噪声磁场干预工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的抑制作用

目的:研究噪声磁场与50 Hz正弦工频磁场对原代培养人早孕绒毛滋养细胞分泌功能的影响,探索噪声磁场对工频磁场生物效应的可能干预作用。方法:体外分离、培养人早孕绒毛滋养细胞,以0.4 mT强度的工频磁场、噪声磁场以及工频磁场与噪声磁场叠加的复合磁场分别辐照处理6、12、24、48和72 h,同时设立相应的平行对照组。用电化学发光法测定每组细胞培养液中人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕酮的含量。结果:0.4 mT工频磁场单独暴露72 h,可抑制滋养细胞分泌HCG和孕酮(与空白对照组相比,P<0.05);0.4 mT噪声磁场单独暴露不影响滋养细胞分泌HCG和孕酮(与空白对照组相比,P>0.05);相同强度的噪声磁场与工频磁场叠加后,则可以抵消工频磁场对滋养细胞分泌功能的抑制作用。结论:0.4 mT工频磁场长时间暴露能抑制滋养细胞分泌HCG和孕酮。相同强度的噪声磁场可干预工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的抑制作用。     

人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定

目的在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白.方法利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得到转化子.在启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白HSA-PTH(1-34).PCR法和电泳鉴定表达验证阳性转化子,并观测不同时间点的表达量.Western blot验证其免疫活性,在兔肾皮质细胞膜中测定腺苷酸环化酶的激活产生cAMP的量来检测融合蛋白的生物学活性.结果PCR鉴定重组转化子验证了融合基因的成功整合,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到高效表达,HSA-PTH(1-34)同时具有HSA和PTH(1-34)的抗原性,且能激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶产生cAMP,但活性低于PTH(1-34).结论在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白.     

毕赤酵母中表达HSA/IL1ra融合蛋白的产物不均一现象的研究

目的探索HSA/IL1ra融合蛋白在毕赤酵母中表达的产物不均一现象的原因及可能的影响因素.方法通过去糖基化和抑制糖基化实验验证不均一产物的由来,并考察了不同融合方式、不同克隆菌株、不同表达宿主对产物不均一现象的影响.结果糖基化不均一引起产物不均一现象,且在SMD1168中没有此类现象,个别毕赤酵母GS115克隆中也没有此现象.结论HSA/IL1ra融合蛋白在毕赤酵母中表达的产物不均一现象,是由于融合蛋白在毕赤酵母中表达时糖基化不均一引起的,且不同融合方式、不同克隆、不同宿主对该现象有影响.     

地非三唑与黄酮类化合物的代谢相互作用

目的：研究地非三唑与黄酮类化合物槲皮素、山奈酚、异鼠李素和四方蒿提取物的代谢相互作用。方法：选取山奈酚、异鼠李素和四方蒿提取物作为二相代谢葡醛酸结合反应的底物，分别在空白、β-萘黄酮和地非三唑诱导的微粒体中进行体外二相代谢，采用HPLC法测定各底物的剩余量。选取槲皮素、山奈酚对地非三唑体外一相代谢进行抑制试验，采用HPLC法测定地非三唑的剩余量。结果：地非三唑诱导的鼠肝微粒体对山奈酚、异鼠李素和四方蒿提取物的二相代谢均强于BNF诱导的鼠肝微粒体（P〈0．01）。槲皮素或山奈酚对地非三唑的一相代谢有较强抑制作用，抑制常数分别为（12．41&#177;0．26）μg&#183;ml^-1和（7．97&#177;0．08）μg&#183;ml^-1。结论：地非三唑与上述黄酮类化合物在体外会发生代谢性药物相互作用。     

HPLC法测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚及其降解产物的浓度

目的建立一种测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚(BFTS)及其降解产物双(对-氟苄基)二硫醚(BFDS)的RP-HPLC分析方法.方法在0.2 g大鼠肺组织中加入正己烷-异丙醇(955,v/v)5.0 ml,11.50 μg/ml内标(苄基二硫醚)溶液20 μl,制成匀浆,离心后取上清液4.0 ml,真空抽干,残渣加流动相(乙腈∶水＝65∶35,v/v)150 μl复溶,离心后取上清液进行HPLC分析.HPLC分析条件为SB-C18柱,流动相为乙腈-水(65∶35,v/v);流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长220 nm;进样量100 μl.结果BFTS和BFDS在0.04712～14.78 μg/g(r=0.999)及0.04831～23.96 μg/g(r=0.999) 范围内呈线性关系,定量限分别为0.04712 μg/g和0.04831 μg/g,回收率分别为95.71%～107.2%和90.00%～110.5%,精密度RSD均小于10%.该方法已成功地用于大鼠静脉注射12.5 mg/kg BFTS后,肺组织中BFTS及BFDS的含量测定.结论该法准确、灵敏、可靠,可用于BFTS及BFDS的组织分布研究.     

RP-HPLC法测定大鼠血浆中多烯紫杉醇的含量

目的建立大鼠血浆样品中多烯紫杉醇的液-液萃取RP-HPLC测定法。方法大鼠血浆样品经乙腈-氯代正丁烷(体积比为1∶4)提取,以地西泮(diazepam)为内标物,流动相采用水-甲醇-四氢呋喃-氨水(甲酸调pH)系统进行梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),UV检测波长为232 nm。结果多烯紫杉醇在50~10 000μg.L-1内线性关系良好,定量下限为50μg.L-1,提取回收率为70.2%~79.0%。结论HPLC法适用于大鼠血浆中多烯紫杉醇浓度的测定及药物动力学研究。     

共表达PXRLBD和SRC88以及PXR配体筛选的平衡透析模型的建立

孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR),属核受体NR1I亚家族.PXR可由配体活化,当配体(如外源药物)与其配体结合域(ligand binding domain,LBD)结合后,PXR被活化,招募辅调控因子(如人甾体受体辅活化因子-1,steroid receptor eoactivator-1,SRC-1)形成复合物,通过其DNA结合域(DNA binding domain)结合到药物代谢酶基因启动子的特定DNA序列上,从而调控CYP3A4等药物代谢酶基因的转录[1,2].     

植物化学物诱导肿瘤细胞自噬性死亡及对核受体调节作用研究进展

自噬性细胞死亡是一种非依赖性细胞程序性死亡。核受体可以调控下游基因的转录和翻译,影响自噬相关基因的表达,调节肿瘤细胞的自噬。目前研究发现,一些植物化学物,如异硫氰酸盐、黄酮类化合物、皂苷、植物雌激素、蒽醌类和生物碱等,可诱导特定的肿瘤细胞自噬性死亡。异硫氰酸盐、黄酮类化合物和植物雌激素等植物化学物与核受体结合可使核受体活化。除此之外,一些通过核受体发挥抗肿瘤作用的药物如他莫昔芬、15-脱氧Δ12,14-前列腺素J2、维生素D类似物EB1089、倍半萜烯紫杉醇类似物AGS 115和EFDAC也可以诱导肿瘤细胞发生自噬性死亡。上述研究为了解植物化学物、核受体和自噬三者之间的联系提供了线索。     

冬凌草甲素纳米粒制备及其体外抗肿瘤作用

目的制备冬凌草甲素纳米粒(ORI-Nps),考察其体外抗肿瘤作用.方法采用界面沉淀法制备ORFNps,并对其形态、粒径、ξ电位、包封率、载药量、体外释药特征和抗肿瘤作用进行研究.结果制备的ORI-Nps为类球形,粒径分布均匀,平均粒径为101.5 nm;ξ电位为-29.8 mV;载药量和包封率分别为6.84%和92.25%;体外释药缓慢;对Eta-109细胞具有较强的毒性作用.结论制备的ORI-Nps包封率和载药量高,粒径均匀,体外释药具有缓释特点,体外抗肿瘤作用强.     

二氢青蒿素下调粒系白血病细胞转铁蛋白受体表达

通过建立常铁HL60和K562细胞以及富铁K562细胞体外模型，研究二氢青蒿素对粒系白血病细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR)的调控作用。采用流式细胞术检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR密度的调控作用，Western blotting和RT-PCR法检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR表达的调控作用，原子吸收分光光度法检测二氢青蒿素对常铁和富铁K562细胞铁含量的影响，以及MTT法和台盼蓝拒染法分析二氢青蒿素对粒系白血病细胞增殖的作用。结果显示，二氢青蒿素能显著降低常铁HL60和K562细胞TfR的密度和下调TfR蛋白的表达，且呈浓度和时间依赖性，并能有效地抑制细胞增殖，IC₅₀值分别为1.74和11.33 μmol·L^-1。二氢青蒿素对富铁K562细胞的TfR蛋白和mRNA表达能进一步增强下调作用，与常铁培养组比较，10 μmol·L^-1二氢青蒿素对富铁K562细胞TfR蛋白和TfR mRNA表达量分别下调了28.1%(P<0.01)和26.2%(P<0.05)，并能显著下降富铁K562细胞铁的含量(P<0.05)，更有效地抑制富铁K562细胞增殖。由此可见，二氢青蒿素能下调粒系白血病细胞TfR密度以及TfR蛋白和mRNA的表达，有效抑制常铁HL60和K562细胞的增殖，对富铁K562细胞增殖的抑制作用能进一步增强。