HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定

目的 构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性.方法 应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆人pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性.结果 成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid.结论 成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础.     

精准医疗时代背景下医学分子生物学实验设计的探索与实践

【摘要】目的 通过开设综合实验设计将精准医疗的理念融入医学分子生物学实验教学中并探索其学习效果。方法 选择第四军医大学2012级和2013级八年制临床医学专业66名学生为研究对象,其中,2013级36名学生为实验组,采用精准医疗相关的综合实验设计将传统实验教学内容融会贯通起来;2012级30名学生为对照组,依然按照传统实验授课方法进行教学。教学结束后,在SPSS统计软件中采用t检验及χ2检验法比较两组学生的医学分子生物学实验理论考核、技能考核成绩,并对两组学生进行问卷调查以比较不同教学方法的实施效果。结果 考核结果表明,实验组学生的理论与技能成绩均明显优于对照组学生,尤其在综合实验设计的考核部分,两组学生成绩分别为16.7?2.04和13.9?2.87,差异具有统计学意义,P<0.0001。问卷调查结果显示,实验组学生对自身所受教学在提高学习兴趣、对教学方法的满意程度、对精准医疗的认识、对临床科研的认识、探索创新能力、知识掌握程度等方面的满意度,高于对照组学生,差异具有统计学意义,P<0.05。 结论 以精准医疗为契入点开展综合性的医学分子生物学实验教学,可使各知识点不再孤立、碎片化,从而激发学生的学习兴趣,有利于学生形成与精准医疗时代特征相适应的临床思维,提高科研素养,培养创新意识。     

CRISPR/Cas9技术应用的研究进展

成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)是存在于细菌和古细菌中的获得性免疫系统,通过其转录产物crRNA(CRISPR RNA)及CRISPR相关蛋(CRISPR-associated,Cas),尤其是Cas9蛋白特异性抑制入侵的DNA.该系统由于其快捷靶向以及其作为一种特定位点核酸酶的高效性和多重修饰的可能性,被广泛应用于基因编辑领域.本文主要从CRISPR/Cas9系统的相关概念及原理、技术研究进展、应用研究进以及CRISPR/Cas9技术应用的未来发展进行阐述.     

几类实体肿瘤对IFN-α2a治疗敏感性与其细胞表面受体表达的关系

目的:探讨肿瘤细胞表面干扰素α受体的表达与其肿瘤对IFN-α 2a治疗敏感性之间的关系.为建立干扰素α敏感肿瘤的快速评价方法奠定基础.方法:MTT法体外筛选IFN-α 2a敏感与抗性肿瘤细胞株,选取人肺腺癌细胞A549,SPC-A-1,GLC-82和人低分化胃腺癌细胞MKN-45共4株细胞;通过构建荷瘤裸鼠模型,证实不同肿瘤对干扰素治疗的敏感性存在差异.流式细胞术、免疫组织化学、Western Blot检测肿瘤细胞表面IFN-α受体的表达差异.结果:体内、体外实验结果表明:A549,SPC-A-1为IFN-α2a敏感性细胞株,MKN-45,GLC-82为IFN-α 2a抗性细胞株.细胞和组织水平检测的结果表明:表达量由高到低依次为A549,SPC-A-1,MKN-45,GLC-82.结论:IFN-α受体表达的高低与肿瘤细胞对干扰素的敏感性具有密切的相关性,对实现有针对性的个体化治疗具有一定的指导意义.     

外泌体在乳腺癌发生发展中的作用

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,严重威胁着女性的健康和生命.根据世界卫生组织国际癌症研究机构发布的2020年全球最新癌症负担数据显示,全球乳腺癌新发病例数正快速增长,并已取代肺癌成为全球第一大癌症[1].乳腺癌的发生和发展是由多种因素共同参与的病理性过程,包括癌基因的异常激活、抑癌基因功能的丧失、信号通路的异常激活或失活等.除了乳腺癌细胞本身的生物学活动改变外,癌细胞和机体其他细胞之间的信息交流和物质交换也是参与调节乳腺癌发生发展的重要因素[2].