重组酶介导核酸等温扩增荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的研究北大核心CSCD

目的探索重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的可行性。方法用日本血吸虫毛蚴人工感染200只湖北钉螺,随机分为阳性对照组和实验组各100只,另取100只未感染钉螺作为阴性对照组。将阳性对照组钉螺饲养至70 d,通过逸蚴法观察感染情况并计算阳性率。实验组钉螺分别在3 h以及5、20、40、70 d随机取20只,压碎镜检,同时提取钉螺软体DNA,进行荧光RAA法检测,获得不同时间点的阳性率,并与阳性对照组相比较。通过二代测序法对RAA检测阳性的特异性扩增产物进行测序鉴定。结果毛蚴感染后3 h、5 d、20 d、40 d、70 d实验组钉螺RAA法检测阳性率分别为60%、60%、65%、60%、70%,压碎镜检的阳性率分别为0、0、0、15%、65%,除70 d外其余时间点两种检测方法的阳性率差异均有统计学(χ^2=17.14,χ^2=17.14,χ^220 d=19.26,χ^2=8.64,均P<0.01);各时间点间阳性率差异无统计学意义(χ^2=0.68,P>0.05),各时间点阳性率与阳性对照组阳性率64.6%比较差异均无统计学意义。RAA扩增产物经二代测序后与数据库比对,确认为血吸虫特异性基因片段。结论 RAA荧光法敏感、特异,可用于日本血吸虫感染性钉螺的早期检测。     

江苏省血吸虫病查病质控体系的构建与应用 Ⅱ 县级人员病原学检测能力评估

目的 评价江苏省县级血防机构开展血吸虫病病原学检测水平,提高专业技术人员血吸虫病病原学检测能力,为构建血吸虫病现场查病质控体系提供技术支撑。方法 人工获取家兔血吸虫肝卵,制备成4个不同浓度的虫卵悬液,采用单盲法开展虫卵孵化检测,比较县级工作员检测结果与标准结果的符合率、误检率和漏检率。结果 江苏省28个县（市、区）共检测虫卵悬液560份,检出阳性283份,阴性203份,总符合率为86.79%,总误检率为9.38%,总漏检率为15.77%,检测结果与标准结果差异有统计学意义（[χ2] = 12.99,P < 0.01）。28个县（市、区）中有20个县（市、区）出现了漏检,占71.43%;13个县（市、区）出现了误检,占46.43%。江滩、山丘、水网和湖滩4类地区病原学检测误检率为4.55%～43.75%,差异有统计学意义（[χ2] =30.34, P < 0.01）;漏检率为4.17%～20.45%,差异无统计学意义（[χ2] = 5.09,P = 0.17）。传播控制和传播阻断2类流行区病原学检测误检与漏检率分别为7.50%、13.33%与10.42%、17.13%,差异无统计学意义（[χ2] = 0.229、0.575,P 均> 0.05）。达到血吸虫病传播控制10年及以上和不足10年地区误检与漏检率分别为11.81%、5.00%与16.67%、14.17%,差异无统计学意义（[χ2] = 2.804、2.848,P均 > 0.05）。达到血吸虫病传播阻断10年及以上与不足10年地区误检率分别为11.54%与10.00%,差异无统计学意义（[χ2] = 0.069,P = 0.792）;漏检率分别为10.90%与35.00%,差异有统计学意义（[χ2] = 17.364,P < 0.01）。结论 江苏省县级水平血吸虫病查病工作存在漏检、误检现象,现场病原学检测能力有待进一步提高。     

镇江市润州区血吸虫病传播阻断策略及实施效果

目的 评价镇江市润洲区血吸虫病传播阻断策略的实施效果。方法 2001-2016年在镇江市润洲区实施以全覆盖灭螺、血吸虫病扩大化疗和健康教育为主的血吸虫病综合防治策略,以居民血吸虫感染率、有螺面积、灭螺面积和居民血防知识知晓率、行为正确率为指标评估综合防治策略的实施效果。结果 2001-2016年镇江市润州区有螺面积总体呈下降趋势,累计灭螺面积7 091.50 hm2,有螺面积和总灭螺覆盖强度呈显著负相关（[r = -0.874,P = 0]）。2001-2016年镇江市润州区常住居民血吸虫病血检阳性1 703例,粪检阳性病人199例;对粪检阳性者和血检阳性者全部采用吡喹酮进行治疗和扩大化疗;2005年后居民血检阳性率下降至1%以下,自2004年后未查出粪检阳性病人。2001-2016年问卷调查居民189 639人次,居民血防知识知晓率和行为正确率逐年提升。全区于2016年达到血吸虫病传播阻断标准。结论 江滩型血吸虫病流行区实施以全覆盖灭螺、吡喹酮扩大化疗和健康教育为主的综合防治策略可实现血吸虫病传播阻断目标。     

2010-2016年江苏省发热病人血检结果分析

目的 分析江苏省启动消除疟疾行动后发热病人血检工作及其成效,探讨适合本地区消除疟疾阶段的疟疾诊断和监测方法。方法 收集2010-2016年江苏省网络报告疟疾疫情、发热病人血检、寄生虫病防治信息专报系统中疟疾病例个案流行病学调查表等数据进行统计分析。结果 2010-2016年江苏省共报告疟疾病例2 367例;共血检发热病人3 691 188人·次,检出阳性2 252例,阳性率0.06%。江苏省发热病人血检数由2010年的74.29万人·次下降到2016年的27.70万人·次,血检率呈明显下降态势;血检阳性率由2010年的0.04%上升至2016年的0.11%,呈明显上升趋势,2016年江苏省发热病人血检阳性率明显高于2010年发热病人血检阳性率（[χ2] = 161.61,P < 0.01）。2010-2016年江苏省各县（市、区）疾病预防控制中心在3 d内完成血片复核,因血片复核结果为阴性删除病例共计273例。2010年江苏省各县（市、区）疾病预防控制中心因血片复核阴性删除61例,2016年因血片复核阴性删除14例,2010年血片复核阴性占比率明显高于2016年血片复核阴性占比率（[χ2] = 22.99,P < 0.01）。结论 江苏省开展了大量发热病人血检工作,符合WHO提出的“强有力的监测体系”消除疟疾工作要求,同时也为江苏省从2012年起无本地感染疟疾病例提供了佐证。     

中华按蚊细胞色素P450基因表达特征分析

目的 探讨6种溴氰菊酯抗性候选细胞色素P450（CYP）基因（CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16）在中华按蚊体内的表达特征。方法 收集中华按蚊不同发育时期（卵、幼虫、蛹、雌性成蚊和雄性成蚊）和组织（唾液腺、马氏管、中肠、卵巢以及脂肪体）样本,以及雌性成蚊在暴露于不同溴氰菊酯剂量（0、1.25、3.75、6.25、12.5 μg/瓶）和时间（0,5、15、30、60 min）后的样本.提取总RNA,利用反转录实时定量PCR（qPCR）技术分析CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16基因在中华按蚊不同发育时期、组织以及不同溴氰菊酯接触剂量和时间下的相对表达量。结果 CYP6M3与CYP6Y1基因在雄性中华按蚊成蚊体内的表达量最高,CYP6M3基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的35.1倍,CYP6Y1基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的61.4倍;CYP4H14基因在幼虫期表达量最低,且在雌性成蚊体内表达量是四龄幼虫体内表达量的22.5倍。候选CYP基因在中华按蚊不同组织内的表达量差异具有统计学意义,CYP6M3基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的38.9倍,CYP6Y1基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的9.1倍,CYP6P5基因在中肠内的表达量是在卵巢中的30.3倍,CYP4G17基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的4.6倍,CYP12F16基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的4.4倍。接触不同溴氰菊酯剂量和时间对候选CYP基因的表达水平表现出一定的诱导效应,影响候选CYP基因在中华按蚊体内的表达。结论 候选CYP基因在不同发育期中华按蚊体内和不同组织中差异表达,暴露于不同溴氰菊酯剂量和时间影响CYP基因在中华按蚊体内表达。     

Treg和Th17细胞在寄生虫感染和卫生假说中的免疫调节

寄生虫感染在发展中国家仍然是一个严重威胁人类健康、影响社会经济发展的公共卫生问题。近年来,随着分子生物学和免疫学等研究进展,人们对寄生虫感染的免疫防御反应及免疫病理机制有了更多认识。CD4~+T细胞在机体免疫防御及免疫调节中发挥着非常重要的作用。传统上认为CD4~+T细胞在体内外可分化成Th1、Th2两大细胞亚群,它们产生不同的细胞因子,发挥不同功能。后来又发现了两种新的CD4~+T细胞亚群,即Th17细胞和调节性T(Treg)细胞。它们具有与传统的Th1、Th2细胞完全不同的、独立的分化和调节机制。已有大量研究证实,Treg和Th17细胞在寄生虫病的抗虫免疫及免疫病理机制中发挥着重要作用。此外,Th17和Treg细胞在寄生虫感染所诱导的卫生假说中的作用越来越受到重视。本文根据当前国内外有关Treg和Th17细胞分化及功能的研究进展,对Treg和Th17细胞在寄生虫感染及卫生假说中的作用作一简要综述。     

羊在日本血吸虫病传播中的作用Ⅱ温度和湿度对羊粪中虫卵存活的影响及虫卵在自然环境中的存活状况

目的调查羊粪中日本血吸虫虫卵在江滩自然环境中的存活情况及其影响因素,为研究羊在日本血吸虫病传播中的作用提供实验依据。方法建立日本血吸虫感染山羊动物模型,收集感染性山羊粪便,观察环境温度和羊粪含水量对羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率的影响。选择江堤外一块草滩作为实验现场,观察春、冬季羊粪在江滩的暴露时间对虫卵孵化率以及阳光直晒对虫卵生存的影响。结果在25℃实验室环境中,羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率与羊粪含水量呈高度正相关(r=0.87)。当羊粪含水量降至7.6%时,虫卵失去孵化能力。保持羊粪含水量不变,将羊粪暴露在-5℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低;暴露5 h后,孵化率降至0。将羊粪样本暴露于5、15℃和25℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露52 d后仍有2.3%、5.0%和0.9%虫卵存活并可孵化出毛蚴。将羊粪暴露于35℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露13 d后孵化率降为0。冬季(气温-2~10℃)随暴露时间延长,暴露于江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露21 d后孵化率降至0。春季(气温16~19℃)随暴露时间延长,暴露在江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露5 d后虫卵孵化率降至0.9%。同一滩块暴露相同时间后,暴露在有阳光直晒滩面羊粪中的虫卵孵化率低于无阳光直晒滩面。结论羊粪中的日本血吸虫虫卵生存与环境温度和羊粪含水量(即湿度)有关,温度和湿度是影响虫卵孵化的主要自然因素。     

中国医疗援非中的话语权建设问题研究

目的 分析我国医疗援非中的话语权建设问题,为提高我国医疗援非效果、促进我国医疗援非事业的可持续发展提供依据。方法 搜集我国医疗援非中话语权建设的相关材料,以话语权要素中的有自信、有感染力、有影响、有主导权四个要素为出发点,分析我国医疗援非中话语权建设的成就与不足。结果 中国医疗队的话语自信心虽不断增强,但过于谨小慎微、过于低调的现象依然存在;中国医疗队虽取得了非洲人民的信任,但语言交流的困难仍阻碍着医疗援非工作的有效开展;中国医疗队虽赢得了非洲社会的广泛赞誉,但当前西方以及非洲部分媒体,甚至中国媒体都忽视了对援非中国医生的关注和报道;中国国际话语权虽有了较大程度提升,但西方国家仍掌握着舆论的主导权。结论 中国在医疗援非中需结合具体实际,加强话语权建设。     

等温扩增技术在寄生虫及其他病原体检测中的应用

以聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）为基础的体外核酸扩增技术已成功应用于科学研究各方面。近年来等温扩增技术（Isothermal amplification technology）凭借恒温、高效、耗时短、不过分依赖设备仪器等优点越来越多地被应用于分子诊断及疾病检测中。本文对现有的部分等温扩增技术原理、特点以及在寄生虫病病原体及其他病原体检测方面的应用进行综述,并展望其应用前景。     

重组酶介导的日本血吸虫特异性基因片段核酸等温扩增检测方法的建立

目的 建立一种可用于日本血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法（RAA）。方法 以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成引物,建立并优化RAA反应体系。应用此方法与聚合酶链式反应（PCR）同时扩增梯度稀释的含不同拷贝数的SjG28基因片段TA克隆质粒及不同浓度的基因组DNA,以评价其敏感性;应用此方法检测曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA及健康人血基因组DNA,以评价其特异性。结果 建立的RAA法可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株成虫及虫卵基因组DNA,反应可在30 min内完成。以重组质粒为模板,RAA法最低可检出的质粒拷贝数为20个/μL;以基因组DNA为模板,RAA法最低可检测浓度为0.01 ng/μL。建立的RAA法以健康人全血基因组DNA及曼氏血吸虫成虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性。结论 本研究建立了一种反应快捷、敏感性和特异性均较高的RAA方法,其具有应用于日本血吸虫病基因诊断的价值。