促胰素对大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响

背景：有研究报道,促进胰岛β细胞增殖分化和再生是2型糖尿病患者一种潜在的治疗方案。目的：观察促胰素对体外培养大鼠胰岛细胞增殖及功能的影响。方法：采用胶原酶消化和组织培养法分离纯化大鼠胰岛细胞,检测其纯度和活性,将胰岛细胞分为空白对照组和实验组,空白对照组加入普通培养基,实验组培养基中加入不同质量浓度（100,200,300,400mg/L）促胰素,培养1,3,5d后CCK-8法检测细胞增殖活性;培养5d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放实验。结果与结论：随着促胰素质量浓度的增高,胰岛细胞增殖活性呈剂量依赖性增加（P〈0.05）,但无明显时间依赖性。除100,200mg/L组外,300,400mg/L两组胰岛素分泌量均显著高于空白对照组（P〈0.05）。表明300,400mg/L促胰素不仅可促进胰岛细胞增殖,而且可显著增强胰岛细胞分泌胰岛素的功能。     

壳寡糖及其配合物对胰岛细胞增殖、胰岛素分泌的促进作用

背景:壳寡糖与有益于糖尿病治疗的微量元素形成配合物兼备了壳寡糖及微量元素的各种特性,很有可能在糖尿病及其并发症预防与治疗的研究方面取得新的进展.目的:观察壳寡糖及其铬、钒、硒配合物对胰岛β细胞系NIT-1的促增殖及促胰岛素分泌作用.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-07/09在中国海洋大学生物化学实验室完成.材料:壳寡糖及其铬、钒、硒配合物由中国海洋人学生物化学实验室制备;转基因小鼠胰岛β细胞系NIT-1细胞株由中国海洋大学药物所提供.方法:①胰岛β细胞系NfT-1细胞株接种于96孔板中,实验组加入100 mg/L壳寡糖及其配合物的培养液培养,并设加入不含样品的培养液作为对照组,分别在加样后24,48,72,120,168,216 h取出,MTT法测定细胞生长曲线.②胰岛B细胞系NIT-1细胞株接种于24孔培养板中,实验组加入100 mg/L壳寡糖及其配合物的培养液,并设加入不含样品的培养液作为对照组,分别存加样后2,4,6,8,10,12,14 d取出,用放射免疫法测定培养液中的胰岛素含量.同时在培养6 d后进行胰岛素刺激释放试验,测定胰岛素释放量,计算刺激指数.主要观察指标:壳寡糖及其配合物对胰岛细胞促增殖作用及促胰岛素分泌作用.结果:壳寡糖及铬、硒配合物最适质量浓度为100 mg/L,对胰岛β细胞有明显的增殖作用.壳寡糖铬、硒配合物在48 h促胰岛β细胞增殖明显,且在120 h细胞进入生长平台期,壳寡糖铬配合物组细胞密度达到最大,活力高于其他组.壳寡精及其铬、钒、硒配合物组在第10天胰岛素释放量均高于对照组(P<0.05),壳寡糖组促胰岛素分泌作用最为显著.培养第6天壳寡糖及其铬、钒、硒配合物组胰岛素刺激指数均高于对照组(P<0.05).结论:壳寡糖及其配合物对于胰岛β细胞体外增殖具有明显的促进作用,并可以显著促进胰岛β细胞的胰岛素分泌.     

瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与其细胞毒性作用

目的:观察大鼠原代培养的肺成纤维细胞给予不同浓度的瑞香狼毒提取液后,肺成纤维细胞增殖与剂量增加的效应及其对细胞产生的毒性作用。方法:实验于2003-12/2004-03在军事医学科学院附属医院药剂科临床药理室完成。选取纯系Wistar雌性大白鼠10只,瑞香狼毒由中国人民解放军第307医院药剂科中药房提供。经过传代5代以后的肺成纤维细胞大部分呈梭形,可以用于实验,3个实验各自独立。①肺成纤维细胞增殖检测与分组:大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培养,48h后处于对数生长期,可进行增殖试验。随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的瑞香狼毒提取液。应用噻唑蓝比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响。②乳酸脱氢酶活性测定与分组:随机分为1个空白对照组和5个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为125,62.5,31.25,15.625,7.813mg/L的瑞香狼毒提取液。全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察其细胞毒性。③细胞形态学观察与分组:随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的瑞香狼毒提取液,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:实验纳入10只大鼠无脱落。①瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞增殖的影响:浓度为500,250,125mg/L的瑞香狼毒提取液组吸光度值明显低于空白对照组(0.104±0.003,0.097±0.003,0.172±0.029,0.285±0.011,P<0.01);浓度为62.5,31.25,15.625mg/L的瑞香狼毒提取液组吸光度值亦低于空白对照组(0.217±0.030,0.216±0.010,0.199±0.005,0.285±0.011,P<0.05)。②瑞香狼毒提取液对细胞的毒性作用:浓度为15.625,7.813mg/L的瑞香狼毒提取液组乳酸脱氢酶吸光度值与空白对照组比较,均无显著性差异(28.91±0.88,26.27±0.31,25.91±0.39,P>0.05),说明瑞香狼毒提取液在浓度为15.625,7.813mg/L范围内对细胞无毒性作用;而浓度为125,62.5,31.25mg/L的瑞香狼毒提取液其乳酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组(P<0.05),且随着浓度的增加,毒性显著增强。③瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞形态学的影响:细胞传代至第5代以后,所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞。用药前伸展良好,折光性较弱,有方向性;而加入瑞香狼毒提取液后肺成纤维细胞数目显著减少,形状不规则,突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多。结论:瑞香狼毒提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较强的抑制作用,随着给药剂量的增加,对细胞增殖抑制作用增强,呈剂量依赖性抑制。同时在高浓度范围内瑞香狼毒提取液对细胞具有一定的毒性作用。     

千金子提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的影响及细胞毒性作用

目的:观察原代培养的大鼠肺成纤维细胞给予不同浓度的千金子提取液后,对肺成纤维细胞增殖的影响以及药物的细胞毒性作用。方法:实验于2003-12/2004-03在军事医学科学院附属医院药剂科临床药理室完成。选取纯系Wistar雌性大白鼠10只,千金子为北京首创大地药业有限公司产品,经鉴定为大戟科属植物续随子的种子。经过传代5代以后的肺成纤维细胞大部分呈梭形,可以用于实验,3个实验各自独立。①肺成纤维细胞增殖检测与分组:大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培养,48h后处于对数生长期,可进行增殖试验。随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的千金子提取液。应用四甲基偶氮唑盐比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响。②乳酸脱氢酶活性测定与分组:随机分为1个空白对照组和5个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为125,62.5,31.25,15.625,7.813mg/L的千金子提取液。全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察其细胞毒性。③细胞形态学观察与分组:随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625mg/L的千金子提取液,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:实验纳入10只大鼠无脱落。①千金子提取液对肺成纤维细胞增殖的影响:浓度为500,250,125,62.5mg/L的千金子提取液的吸光度值明显低于空白对照组(0.108±0.004,0.089±0.002,0.093±0.005,0.187±0.002,0.285±0.011,P<0.01);浓度为31.25,15.625mg/L的千金子提取液的吸光度值仍低于空白对照组(0.231±0.014,0.218±0.023,0.285±0.011,P<0.05)。②千金子提取液对细胞的毒性作用:浓度为15.625,7.813mg/L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值与空白对照组比较,均无显著性差异(28.91±0.88,26.77±0.26,25.91±0.39,P>0.05),说明千金子提取液在浓度为15.625,7.813mg/L范围内对细胞无毒性作用;而浓度为125,62.5,31.25mg/L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组(P<0.05),且随着浓度的增加,毒性作用显著增强。③千金子提取液对肺成纤维细胞形态学的影响:细胞传代至第5代以后,所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞。用药前伸展良好,折光性较弱,有方向性;而加入千金子提取液后肺成纤维细胞数目显著减少,形状不规则,突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多。结论:千金子提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较强的抑制作用,随着给药剂量的增加,对细胞增殖抑制作用增强,呈剂量依赖性抑制。同时在高浓度范围内千金子提取液对细胞具有一定的毒性作用。     

针刺提高2型糖尿病模型大鼠胰岛β细胞胰岛素的表达

背景:针刺治疗2型糖尿病具有很好的疗效。目的:观察针刺对2型糖尿病模型大鼠胰岛β细胞胰岛素表达的影响。方法:将糖尿病模型大鼠按随机化原则分为针刺组、西药组、模型组,同时设置正常对照组。针刺组大鼠取足三里、内庭和胰俞穴给予针刺治疗,西药组用罗格列酮0.2mg/kg灌胃,模型组用双蒸水2mL/kg灌胃,均1次/d,连续4周。结果与结论:①血糖:针刺组明显低于模型组、西药组(P<0.05)。②血脂:针刺组胆固醇和三酰甘油低于模型组(P<0.05);高密度脂蛋白胆固醇明显高于模型组(P<0.01)。针刺组三指标与西药组比较差异无显著性意义。③胰岛β细胞胰岛素表达:针刺组显著高于模型组和西药组(P<0.05)。④胰岛形态:模型组与西药组胰岛结构不完整,结构破坏,胰岛素染色效果差;针刺组胰岛结构趋向完整,胰岛素染色颗粒明显。说明针刺可显著提高2型糖尿病模型大鼠胰岛β细胞胰岛素表达水平,有效改善胰岛β细胞功能。     

当归多糖对体外造血微环境中肌卫星细胞增殖的影响

背景: 肌卫星细胞是造血功能重建最有希望的种子细胞来源.当归多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,也可以有效改变肌卫星细胞的生长特性.目的: 观察当归多糖对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响.方法: 分离小鼠肌卫星细胞,培养5 d后采用a一肌动蛋白免疫细胞化学鉴定.将细胞接种于96孔板培养24 h,使细胞同步化;将细胞分为空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含50,100,200,300,400 mg/L当归多糖的DMEM/F12培养基实验组及经50,100,200,300,400 mg/L当归多糖干预后骨髓基质细胞条件培养基组.经实验处理后采用MTT法检测各组细胞的增殖活性.结果与结论: 分离培养的骨骼肌卫星细胞呈α-肌动蛋白染色阳性,通过MTT法检测发现,经不同浓度当归多糖干预后的骨髓基质细胞条件培养基培养的各组肌卫星细胞增殖显著.且经当归多糖干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变肌卫星细胞的生长特性,并呈剂量依赖性.     

大鼠胰岛细胞的分离提纯及移植效果观察

背景:胰岛细胞移植已成为治疗1型和部分2型糖尿病的有效途径,但供体不足的问题限制了其发展。目的:改进胰岛细胞的分离和纯化方法,并观察其移植效果。设计:实验方法改进。单位:中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室。材料:实验于2006-01/10在中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室完成。供体为普通级封闭群Wistar大鼠,雌雄不限,体质量250～300g;受体为普通级封闭群SD大鼠,雄性,(Frompage2388)体质量180～220g,两种大鼠均购自中国医科大学实验动物部(许可证号:SYXK(LIAO)2003-0013)。方法:①胰岛细胞的分离纯化及胰岛功能评估:取未禁食的Wistar大鼠,麻醉后处死。于胆总管起始处剪一小口,将连着装有胶原酶的注射器的1mm直径的腰麻管顺行插入,将冷的胶原酶溶液(1.5g/L)注入胰管内,使胰腺充分膨胀。切取胰腺,将装有胰腺的离心管水浴消化,水浴期间间断加入1mol/L的NaOH使消化液的pH值保持在7.8±1.0,经Ficoll密度梯度离心法纯化胰岛。应用双硫腙法评估胰岛的纯度,应用丫啶橙/碘丙啶法评估胰岛的存活率,存活率=活细胞总数/(活细胞总数 死细胞总数)×100%。通过胰岛素释放实验检测胰岛活性:胰岛素释放指数=第3小时(高糖环境)的胰岛素含量/第2小时(低糖环境)的胰岛素含量。②胰岛移植效果的观察:受体SD大鼠腹腔内注射链脲霉素,非禁食状态下2次血糖>16.7mmol/L确定为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠按随机数字表法分为两组,即胰岛移植组和糖尿病组,每组8只。胰岛移植组于肾被膜下注射约1000个胰岛,糖尿病组注射相应体积的1640培养液,再随机取8只血糖浓度≤5.5mmol/L的SD大鼠作为正常对照组。术后每天检测大鼠血糖,以非禁食血糖小于11.1mmol/L者视为胰岛移植存活。胰岛移植组大鼠血糖正常3d后对胰岛移植组、糖尿病组和正常对照组大鼠分别进行静脉糖耐量试验,测定0,15,30,60,90及120min血糖。主要观察指标:胰岛的纯度、存活率及活性。结果:纳入受体SD大鼠24只,全部进入结果分析,无脱失。①平均每只大鼠胰腺可获得(1150±141)个胰岛,纯度>95%,存活率>98%,胰岛形态完好。②体外胰岛素释放实验低、高糖组的胰岛素释放量为(70.5±6.9)mIU/L,(321.4±11.6)mIU/L,胰岛素释放指数为4.60±0.52,提示所提取的胰岛β细胞有良好的功能。③胰岛移植组大鼠胰岛移植当天血糖既开始下降,3d后血糖下降至正常,维持正常血糖水平(6±2)d;而糖尿病组大鼠血糖均在16.7mmol/L以上。胰岛移植组静脉葡萄糖耐量试验曲线与正常对照组相似。结论:经原位灌注法分离、Ficoll密度梯度离心纯化的胰岛制备技术可以获得高纯度和活力良好的大鼠胰岛细胞。     

瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与其细胞毒性作用

目的：观察大鼠原代培养的肺成纤维细胞给予不同浓度的瑞香狼毒提取液后,肺成纤维细胞增殖与剂量增加的效应及其对细胞产生的毒性作用.方法：实验于2003-12/2004-03在军事医学科学院附属医院药剂科临床药理室完成.选取纯系Wistar雌性大白鼠10只,瑞香狼毒由中国人民解放军第307医院药剂科中药房提供.经过传代5代以后的肺成纤维细胞大部分呈梭形,可以用于实验,3个实验各自独立.[1]肺成纤维细胞增殖检测与分组：大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培养,48 h后处于对数生长期,可进行增殖试验.随机分为1个空白对照组和6个实验组.空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625 mg/L的瑞香狼毒提取液.应用噻唑蓝比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响.[2]乳酸脱氢酶活性测定与分组：随机分为1个空白对照组和5个实验组.空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为125,62.5,31.25,15.625,7.813 mg/L的瑞香狼毒提取液.全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察其细胞毒性.[3]细胞形态学观察与分组：随机分为1个空白对照组和6个实验组.空白对照组加入空白DMEM,实验组分别加入浓度为500,250,125,62.5,31.25,15.625 mg/L的瑞香狼毒提取液,显微镜下观察细胞形态学变化.结果：实验纳入10只大鼠无脱落.[1]瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞增殖的影响：浓度为500,250,125 mg/L的瑞香狼毒提取液组吸光度值明显低于空白对照组（0.104&;#177;0.003,0.097&;#177;0.003,0.172&;#177;0.029,0.285&;#177;0.011,P＜0.01）;浓度为62.5,31.25,15.625mg/L的瑞香狼毒提取液组吸光度值亦低于空白对照组（0.217&;#177;0.030,0.216&;#177;0.010,0.199&;#177;0.005,0.285&;#177;0.011,P＜0.05）.[2]瑞香狼毒提取液对细胞的毒性作用：浓度为15.625,7.813 mg/L的瑞香狼毒提取液组乳酸脱氢酶吸光度值与空白对照组比较,均无显著性差异（28.91&;#177;0.88,26.27&;#177;0.31,25.91&;#177;0.39,P＞0.05）,说明瑞香狼毒提取液在浓度为15.625,7.813 mg/L范围内对细胞无毒性作用;而浓度为125,62.5,31.25 mg/L的瑞香狼毒提取液其乳酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组（P＜0.05）,且随着浓度的增加,毒性显著增强.[3]瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞形态学的影响：细胞传代至第5代以后,所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞.用药前伸展良好,折光性较弱,有方向性;而加入瑞香狼毒提取液后肺成纤维细胞数目显著减少,形状不规则,突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多.结论：瑞香狼毒提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较强的抑制作用,随着给药剂量的增加,对细胞增殖抑制作用增强,呈剂量依赖性抑制.同时在高浓度范围内瑞香狼毒提取液对细胞具有一定的毒性作用.     

二甲双胍对糖脂中毒的大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌功能的保护作用

目的：观察二甲双胍对慢性暴露于高糖和高游离脂肪酸的大鼠离体胰岛细胞胰岛素分泌功能的影响。方法：将大鼠离体胰岛细胞培养于5.5-16.7 mmol/L葡萄糖或5.5 mmol/L软脂酸中48 h,再加入不同浓度二甲双胍（0-5 mg/L）培养24 h。收集各组胰岛细胞,加入5.5-16.7 mmol/L葡萄糖刺激培养1 h。收集培养液,用放免法测定其基础及葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）水平。结果：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）用不同浓度二甲双胍（0-5 mg/L）处理后的β细胞基础及葡萄糖刺激的胰岛素分泌无显著性差异（P〉0.05）;高糖（16.7 mmol/L葡萄糖）及高脂（0.5 mmol/L棕榈酸）组β细胞基础胰岛素分泌较对照组明显增高（P〈0.01）,GSIS较对照组明显降低（P〈0.01）;用2.5-5 mg/L二甲双胍干预后,高糖及高脂组β细胞基础胰岛素分泌较未治疗组明显降低（P〈0.01）,GSIS较未治疗组明显增高（P〈0.01）。结论：低糖环境下,二甲双胍对β细胞胰岛素分泌功能无明显影响;慢性高糖及高脂可致β细胞胰岛素分泌功能受损;而2.5-5 mg/L二甲双胍能改善糖脂毒性所致β细胞胰岛素分泌功能异常。提示二甲双胍降糖效果除了其外周作用外,可能对糖脂中毒的β细胞具有直接保护作用。     

自身免疫性肝炎大鼠模型外周血淋巴细胞体外培养与褪黑素的影响

目的:观察褪黑素对体外培养淋巴细胞增殖及促进细胞因子分泌的作用。方法:实验于2004-10/2006-10在解放军第一二三医院南京军区肝病中心实验室完成。①实验材料:Wistar大鼠,雄性,3月龄,体质量(230±20)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。褪黑素:美国Sigma公司产品。②实验方法:采用弗氏完全佐剂加肝细胞特异性脂蛋白法建立自身免疫性肝炎大鼠模型。分别抽取正常大鼠及模型大鼠的外周血,实验室常规培养,并将其分为3组:褪黑素组培养基中加褪黑素使终浓度为2mg/L;促肝细胞生长素组培养基中加促肝细胞生长素使终浓度为2mg/L;空白对照组培养基中不加任何细胞分裂刺激剂。③实验评估:培养48h后,对外周血淋巴细胞进行常规计数并采用液体闪烁计数仪记录1min计数结果值。用于观察褪黑素与促肝细胞生长素促进外周血淋巴细胞增殖的效果。并检测培养上清液中的各细胞因子浓度,用于观察褪黑素与促肝细胞生长素促进外周血淋巴细胞分泌细胞因子的作用。结果:①褪黑素对正常大鼠外周血淋巴细胞有促进增殖作用,细胞数与1min计数值较空白对照组明显升高(P<0.05),促肝细胞生长素无促进外周血淋巴细胞增殖作用。②褪黑素对模型大鼠外周血淋巴细胞有促进增殖作用,细胞数与1min计数值较空白对照组明显升高(P<0.05),促肝细胞生长素无促进外周血淋巴细胞增殖作用。③在褪黑素作用下,正常大鼠Th1细胞因子IL-2和IFN-γ水平明显高于空白对照组和促肝细胞生长素组(P<0.01),Th2细胞因子IL-6明显升高(P<0.05),IL-4水平与空白对照组比较,差异不显著(P>0.05),促肝细胞生长素组Th1和Th2细胞因子与空白对照组无明显差异(P>0.05)。④在褪黑素作用下,模型大鼠Th1细胞因子IL-2和IFN-γ水平较空白对照和促肝细胞生长素组明显升高(P<0.05),Th2细胞因子IL-4和IL-6水平与空白对照和促肝细胞生长素组无明显差异(P>0.05)。结论:褪黑素对自身免疫性肝炎大鼠外周血淋巴细胞有较强的刺激分裂作用。     

不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞样细胞的定向分化

背景:肉苁蓉及其所含的化学成分有神经保护作用,并能促进神经功能的恢复。目的:分析肉苁蓉总苷体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞样细胞的最佳剂量。方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,并利用β-巯基乙醇及不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导骨髓间充质干细胞,分为空白对照组、β-巯基乙醇对照组、肉苁蓉总苷100,200,300μg/L组进行观察。结果与结论:诱导7d后,与空白对照组比较,其他各组活细胞数明显增高(P<0.05);诱导第3天,与空白对照组比较,内苁蓉总苷各剂量组细胞Nestin、NSE阳性表达率明显增高(P<0.05)。100,200μg/L质量浓度肉苁蓉总苷可有效促进骨髓间充质干细胞增殖,并能够明显促进其向神经细胞样细胞分化,300μg/L质量浓度可以促进骨髓间充质干细胞增殖,但效果不及100,200μg/L组(P<0.05)。     

腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子1基因对胰岛β细胞的保护作用

背景:研究表明自身高表达胰岛素样生长因子1的小鼠对药物诱导糖尿病有一定的预防作用.目的:观察腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子1基因对胰岛β细胞损伤的保护作用.方法:①体外实验:以Ad-rIGF-1、Ad-eGFP直接感染鼠胰岛β细胞标准细胞株-R1Nm5F细胞,然后两组再分别加入0,1.5 mmol/L链脲佐菌素.②体内预防实验:将60只昆明小鼠随机分为空白对照组(不做任何处理)、糖尿病对照组(制作糖尿病模型)、空载体对照组(仅腹腔注射Ad-eGFP重组腺病毒液)、Ad-rIGF-1组(于糖尿病模型制作前2周腹腔注射Ad-rIGF-1重组腺病毒液).③体内治疗实验:将75只昆明小鼠随机分组:空白对照组(不做任何处理)、糖尿病对照组、胰岛素组、Ad-rIGF-1组、Ad-rIGF-1联合胰岛素组.后3组制作糖尿病模型后给予相应干预.结果与结论:①鼠胰岛素样生长因子1在胰岛β细胞有效表达,并具有抑制链脲佐菌素诱导胰岛β细胞凋亡的作用.②Ad-rIGF-1组糖尿病发病率低,平均血糖水平低,胰腺炎症浸润程度轻.③与糖尿病对照组、胰岛素组相比,Ad-rIGF-1组和Ad-rIGF-1联合胰岛素组胰腺炎症浸润程度轻,鼠胰岛素样生长因子1在胰岛局部高表达;胰岛素组、Ad-rIGF-1组、Ad-rIGF-1联合胰岛素组血清C-肽水平低,组间比较无明显差别(P > 0.05).表明胰岛β细胞局部表达鼠胰岛素样生长因子1能够保护胰岛β细胞功能,提高细胞存活率,预防和减轻链脲佐菌素诱导的昆明小鼠1型糖尿病.但鼠胰岛素样生长因子1基因转导与胰岛素皮下注射联合应用对糖尿病早期残存胰岛细胞功能的保护效果不明显.     

不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞样细胞的定向分化

背景：肉苁蓉及其所含的化学成分有神经保护作用,并能促进神经功能的恢复。目的：分析肉苁蓉总苷体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞样细胞的最佳剂量。方法：分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,并利用β-巯基乙醇及不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导骨髓间充质干细胞,分为空白对照组、β-巯基乙醇对照组、肉苁蓉总苷100,200,300μg/L组进行观察。结果与结论：诱导7d后,与空白对照组比较,其他各组活细胞数明显增高（P〈0.05）;诱导第3天,与空白对照组比较,内苁蓉总苷各剂量组细胞Nestin、NSE阳性表达率明显增高（P〈0.05）。100,200μg/L质量浓度肉苁蓉总苷可有效促进骨髓间充质干细胞增殖,并能够明显促进其向神经细胞样细胞分化,300μg/L质量浓度可以促进骨髓间充质干细胞增殖,但效果不及100,200μg/L组（P〈0.05）。     

miR-9对人脑胶质瘤LN229细胞增殖的影响

目的探讨miR-9对人脑胶质瘤LN229细胞增殖的影响及可能机制。方法对数生长期人脑胶质瘤LN229细胞,随机分为miR-9抑制剂组(转染30 mg/L miR-9小干扰RNA质粒5μL)、空白对照组(转染空载质粒)、乳酸脱氢酶A(labeling recombinant lactate dehydrogenase A,LDHA)激动剂组(转染30 mg/L miR-9小干扰RNA质粒5μL及4 mg/L LDHA激动剂5μL)。转染后培养48 h,3组采用CCK-8法检测细胞增殖率;实时荧光定量PCR法检测miR-9 mRNA、LDHA mRNA相对表达量;氧化酶法测定葡萄糖消耗量;比色测定法测定乳糖产量。结果转染后培养48 h,miR-9抑制剂组、空白对照组、LDHA激动剂组细胞增殖率吸光度值(0.60±0.01、0.90±0.02、1.15±0.05)依次增高(P<0.05);miR-9 mRNA相对表达量在miR-9抑制剂组(0.52±0.01)、LDHA激动剂组(0.53±0.01)低于空白对照组(1.67±0.01)(P<0.05),miR-9抑制剂组与LDHA激动剂组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-9抑制剂组、空白对照组、LDHA激动剂组LDHA mRNA相对表达量(0.64±0.01、0.87±0.01、2.77±0.01)、葡萄糖消耗量[(0.02±0.01)、(0.36±0.01)、(0.77±0.01)nmol/L]、乳糖产量[(43.02±4.01)、(73.02±3.11)、(1562.00±5.44)nmol/L]均依次增高(P<0.05)。结论miR-9通过促进LDHA表达,增强肿瘤细胞有氧糖酵解,促进人脑胶质瘤LN229细胞增殖。     

肝细胞生长因子在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下对原代肝星状细胞增殖及凋亡的影响

背景:活化的肝星状细胞是肝纤维化的关键因素,研究表明肝细胞生长因子能促进星状细胞凋亡,其具体机制可能与增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导星状细胞凋亡有关。目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下,肝细胞生长因子对原代肝星状细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法:将SD大鼠原代肝星状细胞复苏、传代,细胞增殖明显时用于实验。实验分为4组:空白对照组为单纯肝星状细胞培养;肝细胞生长因子组:将100μg/L肝细胞生长因子作用于肝星状细胞;TRAIL组:将2mg/L的TRAIL作用于肝星状细胞;肝细胞生长因子+TRAIL组:将肝细胞生长因子预先刺激肝星状细胞24h,再加入2mg/LTRAIL。结果与结论:MTT检测显示肝细胞生长因子及TRAIL分别在50～200μg/L、0.5～1.5mg/L各浓度下对肝星状细胞增殖抑制率无影响,TRAIL在2mg/L作用下对肝星状细胞有抑制作用。流式细胞仪检测肝细胞生长因子+TRAIL组的中晚期凋亡率明显高于空白对照组及肝细胞生长因子组(P<0.05);肝细胞生长因子+TRAIL组DR5荧光强度明显高于其他3组(P<0.01)。提示在TRAIL作用下,肝细胞生长因子能促进肝星状细胞的凋亡、抑制其增殖。可能与肝细胞生长因子上调活化肝星状细胞表面DR5表达有关。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞增殖的影响

背景:肌源性干细胞在体外培养过程中存在纯化、扩增、定向分化等难题,碱性成纤维细胞生长因子作为生物活性因子的一员,因其生物活性的多效性而备受关注.目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞体外增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-04/07在沈阳医学院完成.材料:健康雄性Wister大鼠5只,由沈阳医学院实验动物中心提供.碱性成纤维细胞生长因子为珠海生物制品有限公司产品.方法:无菌条件下取大鼠左前肢肱三头肌,采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.取第2代肌源性干细胞,分别用终浓度为6.25,12.50,25.00,50.00,100.00μg/L碱性成纤维细胞生长因子进行干预;以单纯加入200 μL生长培养基作为空白对照组,以加入200μL生长培养基+肌源性干细胞作为阴性对照组.分别于培养24,48,72,96 h加入MTT溶液.主要观察指标:免疫细胞化学法鉴定大鼠肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况.结果:肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应,少数呈Desmin阳性反应.①不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞的促增殖效应:与阴性对照组比较,各浓度碱性成纤维细胞生长因子组对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应(P<0.05);浓度为6.25-50.00 μg/L时促增殖作用随其质量浓度升高而显著增强(P<0.01),至50.00 μg/L时其促增殖作用接近顶峰.②碱性成纤维细胞生长因子在不同培养时间点对肌源性干细胞的促增殖效应:随培养时间的延长肌源性干细胞明显增殖,与阴性对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组出现显著促增殖效应(P<0.01)的时间为培养96 h.结论:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠肌源性干细胞增殖,且呈浓度一时间依赖性增加,50.00 μg/L与96 h为较佳的体外培养质量浓度和时间.     

成骨生长肽促进钛表面大鼠成骨细胞的增殖分化

背景:成骨生长肽具有促进多种基质细胞增殖活性,成骨活性,免疫原性低,自身调节极其敏感,提取制作工艺简单等众多优点。目的:体外观察成骨生长肽对大鼠颅盖骨来源成骨细胞在钛金属表面增殖分化的影响。方法:将体外培养的新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞以5×107L-1细胞浓度接种于6孔板中的纯钛试件表面,分别加入0(空白对照),10-10,10-9,10-8,10-7mol/L的成骨生长肽,干预1,3,5,7,9d后应用MTT法检测纯钛试件表面成骨细胞的增殖活性,应用酶联免疫法检测成骨细胞内碱性磷酸酶活性。结果与结论:与空白对照组比较,各浓度成骨生长肽组纯钛试件表面成骨细胞增殖活跃(P<0.05),且最佳作用浓度为10-9mol/L(P<0.05);各浓度成骨生长肽组细胞内碱性磷酸酶活性增强(P<0.05),且最佳作用浓度为10-8mol/L(P<0.05)。表明成骨生长肽可促进钛片表面成骨细胞的增殖活性,增强细胞内碱性磷酸酶活性。     

硫酸软骨素对HL60细胞增殖分化的影响

背景:硫酸软骨素是细胞基质的重要成分,可促进肿瘤细胞的增殖,抑制其转移。目的:观察硫酸软骨素对阿霉素作用下HL60细胞增殖分化的影响。设计:开放性实验。单位:青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-09/2004-12在青岛大学医学院生物化学与分子生物学研究室完成。HL60细胞株购于中国医学科学院上海细胞库,为人类早幼粒白血病细胞。牛软骨硫酸软骨素(Sigma)。方法:①细胞传代培养后将进入对数增殖期的细胞用含体积分数0.1灭活胎牛血清的RPMI1640培养液配制成1×108L-1的细胞悬液,分装于45个培养瓶中,4mL/瓶。②取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。采取细胞计数法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞密度的变化。③取分装好的细胞悬液30瓶,分为硫酸软骨素 阿霉素组、硫酸软骨素组,各15瓶。按照0,5,25,50,75mg/L浓度向两组加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mmol/L磷酸盐缓冲液。用MTT法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞加入阿霉素后细胞存活率的变化。④取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。用酶联免疫反应测定各组细胞的酸性磷酸酶活性,观察其对细胞分化的影响。主要观察指标:①硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响。②硫酸软骨素 阿霉素对HL60细胞存活率的影响。③硫酸软骨素对HL60细胞酸性磷酸酶活性的影响。结果:共制备细胞悬液45瓶,全部进入结果分析。①与空白对照组比较,不同浓度硫酸软骨素处理24h后HL60细胞密度均显著升高(P<0.01);且50,75mg/L硫酸软骨素浓度组的细胞密度升高尤为明显,但两组间比较基本相似(P>0.05),说明在这个浓度范围内硫酸软骨素对细胞生长的促进作用变化不大。②与空白对照组比较,加入不同浓度硫酸软骨素后,硫酸软骨素 阿霉素组细胞存活率均有不同程度的降低,硫酸软骨素浓度超过25mg/L时降低明显(P<0.01)。③与空白对照组比较,5,25,50mg/L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值均明显升高(1.268±0.038,1.305±0.101,1.321±0.021,1.354±0.013,P<0.01或0.05),尤其是75mg/L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值高达1.406±0.113,与空白对照组比较差异有极显著意义(P<0.001)。结论:硫酸软骨素在适当浓度时对HL60细胞的增殖产生促进作用,可提高HL60细胞对阿霉素的敏感性,促进细胞分化。