补肾通络方对大鼠膝关节炎软骨中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3的调节

目的:观察补肾通络方对骨性关节炎大鼠模型膝关节软骨半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3表达的调节作用。方法:实验于2005-05/2006-03在上海中医药大学动物中心实验室完成。将30只雄性清洁级SD大鼠抽签随机分为正常对照组、骨关节炎模型组、补肾通络方组,每组10只。造模方法:氯胺酮经腹腔注射,麻醉后纵行切开右膝部内侧皮肤,切断内侧副韧带,打开关节腔,切除内侧半月板,切断前后交叉韧带,缝合皮肤。干预方法:正常对照组随意放养,不做处理。补肾通络方药物组成:杜仲、山萸肉、熟地黄、秦艽、寄生、独活等,由上海中医药大学脊柱病研究所提供。自造模第2周开始灌药,2次/d,连续4周。骨性关节病模型组自造模第2周开始灌服等量生理盐水。干预4周后,拉颈处死动物。电镜观察细胞微观形态,免疫组化法检测关节软骨半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3蛋白表达,阳性表达为棕黄色,主要存在于细胞浆内。用平均灰度值和平均吸光度对阳性信号进行量化。RT-PCR法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3mRNA的表达强度。结果:30只大鼠均进入结果分析,无脱失。①半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3表达:骨性关节病模型组明显高于正常对照组,差异非常显著(平均灰度值:142.07±4.04,195.65±2.71,P<0.01;平均吸光度:0.25±0.01,0.12±0.01,P<0.01);补肾通络方组与骨性关节病模型组相比,差异非常显著[平均灰度值:167.62±2.70,142.07±4.04,P<0.01;平均吸光度:0.18±0.01,0.12±0.01,P<0.01]。②半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3mRNA表达:骨性关节病模型组明显高于正常对照组,差异非常显著(3.16±0.26,0.19±0.03,P<0.01);补肾通络方组与骨性关节病模型组相比,差异非常显著(0.41±0.05,3.16±0.26,P<0.01)。结论:补肾通络方能够下调膝骨性关节炎半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3的表达。     

芪明颗粒联合西药治疗糖尿病周围神经病变临床研究

目的:探讨芪明颗粒联合西药治疗糖尿病周围神经病变患者临床疗效。方法:将80例2型糖尿病周围神经病变患者随机分为对照组(n=40)与观察组(n=40)。对照组予尼莫地平治疗,观察组在对照组基础上予芪明颗粒治疗,对比两组患者的前腓总神经与正中神经的感觉神经传导速度(SNCV)、运动神经传导速度(MNCV)、血清中血清同型半胱氨酸(Hcy)、核因子κB(NF-κB)、不良反应发生率及疗效。结果:两组患者治疗前腓总神经与正中神经的SNCV、MNCV、Hcy、NF-κB、不良反应发生率比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。观察组治疗后腓总神经与正中神经的SNCV、MNCV均比对照组更高,而治疗后Hcy、NF-κB比对照组更低,差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组治疗总有效率比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:芪明颗粒联合西药治疗糖尿病周围神经病变效果较好,能够有效改善患者的神经功能,促进康复。     

缺血性脑卒中患者中医证型与Crouse积分、血清同型半胱氨酸、凝血功能相关性研究

目的:探讨缺血性脑卒中患者中医证型与Crouse积分、血清同型半胱氨酸(Hcy)、凝血功能的相关性。方法:选取缺血性脑卒中患者96例作为研究对象,对其临床资料、中医证型、实验室检查及颈动脉超声检查结果进行回顾性分析。分析96例入组患者的中医证型分布,比较不同中医证型患者的Crouse积分、血清Hcy、国际标准化比率(INR)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)水平,分析中医证型与以上指标之间的关系。结果:96例缺血性脑卒中患者主要为风痰火亢证、风痰瘀阻证和气虚血瘀证,分别占比26.04%、21.88%和20.83%,分别划分为风痰火亢证组、风痰瘀阻证组和气虚血瘀证组; 三组在性别、合并基础疾病、吸烟史和饮酒史方面比较差异无统计学意义(P>0.05),但气虚血瘀证患者年龄高于风痰瘀阻证和风痰火亢证患者(P<0.05); 三组患者Hcy水平由高到低依次为:气虚血瘀证组>风痰瘀阻证组>风痰火亢证组,差异有统计学意义(P<0.05); 风痰火亢证患者PT、FDP和D-D水平均明显低于风痰瘀阻证和气虚血瘀证患者(P<0.05),三组患者Crouse积分由高到低依次为:风痰瘀阻证组>气虚血瘀证组>风痰火亢证组,差异有统计学意义(P<0.05); 相关性分析结果显示,缺血性脑卒中患者血清Hcy、PT、FDP和D-D水平、Crouse积分之间分别互为正相关性(P<0.05)。结论:Crouse积分、血清Hcy及PT、FDP、D-D等凝血指标在不同中医证型缺血性脑卒中患者中呈不同表达,以上指标可能对于缺血性脑卒中患者中医证型的评估和判断具有一定的指导价值。     

尿系列蛋白测定对糖尿病肾病的诊断价值

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病重要的微血管慢性并发症之一，严重危害糖尿病患的健康与生命，是导致末期肾功能衰竭的主要原因。DN起病隐匿，早期常缺乏明显的临床表现。临床诊断较困难，一旦进展至临床DN，肾功能常呈进行性恶化，现尚乏有效的方法阻止其发     

金香丹抑制NLRP3/IL-1β/Caspase-1信号通路缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 观察金香丹预处理对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠模型心肌组织NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/白细胞介素-1β（IL-1β）信号通路的影响,探讨金香丹对MIRI的保护作用及其机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型组,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组,每组10只。造模前7 d开始,金香丹组给予金香丹片高、低剂量（0.72,0.18 g·kg^-1）灌胃;假手术组和模型组每天给予等体积生理盐水灌胃;地奥心血康组给予地奥心血康（1.29 g·kg^-1）灌胃。末次灌胃12 h后,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。心电图检测ST段升高评价模型;比色法检测心脏组织肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况,DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织NLRP3,Caspase-1和IL-1β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测心肌组织中NLRP3,Caspase-1和IL-1β mRNA的表达。结果 与假手术组比较,模型组心电图ST段显著升高（P<0.01）,心肌组织CK和LDH活性显著增加（P<0.01）,心肌组织凋亡细胞显著增加（P<0.01）,NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组心电图ST明显降低（P<0.05,P<0.01）,心肌组织CK和LDH活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,心肌细胞凋亡明显改善（P<0.05,P<0.01）,降低NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达水平（P<0.05,P<0.01）;与地奥心血康组比较,金香丹低剂量组心电图ST段明显升高（P<0.05）,金香丹高剂量组明显降低（P<0.05）,金香丹高、低剂量组和地奥心血康组心肌组织绿色荧光强度明显降低（P<0.05,P<0.01）,金香丹高剂量NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低（P<0.05）。结论 金香丹可以降低心肌缺血再灌注损伤,其可能机制为抑制炎症小体NLRP3,降低IL-1β表达,抑制心肌细胞凋亡,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

阿尔茨海默病患者认知功能减退程度与血浆同型半胱氨酸浓度的相关性

目的：观察不同程度认知功能减退的阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)患者血浆同型半胱氨酸(homocystein，Hey)浓度的变化，探讨高Hcy血症在AD发病过程中的作用。方法：收集1999-12／2002-08北京大学第三医院老年记忆障碍门诊AD患者30例，年龄50-87岁，病程9-36个月，符合DSM-IV及NINCDS-ADRDA诊断标准，排除其他可致认知功能障碍的器质性疾病及功能性精神障碍。对照组来源于同期年龄相仿的体检的健康老人。同时抽取血样送检验科进行Hcy测定。结果：AD患者血Hey浓度为(13．90&;#177;4．00)μmol／L，对照组(11．33&;#177;4．17)μmol／L，两组比较其差异有非常显著性意义(t=2．728．P&;lt;0．01)。且血Hcy浓度越高，认知功能损害的程度越重。结论：AD患者认知功能减退的程度与血同型半胱氨酸浓度呈正相关。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病患者血清cystatin C的影响

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C）是一种低分子量的碱性蛋白质，近年来一系列的研究发现，血清cystatin C是一种特异性高、准确性好、较内生肌酐清除率（Ccr）更为敏感的评价肾小球滤过率（glomerular filtration rate，GFIt）的新指标。厄贝沙坦能有效抑制血管紧张素Ⅱ与其受体的作用，改善肾小球高滤过状态，减少尿蛋白，抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚等而用于糖尿病肾病的治疗。     

尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶在IgA肾病肾小管间质损伤中的评估价值

目的评估尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶在IgA肾病肾小管间质损伤中的价值。方法回顾性分析2014年2月至2018年6月于本院行肾穿刺活检确诊为IgA肾病的患者82例,分为NAG正常组(NAG<12 U/L,14例)、NAG升高组(NAG>12 U/L,68例);分析两组患者间临床与病理指标的差异,并评估NAG与肾小管间质病变的相关关系。结果NAG正常组的NAG、血肌酐、胱抑素-C、尿微量白蛋白的统计量显著低于NAG升高组(P<0.05),NAG正常组的eGFR的统计量显著高于NAG升高组(P<0.05),病理改变中,NAG正常组的肾小球系膜细胞增殖、肾间质炎症细胞浸润、肾间质纤维化、肾小管萎缩积分显著低于NAG升高组,进一步logistic回归分析显示微量白蛋白、eGFR、系膜增殖、肾小管间质的病理改变为影响NAG水平的独立危险因素。结论尿NAG水平与患者eGFR、mALB以及小管间质病变密切相关,可以作为评估和监测IgAN的小管间质病变程度的临床指标。     

双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7增殖及凋亡的影响

目的建立乐伐替尼肝细胞肝癌(简称"肝癌")细胞耐药模型,以研究双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药细胞Huh7增殖和凋亡的影响。方法通过CCK8法检测乐伐替尼作用下Huh7细胞的半抑制浓度(IC50),采用浓度递增法诱导Huh7细胞乐伐替尼耐药。各组细胞处理:对照组为Huh7细胞加普通培养液培养后的细胞;敏感组为Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;耐药组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;联合组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+1μmol/L双硫仑+0.5μmol/L铜离子培养后的细胞;抑制剂组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+10μmol/L Akt抑制剂MK2206培养后的细胞。CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的存活率和凋亡率;Western blot法检测磷酸化-Akt(p-Akt)和半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达;Transwell法检测细胞侵袭性。结果乐伐替尼耐药细胞系成功建立,选取10、20、40、60、80及160μmol/L 6个乐伐替尼浓度对Huh7细胞作用48 h后计算得出细胞IC50为12.35μmol/L。耐药组细胞存活率明显高于敏感组(P<0.01),联合组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.01),抑制剂组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.05)。与耐药组比较,联合组及抑制剂组p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.01)、caspase-9明显升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白在耐药组和联合组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组细胞凋亡率明显高于耐药组(P<0.01)。Transwell结果显示联合组的肿瘤细胞侵袭数明显少于耐药组(P<0.01)。结论双硫仑联合铜离子能增加乐伐替尼对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7的敏感性,同耐药组相比其细胞抑制率明显提高,其机制可能与抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt通路及促进caspase-9蛋白表达有关。     

不同年龄段健康人群骨代谢指标Ⅰ型前胶原N末端前肽的特点分析

目的确定健康中国人群中Ⅰ型前胶原N末端前肽(type Ⅰ procollagen propeptide,PⅠNP)的年龄和性别特异性参考区间。方法采用骨密度测定法测定骨密度正常的中国人群599份血清,建立参考区间。年龄组分为20～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁、≥60岁。结果在划分中国男性和女性人群的年龄组时,不同年龄组的总PINP存在显著差异。在男性人群中,PⅠNP水平随着年龄的增长而降低,然后在中年后保持稳定。在女性人群中,与男性人群相似的下降趋势与50～59岁年龄组的急剧增加相似。结论本研究初步建立了具有正常骨密度的中国男性和女性人群与年龄相关的PⅠNP参考区间。