热缺血再灌注损伤影响肝脏细胞周期检查点调控的基因表达分析

目的动态观察肝脏热缺血再灌注损伤（WIRI）对细胞周期检查点基因的表达影响，研究其分子机制帮助了解那些与热缺血再灌注相关的疾病。方法采用成组对照的实验设计，利用微阵列芯片和逆转录-聚合酶链反应（PCR）联合分析技术，分析SD大鼠热缺血再灌注损伤处理后的基因表达变化（其中芯片分析8只、RT-PCR定量分析16只）；运用系统生物学分析方法对功能基因进行聚类。结果分别得到了热缺血再灌注损伤处理后肝脏的细胞周期各检查点基因及早期即刻基因表达数据，将其中与细胞周期密切相关的的功能基因（上调的223条、下调的62条变化幅度均大于3倍）做进一步分析。结论肝脏热缺血再灌注损伤通过细胞周期／检查点控制基因影响细胞周期G1／S、G2／M的运行，抑制DNA的合成和染色体的分裂。推测可能影响受损的DNA双链自我修复和后期的组织细胞再生、凋亡。     

塞来昔布对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用

目的观察塞来昔布对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用。方法以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,进行40次腹部异位心脏移植。采用HE染色和原位末端标记(TUN EL)技术检测移植心切片,进行排斥反应的病理分级并计算移植心肌细胞的凋亡指数(AI)。结果移植心的细胞凋亡主要发生于心肌细胞;移植后第3、5d,塞来昔布治疗组心肌细胞凋亡指数分别为:1.03±0.42和3.28±2.42;对照组分别为2.35±1.51和11.35±3.46;两组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论细胞凋亡是心脏移植急性排斥中组织损伤的重要机制;塞来昔布能明显抑制心肌细胞凋亡。     

氧化砷对小鼠腹水型肝癌细胞的作用

目的 :研究氧化砷对移植性腹水型肝癌细胞的抗癌作用。方法 :肝癌细胞 (1 8× 10 7)接种入小鼠腹腔。对照组注射NS(0 8mL) ,余组用氧化砷 (1,2 ,3μmol/L)腹腔注射 ,每日 1次 ,共 10日。结果 :第 10天腹水细胞计数 ,1,2和 3μmol/L组瘤细胞锐减 (P <0 0 5 ) ,但第 16天腹水肿瘤细胞急骤增加。结论 :氧化砷对腹水肿瘤细胞有暂时抑制作用。     

间期细胞原位PCR检测B细胞系恶性淋巴瘤

目的：应用原位PCR技术检测B细胞系恶性淋巴瘤。方法：采用免疫球蛋白重链（IgH)基因第三互补决定区（CDR－Ⅲ）的引物，dig-11-dUTP标记物，应用直接原位PCR技术检测Ⅲ-Ⅳ级恶性淋巴瘤的间期淋巴细胞，结果：在初诊的15例恶性淋巴瘤患中，12例检测到IgH基因重排；4例临床表现呈现淋巴瘤性白血病患，治疗后骨髓完全缓解，2例间期细胞原位PCR仍显示有IgH基因重排，6个月复发，结论：间期细胞原位PCR技术能敏感、准确地检测Ⅲ级以上的恶性淋巴瘤，并帮助预测复发，为一有效的基因诊断方法。     

Monolayer cultures of normal human bone cells contain multiple subpopulations of alkaline phosphatase positive cells

Summary Cytochemical staining of normal human bone cells in monolayer cultures for alkaline phosphatase (ALP) indicated that the cultures contained mixed-cell populations. Time course evaluations of the cytochemical staining revealed, in addition to the ALP-negative cell population, at least two subpopulations of ALP-positive human bone cells with different levels of ALP. A cytochemical method has been developed which separates the ALP-positive cells into high and intermediate ALP subpopulations. In this method, human bone cells were stained for ALP using an azo-dye method and incubating at 4°C for 10 and 30 minutes, respectively. We defined the cell population that stained positively for ALP at 10 minutes as strong ALP-positive cells, and both strong and intermediate cells were stained at 30 minutes. The intermediate cells were determined from the difference between the values at the two time points. The intra- and interassay variations of the assay, with the same investigator in blinded investigations, were both less than 10% and the interobserver variation was approximately 25%. Analysis of the distribution of ALP levels in cells with a laser densitometer confirmed the presence of at least three cell subpopulations. 1,25(OH)₂D₃ treatment increased the proportions of both ALP-positive cell populations, whereas TGF-beta treatment increased only the intermediate ALP-positive cell population. On the contrary, fluoride increased the proportion of the strong ALP cells, and IGF-1 had no effect on the proportions of either ALP-positive subpopulation. When the ALP-specific activity was compared with the percentage of each ALP-positive subpopulations for the cells treated with effectors, the ALP-specific activity correlated with the total ALP-positive and with the strong ALP-positive populations but not with the intermediate ALP-positive subpopulation. In summary, this study represents the first evidence that normal human bone cells in monolayer cultures contained at least two subpopulations of ALP-positive cells, and that bone cell effectors could have differential effects on each cell population.     

系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型的关系

目的：探讨增殖性肾小球肾炎大鼠动物模型中系膜细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）表达与细胞表型的关系。方法：应用单克隆抗体1－22－3（MoAb1-22-3)及Habu蛇毒素分别诱导大鼠增殖性肾小球肾炎动物模型。用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测两个不同诱因引起模型的各个阶段的系膜细胞内α－平滑肌肌动蛋白，SMeb的表达程度，系膜细胞增殖和细胞外基质（ECM）分泌的情况。结果：在MoAb1-22-3模型，随着系膜细胞增殖程度的加理，ECM积聚增多，α－SMA的表达程度也增加，三者平行变化并具有高度相关性，而Habu模型则系膜细胞增殖和ECM增加的同时α－SMA，SMemb表达不增加。结论：α－SMA不是系膜细胞被激活并处于增殖／分泌表型唯一标志。     

肿瘤抑制因子PTEN蛋白在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌中的表达

目的：研究PTEN蛋白在雄性自发性高血压大鼠及SD大鼠主动脉中的表达。方法：取18周龄和26周龄雄性自发性高血压大鼠及同龄雄性SD大鼠主动脉石蜡包埋切片，免疫组织化学观察PTEN在主动脉平滑肌细胞中的表达。结果：SD大鼠主动脉平滑肌细胞中存在PTEN阳怀免疫反应产物。自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞也存在PTEN阳性免疫反应产物，但免疫反应产物的染色强度明显低于SD大鼠。结论：SD大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN高表达，自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN表达呈下降趋势。提示PTEN可能在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞重塑过程中发挥作用。     

二甲基亚砜诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的研究

目的 :研究二甲基亚砜 (DMSO)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法 :用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肝癌细胞BEL 74 0 2 ,应用普通光镜、荧光显微镜、MTT分析方法和流式细胞技术 (FCM )检测肝癌细胞凋亡的形态学变化、细胞存活率、凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果 :DMSO诱导BEL 74 0 2细胞核DNA凝缩和核片段化 ,最后形成凋亡小体 ;随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长 ,细胞存活率明显下降 ,其IC50 为 1.9% ;2 %的DMSO处理细胞 12h ,凋亡率达 17.2 1% ,同时S期细胞明显增加 ,G2 M期细胞明显下降。结论 :DMSO可诱导人肝癌细胞凋亡 ,并使细胞受阻于S期而进入凋亡程序。     

长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察

目的：研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。 方法： 采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞，并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞，采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养，定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白、尿素氮的水平。采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性（EROD）方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能。 结果： 新鲜分离的大鼠肝细胞总数（2-3）×108cells/whole liver，Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上。HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态。AST、ALT水平在培养3 d后下降显著，6-9 d后趋于相对稳定的低水平。白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18 d内维持在较高水平。可在3-6 d检测到CYPⅠA1酶活性。 结论： Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度，HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力，适合肝细胞的体外长期培养和功能研究。     

平阳霉素对HeLa细胞的大分子生物合成及超微结构的影响

作者用同位数前体参入法及透射与扫描电镜研究了平阳霉素(博莱霉素A_5)对HeLa细胞大分子生物合成及超微结构的影响。结果显示:平阳霉素能抑制HeLa细胞DNA,RNA和蛋白质的生物合成,对DNA的抑制作用强,ID_(50DNA)为42.77μg/ml。表现为:染色质减少,核内电子密度低,核仁分离及“核仁帽”形成,细胞表面微绒毛消失或变形,最终导致质膜破裂等。作者认为,细胞膜是否为此类药物作用的靶位值得进一步研究。