耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的：建立快速检测耐多药结核分枝杆菌的分子药敏方法，掌握南通地区结核分枝杆菌KatG及rpoB基因的突变特点，探索结核分枝杆菌耐异烟肼、利福平直接检测的可行性。方法：收集47例耐异烟肼、利福平的结核分枝杆菌临床分离株行PCR结合DNA直接测序法检测KatG及rpoB基因突变。以结核分枝杆菌标准株H37Rv为参比菌株，应用BACTEC460TB快速培养系统进行结核分枝杆菌自动培养、药敏。结果：47例耐异烟肼、利福平分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29例(61．7％)、43例(91．5％)，两者同时突变26例(55．3％)。结论：PCR-直接测序法敏感、特异、可靠实用，可快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变，用于临床耐多药结核快速检测。     

PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌耐药性

目的：探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(poly merase chain reaction-single strand cinfomlation polymorphism，PCR-SSCP)方法的临床应用价值。方法：用PCR-SSCP方法检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果：经常规药敏试验检测，58株结核分枝杆菌临床分离株中共有41株耐药，其中，耐异烟肼(INH)为35株，高耐药株27株；耐利福平(RFP)为31株，高耐药株24株；耐链霉素(SM)有31株，高耐药株26株。同时耐3种药物的有21株(51．2％)，耐2种药物的14株(34．1％)，单耐药株6株(14．6％)．PCR-SSCP方法对58株临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变的检测率为40％(23／58)，45％(26／58)，38％(22／58)，其中检出3个基因同时突变的有13株(32％)，2种基因突变的12株(29％)，1种基因突变的有10株(23．8％)．常规药敏试验与PCR-SSCP法检出结核分枝杆菌同时耐3种药物的符合率为61．9％(13／21)，检出耐2种药物的符合率为85．70k，(12／14)，检出耐1种药物的符合率为50％(3／6)．高耐药株中突变率为80．5％(62／77)，低耐药株中突变率为60％(12／20)．结论：PCR-SS-CP方法对耐2种以上药物的结核杆菌检出率较高，且耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高。将PCR-SSCP法与药敏试验联合应用可互相弥补，已成为临床指导用药的好方法。     

手腕部结核性分枝杆菌感染

目的 探讨手腕部结核性腱鞘滑膜炎的诊治经验 方法 2001年1月至2008年1月，对12例手腕部结核性腱鞘滑膜炎患者进行手术、抗结核、功能锻炼等综合治疗，分析其治疗疗效，诊断，误诊原因。结果　12例患者的手腕部结核性腱鞘滑膜炎全部治愈。术后随访6 个月~1年,未见复发。功能恢复满意，12 例手指及腕部活动良好。正中神经压迫症状完全缓解。结论 核性腱鞘滑膜炎早期缺乏特异性诊断指标, 结核菌素试验及组织活检抗酸染色阴性不能完全排出诊断，组织学检查以往作为诊断金标准，但易与非结核性分枝杆菌感染引起的慢性肉芽肿混淆，细菌培养阳性率低，今后应加强应用分子生物学手段进行检测明确诊断。及时作病灶清除术、加上系统的抗结核药物和功能锻炼等综合治疗,可以完全治愈。     

微创包皮根部环切术287例体会

男性中包皮过长较普遍。由于包皮过长易积聚包皮垢，冠状沟部潮湿的环境为病菌的滋生创造了条件，易引起包皮阴茎头炎或上行性泌尿系感染，同时也增加了已婚女性宫颈炎等妇科疾病的患病率。随着人们保健意识的增强，要求手术者不断增多。通常情况下，包皮环切术是在包皮前端进行，近6年来，笔者采用微创根部环切法对包皮过长者实施手术287例，取得了常规手术无法达到的美容效果，现报告如下。     

结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达

目的 克隆表达结核分枝杆菌促Rv1009基因,序列测定正确后进行融合、表达.方法 采用热启动聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入pGEX 4T-2载体中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,目的基因经IPTG诱导,表达Rv1009基因蛋白.结果 经PCR扩增在1300bp处发现一条目的片段,获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009基因蛋白,经诱导后高效表达分子量为64KD的外源蛋白,与预期分子量大小一致,凝胶自动扫描分析,在A600值为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达3 h时融合蛋白表达量即达峰值,占菌体总蛋白的22.8%.结论 构建了结核分枝杆菌Rv1009基因重组表达载体,获得了RPF样融合蛋白的高效表达,为今后深入研究奠定了基础.     

HBV、TB合并感染时抗TB治疗对肝功能的影响

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)、结核(TB)杆菌合并感染时抗TB药物所致肝损伤的临床及组织学特点。方法:单纯TB感染者45例,TB合并HBV感染者35例,前4月均服用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇,后2月服用异烟肼、利福平。每2～4周复查肝功能、HBV标记物、T细胞亚群等指标,部分患者进行了肝穿刺病理检查。结果:TB HBV组肝功能异常发生率为34.3%,较单纯TB组高,发生时间较单纯TB组早半月,发生平均年龄小8岁;谷丙转氨酶水平、肝组织学炎症积分均较TB组高(P<0.05);肝功能异常者中80%为HBeAb阳性,T细胞免疫功能紊乱较重,CD4 细胞明显减少(P<0.05)。结论:HBV、TB合并感染时,抗TB药物的肝毒性增强,治疗过程中应及时复查肝功能。     

PCR检测结核分枝杆菌DNA中不同细菌裂解方法结果观察

目的：寻找适合于临床ＰＣＲ检测结核杆菌ＤＮＡ简单、快速、有效、经济的细菌裂解方法。方法：采用１１种细菌裂解剂对相同数量的结核分枝杆菌进行裂解，裂解上清液直接用于ＰＣＲ扩增，结果：１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００，１％ＮＰ４０，１％Ｔｅｗｅｅｎ２０、和１％ＯＰ四种裂解剂的裂解液可直接扩增出结核分枝杆菌ＤＮＡ；ＳＤＳ，ＮａＯＨ，十二烷基肌酸钠等裂解剂的裂解液直接用于ＰＣＲ扩增均为阴性。结论：１％的Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００，ＮＰ４０、Ｔｅｗｅｅｎ２０和乳化剂ＯＰ裂解细菌效果好，又不抑制ＰＣＲ反应，适合于作为临床ＰＣＲ检测结核杆菌的裂解剂。     

女性生殖器结核的诊断及误诊

女性生殖器结核是由结核分枝杆菌侵入机体后在生殖器引起的一系列炎症改变，多发生在性成熟期及生育年龄妇女，以20～40岁多见。近年来，由于流动人口量增大，吸毒增多，耐多药结核（MDR-TB）和艾滋病毒感染病例逐增，导致在世界范围内结核病的发病率形成第三次回升高峰，女性生殖器结核的发病率也呈升高趋势，在发展中国家尤然。但由于其缺乏典型的临床症状，无明确的结核病史及辅助检查特异性差，使得临床误诊率较高。现就女性生殖器结核的诊断及误诊做一综述。[第一段]     

结核分枝杆菌耐药基因快速检测

目的 探讨结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)的耐药分子机制，采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)同时检测rpsL基因、rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR-SSCP技术对122株结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因、rpoB基因突变同时进行检测，即首先用PCR方法同时扩增RFP、SM的rpoB基因和rpsL基因，然后进行SSCP分析。结果 以结核分枝杆菌H37RV为对照，48株药物敏感株的rpsL基因、rpoB基因均未见SSCP图谱异常。特异性为100.0％，74株同时耐链霉素和利福平的耐药株中，59株(79.7％)有rpsL基因图谱异常；69株(93.2％)有ropB基因图谱异常。结论 ropB基因突变和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌耐利福平和链霉素的主要分子机制。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分枝杆菌链霉素和利福平耐药性。