中国肥胖患者β2 肾上腺素受体基因多态性的研究

目的 研究β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor, β2AR)基因多态性是否与中国人肥胖有关联,为探讨肥胖的分子遗传基础提供依据.方法 应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析法 (PCR-RFLP),对成都地区396名汉族人(270例非肥胖者及126例肥胖者)β2AR基因Arg16Gly和Gln27Glu多态性位点进行分析.结果 β2AR基因Arg16Gly位点Arg、Gly等位基因的频率在肥胖组为0.571、0.429,在非肥胖组为0.559、0.441;Gln27Glu位点Gln、Glu等位基因的频率在肥胖组为0.920、0.080,在非肥胖组为0.916、0.084.上述位点在两组间等位基因的频率差异均无统计学意义(P>0.05).在Arg16Gly位点,非肥胖组女性和肥胖组男性Arg/Arg基因型携带者血清 TC 和 LDLC 水平分别高于Arg/Gly和Gly/Gly基因型携带者(P<0.05);此外,apoB100 水平在女性非肥胖组Arg/Arg型者及肥胖组Arg/Gly型者分别升高和降低,apoAⅠ、apoAⅡ水平分别在肥胖和非肥胖男性Arg/Arg型者降低.Gln27Glu 多态位点各基因型亚组间血脂和载脂蛋白水平在非肥胖组和肥胖组差异均无统计学意义(P>0.05).结论 β2AR基因Arg16Gly和Gln27Glu多态性与成都地区中国汉族人肥胖无关联,但Arg16Gly位点对特定性别非肥胖及肥胖人群血清TC、LDLC及部分载脂蛋白水平有一定影响.     

人VIGILIN参与调控肝癌细胞H19和IGF2印记基因表达的研究

目的 探讨人高密度脂蛋白结合蛋白基因(VIGILIN)是否参与肝癌细胞在细胞周期中印记基因H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)表达的调控.方法 通过流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2细胞周期选择周期点,采用RT-PCR、RNA干扰、实时荧光定量RT-PCR检测各周期点VIGILIN、H19、IGF2基因表达.结果 ① HepG2细胞周期约为20 h;其中0～9 h、20～28 h约为S期,9～20 h、28～39 h约为G2/M、G1期,并选定6 h、20 h、43 h、60 h,分别代表S期中期、G1～S期、S期中期和G1期末; ②细胞周期同步化后加入血清,刺激VIGILIN转录,上调VIGILIN的表达,从G2/M至G1期,逐渐增加,G1期末达高峰,S期逐渐减少;与之相反,H19的表达,在S期逐渐增加,在G2/MG1期逐渐减少,在S期中期达到高峰.而IGF2的表达也增加但没有明显的周期性.H19与VIGILIN mRNA表达呈负相关(r=-0.6941,P<0.05).③用VIGILIN shRNA(pSIREN-VIG shRNA)重组载体转染HepG2细胞48 h后,相对于3个对照组(未转染组, 脂质体转染组和转染pSIREN-GFP shRNA组), 实验组VIGILIN mRNA的表达受到明显抑制,此时,IGF2 mRNA表达增加30.13%,H19 mRNA表达减少12.08%.结论 VIGILIN和H19 mRNA表达与细胞周期有关;VIGILIN参与调控H19、IGF2印记基因的表达.     

人21.5kDa MBP基因对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡作用研究

目的 探讨人21.5kDa髓鞘碱性蛋白(MBP)对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡的影响.方法 用含21. 5kDa MBP基因的pSVCEP-MBP-CAT质粒转染肝癌细胞(HepG-2),设空质粒转染为对照组,用RT-PCR、Western blot杂交检测转染效果,后以H2O2处理上述细胞,通过MTT测定细胞增殖曲线,DNA琼脂糖电泳、免疫细胞化学分析、彗星电泳、TUNEL原位杂交等多种方法检测凋亡及相关蛋白的表达情况.结果 人21.5kDa MBP基因在肝癌HepG-2细胞转染成功, MTT测定细胞增殖曲线显示阳性转染组细胞有增殖和抗凋亡的作用,DNA琼脂糖电泳显示对照组有大量的DAN ladder形成,Caspase-3免疫组化证实对照组细胞Caspase-3表达显著升高,彗星电泳和TUNEL原位杂交显示对照组DNA损伤及凋亡严重而转染组较轻. 结论人21.5kDa MBP对肝癌HepG-2细胞有促进增殖和抗凋亡的作用.     

固醇调节元件结合蛋白-1c基因54G/C多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年人血脂比值的影响

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)基因54G/C多态性对健康青年血脂比值的影响及在高糖低脂(high-carbohydrate/low-fat,HC/LF)膳食诱导的变化中的作用.方法 对56名健康志愿者,给予7 d平衡膳食和6 d HC/LF膳食,平衡膳食蛋白、脂肪、碳水化合物含量分别为15%,31%,54%,HC/LF膳食分别为15%,15%,70%.于第1 d,第8 d及第14 d抽取空腹12 h静脉血,测定血脂及血糖水平,计算血脂比值.分离血基因组DNA,聚合酶链反应-限制性酶切法分析SREBP-1c基因54G/C多态性.分析不同基因型间血脂比值及血糖的差异.结果 不同基因型受试者血脂比值及血糖基础值差异无统计学意义.平衡膳食后,无论是在受试人群整体还是将男女分组分析,不同基因型之间血脂比值及血糖均无统计学意义.HC/LF膳食后,女性C等位基因携带者低密度脂蛋白胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇比值(loW density lipoprotein cholesterol/high density lipoprotein cholesterol,LDL-C/HDL-C)较GG纯合子显著升高(P＜0.05).与HC/LF膳食前相比,在受试人群整体,总胆固醇(total cholesterol,TC)/HDL-C比值和LDL-C/HDL-C在各基因型中均显著降低(P＜0.05).男女分组分析发现,HC/LF膳食后甘油三酯triglyceride(TG)/HDL-C比值和血浆致动脉硬化指数log(TG/HDL-C)在女性GG基因型受试者较膳食前显著升高(P＜0.05);而TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C在HC/LF膳食后显著下降(P＜0.05),且不受性别和SREBP-1c基因54G/C位点多态性影响.结论 SREBP-1c基因54G/C多态性影响HC/LF膳食诱导的健康青年女性TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)改变.C等位基因可能是一个对防止女性HC/LF膳食诱导的甘油三酯升高的保护性因素.     

血清总胆固醇、甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值同高密度脂蛋白亚类组成关系的研究

目的：探讨血清总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇(TC/HDL-C)、甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇（TG/HDL-C）比值与高密度脂蛋白（HDL）亚类组成及含量关系。 方法： 采用双向电泳-免疫印迹检测法分析了292例受试者血清HDL亚类的组成及含量。 结果： 随血清TC/HDL-C比值增大，preβ1-HDL、HDL3a含量升高，HDL2b、HDL2a含量降低。preβ1-HDL（P＜0.01，高比值组及中间组）、HDL3a（P＜0.05，高比值组）含量显著高于低比值组，而HDL2b（P＜0.01，高比值组及中间组）、HDL2a（P＜0.01，高比值组）含量显著低于低比值组；此外，高比值组preβ1-HDL、HDL3a含量显著高于中间组（P＜0.01，P＜0.05），而HDL2a、HDL2b含量显著低于中间组（P＜0.01，P＜0.01）。随血清TG/HDL-C比值增大，preβ1-HDL、HDL3a含量升高，HDL2b、HDL2a含量降低。preβ1-HDL、HDL3a（P＜0.01，P＜0.05，高比值组）含量显著高于低比值组，而HDL2b、HDL2a（P＜0.01，P＜0.01，高比值组及中间组）含量显著低于低比值组；此外，高比值组preβ1-HDL、HDL3a含量显著高于中间组（P＜0.01，P＜0.05），而HDL2a、HDL2b含量显著低于中间组（P＜0.01，P＜0.01）。相关分析发现，血清TC、TG、TC/HDL-C、TG/HDL-C与小颗粒preβ1-HDL含量呈显著正相关（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01），与大颗粒HDL2b含量呈显著负相关（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）；HDL-C与小颗粒preβ1-HDL含量呈显著负相关（P＜0.05），与大颗粒HDL2b含量呈显著正相关（P＜0.01）。 结论： 血清TC/HDL-C＞5或TG/HDL-C＞2.2时，小颗粒HDL含量明显增加而大颗粒HDL含量明显减少，表明HDL成熟代谢过程受阻，胆固醇逆向转运作用减弱。     

中药成分CDP逆转高甲基化状态的GSTP1基因启动子低转录活性的研究

目的 研究中药成分CDP逆转高甲基化状态的GSTP1基因启动子低转录活性的作用.方法 构建含完全甲基化GSTP1启动子区的重组质粒pGL3-GSTP1prom并转染MCF-7细胞,分别用不同剂量的CDP和5-aza-C作用细胞,检测表达的萤光素酶活性.观察GSTP1启动子转录活性的变化. 结果 GSTP1启动子区被完全甲基化后转录活性显著降低;CDP能够逆转高甲基化状态下GSTP1基因启动子区的低转录活性且呈剂量依赖关系.结论 中药成分CDP能够逆转高甲基化状态的GSTP1 基因启动子区的低转录活性.     

高糖低脂膳食对血清磷脂和甘油三酯含量的影响及其相关因素分析

目的 研究高糖低脂(HC/LF)膳食对血清磷脂(PL)及甘油三酯含量的影响,并分析其相关因素. 方法 56名志愿者进食7 d平衡膳食及6 d高糖低脂膳食,受试者于摄取平衡膳食第1 d、高糖低脂膳食第1 d、高糖低脂膳食结束次日分别接受体质量、腰围、臀围、上臂围、皮褶厚度(肱三头肌、肩胛下角、脐旁)的测定.同时抽空腹静脉血.采用酶法测定血清TG、TC、PL.磷钨酸-镁沉淀分离高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL),酶法测定高密度脂蛋白磷脂(HDL-PL)、高密度脂蛋白甘油三酯(HDL-TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C).聚乙烯硫酸盐沉淀分离非低密度脂蛋白,酶法测定非低密度脂蛋白磷脂(NLDL-PL)、非低密度脂蛋白甘油三酯(NLDL-TG)、非低密度脂蛋白胆固醇(NLDL-C),计算低密度脂蛋白磷脂(LDL-PL)、低密度脂蛋白甘油三酯(LDL-TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度.电化学发光法测定血清胰岛素浓度.结果 高糖低脂膳食后血清PL、HDL-PL、LDL-PL均降低(P＜0.01);TG、TRL-TG、胰岛素浓度升高(P＜0.05).相关性分析显示受试者高糖低脂膳食后血清PL含量变化(ΔPL)与BMI变化量(ΔBMI)呈明显负相关;与HDL-TG、胰岛素变化量(ΔHDL-TG、ΔInsulin)呈明显正相关.血清LDL-PL含量变化(ΔLDL-PL)与BMI、腰围变化量(ΔBMI、ΔWC)呈明显负相关.血清HDL-PL含量变化(ΔHDL-PL)与血清HDL-TG变化量(ΔHDL-TG)呈明显负相关;与血清HDL-C变化量(ΔHDL-C)呈明显正相关.血清HDL-TG含量变化(ΔHDL-TG)与受试人群腰臀比变化量(ΔW/H)呈明显正相关. 结论高糖低脂膳食可诱导血清PL、HDL-PL含量减少,血清TG、胰岛素含量增加;高糖低脂膳食引起PL含量的变化与BMI变化量呈明显负相关;与HDL-TG、胰岛素变化量呈明显正相关.     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2和H19基因印迹研究

目的 研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor Ⅱ,IGF2)和H19基因的印迹状态,为进一步研究印迹调控机制打下基础.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)筛选IGF2和H19基因杂合标本,并用逆转录PCR-RFLP检测杂合标本IGF2和H19基因的印迹状态.结论 正常人肝组织中,IGF2呈双等位基因表达,H19呈单等位基因表达;47.1%(8/17)的肝癌标本中检测到IGF2基因的印迹获得,45.5%(5/10)的肝癌标本中检测到H19基因的印迹丢失;IGF2和H19的印迹改变没有相关性.结论 IGF2和H19的印迹异常与肝癌有关,成人肝组织中IGF2与H19的印迹调控可能相对独立.     

高糖低脂膳食对健康青年血脂比值的影响

目的探讨短期高糖低脂膳食对健康青年血脂比值甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)、log(TG/HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/HDL-C的影响。方法在校大学生自愿者56名(22.89±1.80)岁,于7 d平衡膳食后给予高糖低脂膳食6 d,分别在第1 d、8 d、14 d清晨抽取空腹静脉血,测定TG、TC、HDL-C、LDL-C浓度,计算TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C值。结果高糖低脂膳食后,TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)在女性显著升高(P<0.05),男性有下降趋势,但无统计学意义。按BMI或WHR分析发现,高糖低脂膳食后TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)在正常女性显著升高(P<0.05),而在一般肥胖或腹型肥胖女性无显著性改变;不同BMI或WHR男性高糖低脂膳食后TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)无显著变化。TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C在高糖低值膳食后均显著下降(P<0.05),且不受性别、BMI、WHR的影响。结论高糖低脂膳食诱导的TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)改变因性别及BMI或WHR不同而不同,TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C的改变则不受其影响,对指导相应人群改变膳食结构具有重要意义。     

Ⅳ型高脂血症患者血清高密度脂蛋白亚类组成及含量

目的 探讨Ⅳ型高脂血症患者血清高密度脂蛋白亚类含量及分布特征。方法 采用双向电泳-免疫印迹检测法分析132例Ⅳ型高脂血症患者和163例正常对照者血清高密度脂蛋白亚类的组成及含量。结果 与血脂正常组比较，Ⅳ型高脂血症患者血清前β1-高密度脂蛋白、高密度脂蛋白3a含量显著升高（P〈0．01），而高密度脂蛋白2a、高密度脂蛋白2b含量显著降低（P〈0．01）。无论是血脂正常者还是Ⅳ型高脂血症患者，女性前β1高密度脂蛋白、高密度脂蛋白3b含量均显著低于男性（P〈0．05），而高密度脂蛋白2b则显著高于男性（P〈0．01）。相关分析发现，Ⅳ型高脂血症患者血清甘油三酯、甘油三酯，高密度脂蛋白胆固醇比值与前β1-高密度脂蛋白、高密度脂蛋白3a含量显著正相关（P〈0．01或P〈0．05），与高密度脂蛋白2b、高密度脂蛋白2a含量显著负相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论 Ⅳ型高脂血症患者血清小颗粒高密度脂蛋白含量明显增加而大颗粒高密度脂蛋白含量明显减少，表明高密度脂蛋白成熟代谢过程受阻，胆固醇逆向转运作用减弱；此外，与男性相比，无论是血脂正常者还是Ⅳ型高脂血症患者，女性小颗粒高密度脂蛋白含量较少而大颗粒高密度脂蛋白含量较多。