激光打孔技术用于冷冻精子复苏后体外受精的研究

目的 比较精子冷冻前后体外受精率的变化,以及卵子经过激光打孔后,与新鲜精子及冷冻复苏精子体外受精,比较受精率的变化.方法 冷冻2个近交系小鼠和5个品系的基因工程小鼠的精子,比较新鲜精子和冷冻复苏精子与C57BL/6J小鼠卵子做体外受精的结果;然后对C57BL/6J卵子做激光打孔,再与新鲜及冷冻复苏精子体外受精结果进行比较.结果 (1)新鲜C57BL/6J精子受精率为50.4％,C57BL/6N的受精率为48.6％,远高于冷冻精子复苏后的受精率(17.7％和15.4％);卵子打孔后,再与C57BL/6J及C57BL/6N的新鲜精子或冷冻复苏精子受精,受精率分别为64.6％,59.7％和60.4％,48.3％,冷冻精子复苏后的体外受精率提高显著;(2)5个基因工程小鼠新鲜精子和冷冻精子复苏后与C57BL/6J卵子的受精率分别为:91.5％ vs 28.6％,77.4％vs 52.3％,40.7％ vs 12.7％,56.5％ vs 14.6％,65％vs 6.5％;这5个品系的小鼠新鲜精子和冷冻精子复苏后与C57BL/6J打孔卵子的受精率分别为75％ vs 50.8％,74.3％ vs 35.6％,75.7％ vs32.7％,79.5％ vs 48.9％,59.5％ vs 46.3％,冷冻精子复苏后的受精率较之不打孔卵子,提高显著.结论 激光打孔技术用于冷冻复苏精子的辅助体外受精,可以显著提高冷冻精子复苏后的受精率,使得精子保种更加经济有效.     

不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。     

人类稀少精子细管法超快速冷冻的实验研究

目的研究人类稀少精子超快速冻存方法,寻求稀少精子冷冻保存的最优方式。方法选取20份在上海市人类精子库捐精的20名健康志愿者的精液。将精液稀释后密度调至(3～5)×106/mL(每个高倍视野3～5条精子),按照不同冷冻方式分为四组进行冷冻:A组应用0.5 mL麦管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;B组应用毛细玻璃管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;C组应用毛细玻璃管和改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)型冷冻保护剂,以程序降温方式冷冻;D组应用毛细玻璃管和改良GYC型冷冻保护剂,以超快速降温方式冷冻。比较四种方法复苏后精子活率和正常形态率。结果冷冻前精子活率为(68.6±21.3)%;A、B、C、D组复苏后活率分别为(32.2±17.2)%、(41.5±18.4)%、(44.9±18.0)%和(50.2±19.7)%,B、C、D各组复苏后活率高于A组(P<0.05),D组高于其他三组(P<0.05)。冷冻后A、B、C、D组精子正常形态率分别为(14.2±4.1)%、(15.0±4.7)%、(14.5±5.2)%和(15.9±4.9)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用超快速降温冷冻模式冷冻稀少精子,具有较高的冷冻复苏率。改良GYC冷冻保护剂具有与精子冷冻剂相似的冷冻保护效果。     

技术

英国卵巢冷冻诊所将开张 英国第一家可以提供冷冻卵巢服务的诊所预计半年内在伦敦开张。据诊所负责人说,届时,年轻女性可以通过冷冻部分卵巢组织、数年后再重新植人体内的方法,推迟做母亲的年龄。20～30岁初的女性若想接受这种治疗,     

氩氦冷冻治疗肿瘤进展

氩氦刀靶向消融治疗不需剥除冷冻后的肿瘤组织,手术操作简便,患者术后并发症少,不影响其他治疗措施,且联合放疗、化疗、中药治疗可提高治疗效果,降低肿瘤的转移率和复发率,将会在中晚期肿瘤的临床治疗方面开辟新的局面。     

固定时间对不同组织染色的影响

有关冷冻切片的质量,多数文章都是在比较不同的固定液对冷冻切片质量的影响,而我们的体会是多种组织在不同固定时间的染色质量有所不同。冷冻切片的固定时间一般为10～20 s[1]。我们选取日常常用的、容易配制的3%冰醋     

输注冷冻机采去白细胞血小板治疗白血病临床疗效分析

目的观察急性白血病患者输注冷冻机采去白细胞血小板的临床疗效。方法检测68例急性白血病患者198例次输注冷冻机采去白细胞血小板前后1h和24h血小板值及血小板校正增加值(CCI),并进行临床疗效观察。结果 198例次输注后血小板计数(48.3±16.2)×109/L,显著高于输注前的(18.4±8.7)×109/L,差异有统计学意义(P<0.01)。1、24hCCI有效率分别为76.3%和45.5%。临床总有效166例次,总有效率为83.8%(166/198),无效或不良率为16.2%(32/198)。68例输注198例次冷冻机采去白细胞血小板患者无一例发生严重输血反应。结论冷冻机采去白细胞血小板可用于急性白血病化疗后骨髓抑制导致的血小板减少。     

海藻糖保护同种带瓣大动脉的最适浓度

背景:目前液氮低温保护组织和器官技术已经非常成熟,但其保护剂一直以来争论不一。目的:观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉组织细胞凋亡和代谢的影响,寻求最佳的冷冻保护剂及冷冻保护剂的最适浓度。方法:取新西兰大白兔带瓣主动脉、肺动脉标本,将其在液氮中冻存12,15,18个月,冻存液分别使用0.1mol/L二甲基亚砜,0.1mol/L海藻糖,0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜。标本复温后,免疫组织化学方法检测标本的细胞凋亡情况,葡萄糖消耗量测定法检测组织细胞的代谢水平。结果与结论:免疫组织化学和葡萄糖消耗量测定结果均显示经0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜冻存液处理的标本冻存效果最好,其次是经0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜处理和经0.1mol/L海藻糖单独处理的标本,单独使用0.1mol/L二甲基亚砜处理的标本冻存效果最差。说明海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉活性有很好的保护作用,单独使用海藻糖优于单独使用二甲基亚砜,联合应用海藻糖和二甲基亚砜效果更好,且联合应用的海藻糖最佳浓度范围是0.10~0.20mol/L。     

经皮冷消融治疗局部进展性胰腺癌的可行性

目的 前瞻性观察经皮冷消融治疗的不良反应、肿瘤变化及近期疗效,探讨该技术治疗局部进展性胰腺癌的可行性.方法 2008年9月至2009年9月共59例局部进展性胰腺癌患者采用氩/氦为基础的冷冻系统,在超声引导下行经皮冷消融治疗.将冷冻探针插入胰腺肿块的中心,做2次循环冷冻,每次冷冻5 min,温度为-160℃,然后复温,持续10 min.检测治疗前和治疗后7 d的血清淀粉酶活性;冷消融后每4～6周行CT扫描评价肿瘤变化;应用Kaplan-Meier法计算生存率.结果 59例患者共有76个活检证实的肿瘤,位于胰头部56个、胰体部7个、胰尾部13个.肿瘤中位大小4.5 cm,19例伴肝转移.术后发生腹痛45例(76.3%),发热29例(49.2%),血淀粉酶升高34例(57.6%),严重并发症(腹腔内出血、胰漏、肠梗阻和冷冻探针针道转移)5例(8.5%),无冷消融相关性死亡.中位住院时间21 d.2例(3.4%)获得完全缓解,23例(39.0%)获得部分缓解,30例(50.8%)疾病稳定,4例(6.8%)疾病进展.中位存活期8.4个月;3、6、12个月存活率分别为89.7%、61.1%和34.5%.结论 超声引导下的经皮冷消融是一种安全可行的局部进展性胰腺癌微创治疗技术.     

氩氦刀冷冻消融术治疗180例肝癌临床分析

目的探讨氩氦刀冷冻消融术治疗肝癌方法的安全性和近期疗效。方法选择180例肝癌患者在超声引导下行经皮穿刺氩氦刀冷冻治疗。术后定期复查肿瘤标志物及CT或MRI随访。结果小肝癌（≤5cm）患者135例,85%达到完全消融。大肝癌（〉5cm）患者45例,治疗后AFP降至正常范围或CT、MRI提示肿瘤完全坏死21例,占46.8%。转移性肝癌44例,治疗后肿瘤标志物降至正常或CT、MRI提示完全坏死30例,占68.2%。结论超声引导下肝癌的经皮穿刺氩氦刀冷冻消融术是一种安全、有效的治疗方法。