促胰素对大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响

背景：有研究报道,促进胰岛β细胞增殖分化和再生是2型糖尿病患者一种潜在的治疗方案。目的：观察促胰素对体外培养大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响。方法：采用胶原酶消化和组织培养法分离纯化大鼠胰岛细胞,检测其纯度和活性,将胰岛细胞分为空白对照组和实验组,空白对照组加入普通培养基,实验组培养基中加入不同质量浓度（100,200,300,400mg/L）促胰素,培养1,3,5d后CCK-8法检测细胞增殖活性;培养5d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放实验。结果与结论：随着促胰素质量浓度的增高,胰岛细胞增殖活性呈剂量依赖性增加（P〈0.05）,但无明显时间依赖性。除100,200mg/L组外,300,400mg/L两组胰岛素分泌量均显著高于空白对照组（P〈0.05）。表明300,400mg/L促胰素不仅可促进胰岛细胞增殖,而且可显著增强胰岛细胞分泌胰岛素的功能。     

真核过表达载体共转染3个胰岛发育关键基因在小鼠胎肝细胞内的表达

背景:大量文献表明,向肝脏细胞引入一个多个胰岛发育的关键因子(如Pdx1、MafA及Ngn3)可以使肝细胞向胰岛细胞的方向进行转化。目的:构建以pcDNA3.1(+)为骨架的质粒载体并共同转染胰十二指肠同源框蛋白(Pdx1)、神经源素3(Ngn3)及V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)至小鼠胎肝细胞并检测其表达情况。方法:以基因组或小鼠胰腺cDNA为模板扩增Pdx1、MafA及Ngn3三个目的基因,应用分子生物学技术,将3个目的片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建小鼠系列真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafAORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3ORF通过Lipofectamine2000介导的脂质体转染小鼠胎肝细胞系BNLCL.2,用反转录PCR以及间接免疫荧光法检测3个目的基因的表达情况。结果与结论:目的基因克隆正确,反转录PCR,间接免疫荧光法证实了脂质体转染后小鼠胎肝细胞中有Pdx1、Ngn3以及MafA的表达。结果表明,真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafAORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3ORF可成功构建,并能够将Pdx1、Ngn3以及MafA三个基因转至小鼠胎肝细胞进行表达。     

促胰素对大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响

背景:有研究报道,促进胰岛β细胞增殖分化和再生是2型糖尿病患者一种潜在的治疗方案。目的:观察促胰素对体外培养大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响。方法:采用胶原酶消化和组织培养法分离纯化大鼠胰岛细胞,检测其纯度和活性,将胰岛细胞分为空白对照组和实验组,空白对照组加入普通培养基,实验组培养基中加入不同质量浓度(100,200,300,400mg/L)促胰素,培养1,3,5d后CCK-8法检测细胞增殖活性;培养5d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放实验。结果与结论:随着促胰素质量浓度的增高,胰岛细胞增殖活性呈剂量依赖性增加(P<0.05),但无明显时间依赖性。除100,200mg/L组外,300,400mg/L两组胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05)。表明300,400mg/L促胰素不仅可促进胰岛细胞增殖,而且可显著增强胰岛细胞分泌胰岛素的功能。     

真核过表达载体共转染3个胰岛发育关键基因在小鼠胎肝细胞内的表达*

背景：大量文献表明,向肝脏细胞引入一个多个胰岛发育的关键因子(如Pdx1、MafA及Ngn3)可以使肝细胞向胰岛细胞的方向进行转化。 目的：构建以pcDNA3.1(+)为骨架的质粒载体并共同转染胰十二指肠同源框蛋白(Pdx1)、神经源素3(Ngn3)及V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)至小鼠胎肝细胞并检测其表达情况。 方法：以基因组或小鼠胰腺cDNA为模板扩增Pdx1、MafA及Ngn3三个目的基因,应用分子生物学技术,将3个目的片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建小鼠系列真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF通过Lipofectamine2000介导的脂质体转染小鼠胎肝细胞系BNL CL.2,用反转录PCR以及间接免疫荧光法检测3个目的基因的表达情况。 结果与结论：目的基因克隆正确,反转录PCR,间接免疫荧光法证实了脂质体转染后小鼠胎肝细胞中有Pdx1、Ngn3以及MafA的表达。结果表明,真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF可成功构建,并能够将Pdx1、Ngn3以及MafA三个基因转至小鼠胎肝细胞进行表达。关键词：胰十二指肠同源框蛋白;神经源素3;V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A;脂质体转染;BNL CL.2细胞株;胰岛细胞;基因表达 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.018     

解偶联蛋白-2在胰腺β细胞中的作用

2型糖尿病是世界广泛流行的内分泌代谢性疾病之一,其主要临床表现是葡萄糖刺激胰岛素分泌(glueose stimulated insulin secretion,GSIS)障碍.线粒体通过偶联葡萄糖氧化产生ATP在GSIS中发挥了重要作用.     

恒河猴胰岛的半自动分离和纯化

目的探讨恒河猴胰岛分离和纯化的技术方法。方法采用自制的半自动胰腺消化分离装置,对3只成年恒河猴胰腺进行消化分离,用非连续密度梯度高渗枸橼酸盐嘌呤溶液（HCA液）-蔗聚糖液（Ficoll液）纯化恒河猴胰岛,通过双硫腙染色在倒置显微镜计数胰岛的数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛的分泌功能。分离和纯化结果采用配对t检验进行统计分析。结果消化后平均每个胰腺可获得（101420±12054）胰岛当量（IEQ）,纯化后平均每个胰腺可获得（71480±8054）IEQ,平均每克恒河猴胰腺组织可获得（2310±252）IEQ,纯化后胰岛平均纯度为（89．8±8．7）％,活率为（93．1±2．8）％。纯化后的胰岛对葡萄糖刺激反应良好,高糖（16．7mmol／L）时胰岛素的释放量为低糖（3．3mmol／L）时的5．9倍（t=45．2,P〈0．01）。分离胰岛在移植到糖尿病大鼠肾包膜下后能够影响降低血糖至支持水平。结论通过采用半自动胰腺消化分离装置,胶原酶P灌注消化及非连续密度梯度法纯化,能获取较高纯度及生物活性良好的恒河猴胰岛。     

骨髓腔注射骨髓间充质干细胞防治模拟失重大鼠的骨质疏松

背景:模拟失重条件下自身骨髓间充质干细胞的增殖受到抑制,并且向成骨细胞分化的能力减弱,造成骨量减少与骨微结构的破坏,最终导致骨质疏松。目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞骨髓腔注射对模拟失重大鼠胫骨骨密度和骨组织微结构的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为自由活动对照组、尾吊模拟失重组、细胞治疗组(尾吊模拟失重同时给予双侧胫骨骨髓腔注射成骨诱导的同种异体BMSCs细胞)。结果与结论:与自由活动对照组相比,尾吊模拟失重组胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著降低(P<0.01),骨小梁分离度显著增加(P<0.01)。与尾吊模拟失重组相比,细胞治疗组中胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著增加(P<0.01),骨小梁分离度显著降低(P<0.01)。说明骨髓腔注射能够增加模拟失重大鼠骨密度,改善骨超微结构,减缓骨量丢失,有效防治骨质疏松。     

Kallmann综合征一例报道

Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)是一种少见的先天性疾病,以低促性腺激素水平、性腺发育不良伴嗅觉丧失或减退为特征.该综合征可呈散发型或遗传型,早期发现并给予激素治疗可改善患者预后.本文报道KS l例.