慢加人3％卜甘油磷酸钠1．6Inl，边加边搅拌，可见产生絮状…     

罗格列酮对RIN-m细胞高糖损害干预作用研究

目的 研究罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对胰岛β细胞高糖损害的干预作用.方法 采用生理浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)、生理浓度葡萄糖 罗格列酮、高浓度葡萄糖(33.3 mmol/L)、高浓度葡萄糖 罗格列酮培养RIN-m细胞.以放射免疫法检测胰岛素分泌水平.以流式细胞仪及TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡.RT-PCR方法 检测胰腺十二指肠同源盒-1(pancreatic duodenal homeobox factor-1,PDX-1)和胰岛素mRNA表达.结果 ①RIN-m细胞与33.3 mmol/L的葡萄糖孵育2周后胰岛素分泌功能开始下降,细胞凋亡率增长2.7倍(P＜0.01).而罗格列酮可以修复胰岛素的分泌,降低RIN-m细胞凋亡率.②罗格列酮上调 PDX-1(1.30±0.06 vs. 1.61±0.10,P＜0.01)和胰岛素 (1.75±0.09 vs. 1.98±0.11,P＜0.01) mRNA表达.结论 高糖抑制胰岛β细胞胰岛素分泌,并诱导其凋亡.罗格列酮具有直接保护β细胞免于高糖毒性的作用.     

抗CXCR4单克隆抗体对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨抗CXCR 4单克隆抗体12G5对SCG7901细胞的增殖和调亡的影响.方法 应用台盼蓝排染法检测12G5(10μg/ml)对细胞存活的影响,绘制细胞生长曲线;通过流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ①12G5(10μg/ml)孵育细胞后24h,实验组的细胞存活率为(85.22±1.0)%,对照组为(98.06±1.9)%,二者差异具有统计学意义(P<0.05);②比较细胞凋亡率,实验组为(9.30±0.58)%,对照组为(3.32±0.16)%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 12G5能在一定程度上抑制SCG7901细胞的增殖与调亡.     

人IL-24重组蛋白免疫刺激及血管形成抑制作用

目的 探讨人重组白细胞介素-24(rhIL-24)蛋白体外免疫刺激功能和血管形成抑制作用.方法 将原核稳定表达得到的rhIL-24蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测其刺激免疫细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)的活性;利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察rhIL-24蛋白抑制血管形成的效应.结果 rhIL-24蛋白孵育的PMBC在不同时段分泌的IL-6、TNF-α及IFN-γ浓度与阴性对照组相比存在显著差异;rhIL-24蛋白能明显抑制CAM二级和三级血管形成,与阴性组比较,差异极显著.结论 rhIL-24蛋白具有明显的免疫刺激功能和血管形成抑制作用.     

HPLC/MS/MS法测定大鼠肝微粒体系统中非那西丁及其代谢物的浓度

目的:以高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠肝微粒体孵育液中非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚的浓度。方法:色谱柱为XTerraMSC18,流动相为甲醇-0.1%甲酸不同比例梯度洗脱,流速为0.2mL·min-1;质谱仪为电喷雾-三重四极杆质谱,以多反应监测方式采集数据。结果:非那西丁和对乙酰氨基酚的检测浓度线性范围分别为45～9000(r=0.9998)、15.2～1520ng·mL-1(r=0.9996);平均回收率分别为(96.2±2.3)%～(98.3±2.4)%、(99.6±2.1)%～(100.2±2.6)%;日内及日间精密度均小于5%,最低检测浓度分别为9、10ng·mL-1。结论:本法简单、快速、灵敏,适宜于检测大鼠肝微粒体孵育液中非那西丁及其代谢物浓度。     

放射性碘标记转铁蛋白体外示踪脊髓内移植的间充质干细胞

目的:检测间充质干细胞转铁蛋白受体(TfR)在体外培养及移植入脊髓后的表达,进行体外放射性核素示踪研究.方法:从胎儿血分离培养人间充质干细胞,应用流式细胞分析、免疫荧光染色和受体放射性分析鉴定转铁蛋白受体的表达,用放射性碘(125I)标记的铁饱和转铁蛋白[125I-Tf(Fe)2 ]作为示踪剂,进行体外放射自显影,示踪移植于兔正常脊髓内的间充质干细胞,并对125I-Tf(Fe)2在脊髓实质的弥散动力学进行研究.结果:流式细胞分析、免疫荧光染色证实体外培养的人间充质干细胞表达转铁蛋白受体, 受体放射性分析表明125I-Tf(Fe)2与其受体结合的平衡解离常数(KD)为(0.98±0.12) nmol/L, 最大结合位点(Bmax)为每个细胞(107 702±6 226)个.免疫荧光染色结果表明间充质干细胞移植于脊髓2 d后转铁蛋白受体表达,10 d后不表达,移植2 d后以125I-Tf(Fe)2为示踪剂进行脊髓切片体外放射自显影,获得移植细胞阳性影像.离体脊髓在125I-Tf(Fe)2溶液中体外孵育,16 h后 125I-Tf(Fe)2弥散入全部脊髓实质.结论:125I-Tf(Fe)2作为示踪剂可以在体外示踪到脊髓内移植2 d后的间充质干细胞,TfR和125I-Tf(Fe)2是应用核医学影像进行间充质干细胞移植初期活体示踪可能的生物学标志和示踪剂.     

提高局部ALA透皮吸收和生物利用度的研究

目的:探讨提高局部ALA透皮吸收和生物利用度的方法。方法:建立迷你家猪动物模型,分别采取不同孵育温度、溶剂、pH值、有无角质软化剂等孵育方法进行孵育,测定不同孵育方法孵育后皮肤组织光敏剂的荧光强度,观察不同孵育温度、溶剂、pH值、有无角质软化剂等孵育方法对ALA透