脊髓灰质炎病毒2型和3型D抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备脊髓灰质炎病毒2型(PV2)和3型(PV3)D抗原的单克隆抗体(mAb),并对抗体的特性进行初步鉴定。方法以PV2及PV3的D抗原为免疫原,常规方法制备小鼠源性mAb,用间接ELISA检测小鼠腹水效价、型别特异性及与C抗原的交叉反应。结果获得4株PV2特异性并与PV2的C抗原不交叉的mAb,2株PV3特异性并与PV3的C抗原不交叉的mAb。结论成功制备了PV2及PV3特异性并与C抗原不交叉的D抗原mAb。     

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定

目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.     

从HLDA8新CD编号候选分子看免疫学发展趋势

人白细胞分化抗原(human leukocyte differentiation antigen,HLDA)及其单克隆抗体在免疫学研究中发挥着日益重要的作用。随着人类基因组计划的完成和细胞膜表面分子功能研究的深入,不断有新的功能重要的白细胞分化抗原被发现。为了整合世界各地实验室这方面的研究成果,统一这些新分子的命名,国际白细胞分化抗原协作组将于2004年12月在澳大利亚阿德莱德举行第8届会议(8th International Workshopand Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigen,HLDA8),确定部分重要分子命名新的CD编号。目前提交给协作组的候选分子已达146个,这些分子从一个方面代表着近年来该领域的研究进展和研究热点,本文对这些分子作大致的归纳分析,并对国内在这一领域的研究提出一些看法。     

精准医疗时代背景下医学分子生物学实验设计的探索与实践

【摘要】目的 通过开设综合实验设计将精准医疗的理念融入医学分子生物学实验教学中并探索其学习效果。方法 选择第四军医大学2012级和2013级八年制临床医学专业66名学生为研究对象,其中,2013级36名学生为实验组,采用精准医疗相关的综合实验设计将传统实验教学内容融会贯通起来;2012级30名学生为对照组,依然按照传统实验授课方法进行教学。教学结束后,在SPSS统计软件中采用t检验及χ2检验法比较两组学生的医学分子生物学实验理论考核、技能考核成绩,并对两组学生进行问卷调查以比较不同教学方法的实施效果。结果 考核结果表明,实验组学生的理论与技能成绩均明显优于对照组学生,尤其在综合实验设计的考核部分,两组学生成绩分别为16.7?2.04和13.9?2.87,差异具有统计学意义,P<0.0001。问卷调查结果显示,实验组学生对自身所受教学在提高学习兴趣、对教学方法的满意程度、对精准医疗的认识、对临床科研的认识、探索创新能力、知识掌握程度等方面的满意度,高于对照组学生,差异具有统计学意义,P<0.05。 结论 以精准医疗为契入点开展综合性的医学分子生物学实验教学,可使各知识点不再孤立、碎片化,从而激发学生的学习兴趣,有利于学生形成与精准医疗时代特征相适应的临床思维,提高科研素养,培养创新意识。     

犬中等程度颌面枪弹伤后血中肿瘤坏死因子表达的意义

目的：通过研究颌面枪弹伤后肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在血中的表达情况,探讨前炎症细胞因子与创伤并发症间的内在联系。方法：用ELISA方法检测犬颌面枪弹伤后血中不同时间点TNF－α、IL-6的表达变化情况。结果：枪弹伤后尽管犬未出现严重的创伤并发症,但血中TNF－α呈一过性高表达,表达高峰在伤后2－6h;不同的犬表达水平浓度差别较大;无需治疗可逐渐恢复正常。同时未检测到血中IL－6。结论：创伤后前炎症细胞因子的表达是机体对创伤的正常免疫应答,表达水平高低可能反应创伤的程度,但一过性的高表达并不能显加重创伤的全身反应,创伤后血中TNF－α的浓度作为一种监测伤情变化的指标可能有一定的参考价值。     

人类后基因组计划推动免疫学迅速发展

人类基因组计划的基本完成以及ＥＳＴ数据库为生物信息学研究提供了重要基础。人类约有３－４万个基因，而目前所知的人类蛋白质种类不及１万。因此有理由推测，在免疫系统中，大部分免疫分子有待发现，探索新分子结构和功能已成为分子免疫学的研究热点。鉴于免疫系统复杂的网络作用特点，全面阐述新发现免疫分子的生理和病理意义更是任重而道远。 ２０世纪７０年代分子免疫学兴起时，发现新的免疫分子的基本途径是先了解新分子的部分功能，然后用不同的技术路线去克隆。近３年来，应用生物信息学从ＥＳＴ数据库中寻找同源分子，发现免疫新…     

单核细胞介导的固有免疫在丙型肝炎感染中的作用

<正>全球目前有1.3~1.7亿丙肝患者,每年以300~400万的速度增长~([1]),主要是由于输注污染血液制品、毒品注射和不安全的治疗感染和传播病毒。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人体后,首先经历一个急性感染过程,在急性感染的早期,HCV强烈复制,激活固有免疫反应,在肝脏诱导干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)的形成,诱导和激活I和Ⅲ型干扰素(interferon,IFN),限制病毒复制,但不能完全清除病毒。在急性感染晚期,HCV特异性T细胞招募至肝脏,通过细胞毒性和γ-IFN介导的非细胞毒性机制有效地抑制病     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的 建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（mAb)的杂交瘤细胞系，并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 用成骨肉瘤细胞系（OSPS-9607）免疫Balb/c小鼠，取脾细胞按常规方法融合，筛选，克隆化及腹水mAb制备，取骨肉瘤手术标本（60例）及正常组织（6种），用mAb进行免疫组化ABC染色。结果 筛选出2株能持续，稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株（6E5和3F7），2株杂交瘤细胞经过100d连续培养，分泌mAb的特性稳定，mAb特异性强，效价高。免疫组化染色检测表明，mAb6E5和3F7针对的抗原，在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达（70%）。针对mAb6E5的抗原主要分布于细胞核上，针对mAb3F7的抗原主要分布于细胞浆内，6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外，其余未见明确的阳性反应。结论 此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性，为成骨肉瘤的早期诊断。免疫治疗及发现成骨肉瘤新的标志物奠定了基础。     

人类白细胞分化抗原CD命名的最新进展

第 8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会 (HLDA8)于2004年 12月 12 ~16日在澳大利亚阿德莱德召开。会议给115种分子及其相应单克隆抗体 (mAb)命名了 111个CD/CDw编号, 其中有 3类分子(SIRP、IL 18R和CMRF35family)的不同成员分别共享同一CD编号, 并用小写英文字母表示其同一CD(或CDw)编号中的不同成员。这次新命名CD数是为历届HLDA之最, 总计CD的编号已达到CD339, 充分反映了自HLDA7 4年多以来新的免疫膜分子及其mAb制备的研究进展。HLDA8补充了以往数届HLDA会议预留的 (reservedfor)CD编号共有 20个, 其中: 正式…     

抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的：研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体（mAb)。方法：采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4，猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系（BLCL），进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果：共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子，其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子，结论：成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb。为研究人和猿，猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。