稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立

目的:构建稳定高效表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的CHO细胞株,以便于大量生产纯化hTM蛋白。方法:利用脂质体li-pofectamine 2000将包含hTM基因全长序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞。转染后用G418的选择性培养液筛选、挑取抗性克隆。采用流式细胞术和Western blotting检测hTM在CHO细胞膜表面的表达情况,筛选建立稳定高效表达hTM的CHO细胞株并对其稳定性进行观察。结果:重组表达质粒pThr402转染CHO细胞后,流式细胞术证实hTM稳定高效表达于随机挑选的5个抗性克隆细胞株的细胞膜表面,但表达量有差异。Western blotting分析检测显示hTM表达量较高的CHO-TM1、CHO-TM4与CHO-TM5细胞株的细胞裂解液出现了与预期值相符的约105000的特异性条带。CHO-TM5已经经过冻存复苏前后各20次传代,且无论有无G418选择压力存在,hTM表达水平无明显差异。结论:成功构建了稳定高效表达hTM的CHO细胞株,可望获得大量蛋白,为进一步研究hTM的生物学功能以及制备和筛选抗hTM的单抗开辟新的途径。     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导HL-60细胞分化

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提出物(EVn-50)诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化作用。方法:体外培养HL-60细胞,MTT法测定细胞活性;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞分化形态学变化,间接免疫荧光显微镜观察细胞表面分化抗原CD11b表达。结果:EVn-50抑制HL-60细胞活性,其IC50值为6.29μg/mL,与全反式维甲酸(ATRA)10.35μg/mL相比较强;EVn-50具有诱导HL-60细胞向粒细胞系分化并表达分化抗原CD11b的作用,其阳性表达率呈剂量依赖性升高。结论:EVn-50具有诱导HL-60细胞分化的作用。     

活络健骨胶囊镇痛试验的药效学研究

目的观察活络健骨胶囊的实验镇痛效应。方法分别采用扭体、电刺激及热板法三种镇痛试验。每种实验又将60只小鼠随机分成6组并给予不同药物灌胃:A组(空白对照),生理盐水0.25mL/10g;B组(阳性对照),双氯芬酸3.5mg/kg;C组(阳性对照),哌替啶15mg/kg;D、E、F组分别为试药低、中、高剂量活络健骨胶囊(剂量分别为14、21、28g/kg)。然后在预处理后的不同时间分别观察药物对化学、电极热板刺激痛反应的影响。结果活络健骨胶囊低、中、高剂量组均能抑制化学刺激鼠扭体反应,与空白组比较,低剂量组显效(P<0.01);中、高剂量组作用更强(P<0.001)。对于电刺激鼠嘶叫反应,与空白组比较,低剂量组有效(P<0.05);中、高剂量组显效(P<0.01)。亦能明显延长小鼠对热板刺激引起痛反应的时间,各试药组与空白对照组比较(P<0.05);活络健骨胶囊与B、C组之间在30、60、120min镇痛作用基本相同(P>0.05),但在180min时阳性对照药不及活络健骨胶囊的效应(P<0.05)。结论活络健骨胶囊具有良好镇痛作用,其作用比哌替啶(小鼠灌胃)慢而持久,其镇痛强度大于双氯芬酸。     

泡沫细胞寡核苷酸适配子PM2的特异性研究

目的 研究寡核苷酸适配子对动脉粥样硬化病变组织结合的特异性.方法 将前期研究获得的特异性适配子命名为PM2,FITC标记后,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况.采用高脂方法建立兔的动脉粥样硬化模型.利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况.结果 PM2适配子与巨噬细胞源性泡沫细胞高度特异性结合,但不与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞结合 PM2适配子能特异性结合动脉粥样硬化斑块组织,而不结合正常动脉组织结合.结论 筛选出的PM2适配子特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变.     

西罗莫司对缺氧/复氧诱导内皮细胞-中性粒细胞黏附的影响及机制

目的　探讨西罗莫司对缺氧 复氧后血管内皮细胞表面黏附分子的表达和中性粒细胞 内皮细胞黏附的影响及机制。方法　采用 β N 乙酰氨基己糖苷酶比色法检测黏附率 ,流式细胞术检测内皮细胞表面黏附分子E 选择素、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的表达 ,Fenton反应测定活性氧 (reactiveoxygenspecies,ROS)的含量 ,Western杂交法检测内皮细胞c JunN端激酶 (JNK)及核因子 κB[nuclearfactor κB ,NF κB(P6 5 ) ]蛋白的表达。结果　血管内皮细胞经缺氧 复氧处理后ROS释放增多 ,JNK及NF κB(P6 5 )蛋白表达增加 ,E 选择素、ICAM 1的表达上调 ,其表面中性粒细胞的黏附增加 ,西罗莫司显著抑制缺氧 复氧的上述作用。结论　西罗莫司抑制缺氧 复氧后血管内皮细胞与中性粒细胞的黏附 ,并可能通过抑制ROS、JNK、NF κB的信号转导途径实现     

黄酮水杨酸衍生物的合成及抗肿瘤活性测定

合成一系列黄酮水杨酸衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。通过Friedel-Crafts反应和改进后的Baker-Venkataraman 重排反应得到化合物2。水杨酸衍生物甲基化和酰氯化后,与化合物2和白杨素发生酯化反应得到目标化合物。采用MTT 法检测化合物的体外抗肿瘤活性。化合物2、5a、5b、6a、6b对胃癌细胞MGC-803整体的抗增殖活性更好,均优于白杨素与5-氟尿嘧啶。其中5b对胃癌细胞MGC-803的抗肿瘤活性(21.59±5.75 μmol/L)优于其它化合物。黄酮骨架引入苯三甲氧基基团在一定程度上能增强其抗肿瘤活性。化合物5b具有较好的抗肿瘤活性,可作为抗癌候选药物进一步优化和评价。     

依泽替米贝及其靶点和胆固醇跨膜转运

依泽替米贝是一种新型的胆固醇吸收抑制剂，它是由先灵 葆雅公司研制开发的一种新型的降脂药物，于2002年底经美国FDA批准上市，商品名为Zetia，目前所知其作用靶点是NPC1L1蛋白、膜联蛋白-2-小窝蛋白-1(annexin-2-caveolin-1)复合物和氨肽酶N(aminopeptidase N CD13, APN)，该药物的几个作用靶点与胆固醇的跨膜转运蛋白有关。     

一种可消除非特异性条带高精度、多用途的PCR方法

目的 建立一种可消除RT-PCR反应中非特异条带生成，提高PCR反应的精确度的PCR体系。方法 比较普通RT-PCR反应与硫化修饰引物结合不同校正活性聚合酶对非特异性扩增的抑制能力。结果 引物3′末端硫化修饰结合具有校正活性的聚合酶可特异性关闭PCR反应中引物3′末端与模板非特异结合而引起的非特异性扩增，只允许引物3′末端与模板完全匹配的延伸反应得以进行。结论 利用校正聚合酶是严格模板依赖型校正活性酶的特点，将引物3′末端硫化修饰后，由于校正聚合酶在PCR延伸开始之前首先会依据模板检查引物是否完全与模板匹配，如果不匹配则将根据模板先将引物修改得和模板一致后才允许延伸的特性，而引物3′端引入抗酶切的硫化修饰后，引物与模板非特异结合将由于校正活性聚合酶长期停留在试图纠正引物与模板不一致状态而得不到有效延伸，从而只允许引物与模板完全匹配的延伸得以扩增，大大提高了PCR反应的特异性。     

金粉蕨素对小白鼠实验性肝损伤脂质过氧化的保护作用

目的　探索金粉蕨素对脂质过氧化保护作用。方法　取昆明种小白鼠 48只 ,随机分成 6组 ,分别给予溶媒、维生素E和不同剂量的金粉蕨素 ,然后采用溴代苯所致实验性肝损伤 ,再用TBA测定肝匀浆的丙二醛 (MDA)含量。结果　不同剂量的金粉蕨素均可明显降低肝匀浆脂质过氧化产物MDA的含量 (P <0 .0 1 ) ,其中 ,低和中剂量组的MDA含量较高剂量组低。结论　金粉蕨素具有较好的抗氧化作用 ,对脂质过氧化损伤具有一定的保护作用。     

Bcl-2家族蛋白在神经系统疾病中的作用

越来越多的研究提示许多神经系统疾病都存在神经细胞凋亡的现象，因此，对神经细胞凋亡的研究是当今药理学家关注的药物治疗靶点之一。B细胞淋巴瘤Bel-2家族蛋白是以Bel-2为代表的一组在细胞凋亡过程中起关键性作用的蛋白。通过与其他凋亡蛋白的协同作用，调控线粒体结构与功能的稳定性，发挥着细胞凋亡“主开关”的作用。本文旨在对近年来关于Bel-2家族蛋白调控神经细胞凋亡度其在神经系统疾病中的作用的相关研究进展进行综述。