缺氧对PC12细胞中活性氧含量和缺氧诱导因子 血管内皮生长因子表达的影响

目的研究缺氧对PC12细胞中ROS含量和HIF-1α、VEGF表达的影响,初步探讨缺氧损伤的分子机制。方法使用三气培养箱建立PC12细胞缺氧损伤模型;观察缺氧环境下细胞形态的改变;MTT法检测细胞存活率;DCHF-A染色检测ROS的含量;RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达;Western Blot检测HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果与正常组相比较,缺氧24 h后ROS明显升高;HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达较正常组明显升高。结论缺氧24 h后可以导致PC12细胞中ROS含量、HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达升高。     

HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量

目的建立HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量。方法色谱柱：Hypersil ODS2C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：甲醇-水（48∶52）,检测波长：440 nm;流速：1.0 ml·min-1;柱温：室温。结果西红花苷-Ⅰ在12~45μg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.44%,RSD为1.19%（n=6）;西红花苷-Ⅱ在6.4~24μg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.79%,RSD为1.38%（n=6）。结论本法简便、快速、准确,可用于红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量测定。     

HPLC测定人参固本胶囊中人参皂苷Rg1,Re的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)测定人参固本胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定方法.方法:Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-0.05％磷酸(19.3∶80.7),检测波长203 nm,柱温室温,流速1.0 mL· min-1.结果:人参皂苷Rg1在0.216～5.400μg呈良好的线性关系(r =0.999 4),平均回收率98.53％(RSD1.10％),人参皂苷Re在0.212～5.300 μg呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率98.36％(RSD 1.35％).结论:方法简便快速、专属性强、准确度高,可用于人参固本胶囊的质量控制.     

独一味不同提取物工业化提取分离纯化工艺研究

目的 应用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱色谱法富集分离独一味中黄酮类、苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类及大极性成分(生物碱盐、糖类等),并实现工业化生产.方法 独一味水提物经聚酰胺和大孔吸附树脂串联及并联方法,用CCPP系列色谱设备进行分离富集,LM-125型超滤设备超滤纯化,JYT-50 LN多功能动态热回流提取浓缩机组减压干燥,分别富集得到水洗脱物、70％乙醇洗脱物Ⅰ(70％乙醇洗脱聚酰胺柱)、70％乙醇洗脱物Ⅱ(70％乙醇洗脱大孔吸附树脂柱)、超滤物;采用一阶导数紫外分光光度法测定总环烯醚萜苷的量,采用碱性硝酸铝-亚硝酸钠显色分光光光度法测定总黄酮和总苯乙醇苷的量,采用HPLC法测定山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯.结果 采用70％乙醇为溶媒,聚酰胺柱采用“上进下出”的进样方式和“上进下出”的洗脱方式,大孔吸附树脂柱采用“下进上出”的进样方式和“上进下出”的洗脱方式时,70％乙醇洗脱物Ⅰ、70％乙醇洗脱物Ⅱ、超滤物的得率分别为2.43％、20.80％、82.60％.结论 此生产工艺方法及参数可以成功地将实验成果转化为工业化生产.     

人参皂苷对缺氧大鼠的保护作用及其机制

目的:研究人参皂苷对缺氧大鼠的保护作用及其机制。方法:首先采用常压密闭缺氧模型考察了人参皂苷对大鼠存活时间的影响,确定最佳给药剂量。再将40只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组和人参皂苷组。每组按照不同缺氧时间点再分为2个亚组,各亚组10只大鼠,分别观察各组大鼠缺氧前后脑和心脏组织的病理学变化情况,并采用RT-PCR检测HIF-1α、EPO、Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:通过观察HE染色病理切片发现缺氧6 h后模型组大鼠脑和心脏组织均出现严重的病理损伤,而人参皂苷组的缺氧损伤情况得到明显减轻。基因检测结果表明,在缺氧环境下,缺氧模型组大鼠脑和心脏组织HIF-1αmRNA和Caspase-3 mRNA表达水平升高,人参皂苷组较缺氧模型组显著降低(P<0.01);缺氧模型组和人参皂苷组大鼠脑组织EPO mRNA表达虽有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05),心脏组织EPO mRNA未表达。结论:人参皂苷可改善缺氧大鼠脑和心脏组织的损伤,其机制可能与影响HIF-1α、EPO、Caspase-3 mRNA的表达、调节大鼠组织内部氧平衡、促进红细胞生成、抗凋亡有关。     

2型糖尿病大鼠认知行为的改变及新型褪黑素受体激动剂Neu-P11的调节作用

目的 评价2型糖尿病大鼠认知功能的变化和新型褪黑素受体激动剂Neu-P11的调节作用及其作用机制.方法 采用高脂饲料喂养2月联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型,分为正常对照组、模型组和Neu-P11组,各8只;正常对照组和模型组每日1次灌胃生理盐水,Neu-P11组每日1次灌胃Neu-P11 (5 mg/kg).第25天进行情绪唤醒实验,第32天进行旷场实验,第34天收集24 h尿液测定尿游离肾上腺皮质激素(CORT)水平,第35天断头处死大鼠并收集躯干血测定血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和CORT水平.结果 模型组情绪唤醒实验综合得分低于正常对照组(P＜0.05),而Neu-P11组与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组中央格停留时间长于对照组(P＜0.05),水平运动得分和垂直运动得分低于正常对照组(P＜0.01);Neu-p11组中央格停留时间短于模型组(P＜0.05),垂直运动得分高于模型组(P＜0.05).模型组尿CORT水平显著高于正常对照组(P＜0.01).Neu-P11组血清CRH、CORT及尿CORT水平低于模型组(P ＜0.05,P＜0.01),而血清ACTH水平高于模型组(P＜0.05).结论 新型褪黑素受体激动剂Neu-P11可改善2型糖尿病大鼠的认知功能障碍,降低下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进可能是其主要的作用机制.     

超快速液相色谱—质谱/质谱联用法测定氯丙嗪制剂中氯丙嗪含量

目的建立简单超快速液相色谱—质谱/质谱联用法测定氯丙嗪制剂中氯丙嗪的含量。方法样品以乙醇提取、微孔滤膜滤过、离心后,通过电喷雾离子化(ESI),采用多反应检测方式进行正离子检测,用于定量分析的检测离子为质荷比319.0→85.8。采用Shim-pack XR-ODS(3.0 mm×75 mm,2.0μm)柱分离,以乙腈—水—甲酸(90∶10∶0.02,V/V/V)为流动相,流速为0.40 m L/min,在3 min内完成氯丙嗪定量分析。结果线性范围为1~256 ng/m L,最低检测限为1 ng/m L;日内、日间测定的相对标准偏差分别小于1.34%、1.89%。结论本方法重复性好,灵敏度高,分析速度快,操作简单,可作为氯丙嗪制剂中氯丙嗪质量控制方法。     

氨茶碱对急进高原大鼠部分生理病理变化的影响

目的：观察平原Wistar大鼠急进实地4 300 m海拔高原后,氨茶碱药物干预对急进大鼠体内部分病理生理 指标的影响及其意义。方法：将21只成年健康Wistar大鼠按体质量随机分为平原组(海拔55 m)、高原缺氧组(海拔 4 300 m)、高原缺氧+氨茶碱组(海拔4 300 m),连续给药5 d后,取眼眶静脉丛血2 mL分析其主要生化指标,同时解 剖大鼠,取腹主动脉血1 mL分析其主要血气指标,完整摘取脑、肺、肝组织进行病理切片观察。结果：与平原组 相比,缺氧组与给药组乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、尿素(urea solution,Urea)、血清氯离子浓度(serum chloride concentration,cCl−)均明显升高(P<0.01),白蛋白(albumin,ALB)、 肌酐(creatinine,Cr)、血氧饱和度(oxygen saturation,SatO2)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞压积(hematocrit value,Hct)、二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)、氧分压(partial pressure of oxygen,PaO2)、缓冲 碱(buffer base,BB)、剩余碱(blood base excess,BE)等指标均明显降低(P<0.01),与缺氧组相比,给药组Cr、酸碱值 (pH)、Hct、血清钠离子浓度(cerum sodium concentration,cNa+)、cCl−均明显升高(P<0.01),门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate transaminase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、ALB、PaCO2、血清钾离子浓度(serum potassium concentration,cK+)均明显降低(P<0.01或P<0.05)。病理结果显示：缺氧组和给药组脑、肺、肝组织与平原组 相比均有明显损伤,而给药组与缺氧组相比,损伤有所减轻。结论：氨茶碱能够通过改变急进大鼠的血气、生化指 标状态,保护大鼠脑、肺、肝功能,减轻急进高原造成的损伤,其机制可能与氨茶碱舒张支气管平滑肌,改善机体 通气量以及抗炎作用有关。     

栀子苷的快速提取分离及其镇痛抗炎作用研究

目的:快速提取分离栀子苷单体,研究其体内镇痛、抗炎作用。方法:大孔吸附树脂初步纯化后,采用中压柱层析系统从中药栀子中快速提取分离栀子苷单体。将SPF级BALB/c小鼠分为5组,分别为对照组(生理盐水),栀子苷50,100,200 mg.kg-1组,吗啡或阿司匹林组(5,100 mg.kg-1)。小鼠尾静脉注射一次给药后,采用醋酸扭体实验、热板实验、二甲苯耳肿胀实验,角叉菜胶足肿胀实验,评价分离得到的栀子苷单体的体内镇痛、抗炎作用。结果:大孔吸附树脂初步纯化后得到栀子苷含量为78.96%,中压柱层析纯化后,栀子苷单体含量提高到98.47%。与对照组比较后得到,提取出的栀子苷能显著减少由腹腔注射醋酸引起的小鼠扭体次数(P<0.05),抑制二甲苯引起的耳肿胀(P<0.05)以及角叉菜胶引起的足肿胀(P<0.05),并呈现剂量依赖性。对小鼠热板痛阈值无明显影响。结论:实现了栀子苷的快速制备分离,分离获取的栀子苷具有较好的体内镇痛、抗炎作用。     

高原环境损伤与HPT轴的应激性变化

我国是世界上高原地域最辽阔、居住人口最多、高原边境线最长的国家。高原环境典型表现为平均海拔较高、气压较低、空气稀薄,氧分压仅有平原地区的50%左右,平均气温低。由平原快速集结高原初期,因高原低氧、干燥、大风等影响,机体器官的生