基于药效学实验的化瘀骨合片提取工艺筛选

目的基于药效学实验筛选化瘀骨合片提取工艺。方法建立腹腔注射醋酸致小鼠扭体模型、皮下注射肾上腺素致大鼠血瘀模型、激素性股骨头坏死大鼠模型,比较不同提取工艺样品在止痛、活血化瘀、改善大鼠股骨头坏死作用上的效果。结果镇痛实验显示,样品一高剂量及样品四高、低剂量组显著减少小鼠扭体次数(P0.05)。血瘀实验显示,各样品组卡松黏度、血浆黏度、全血黏度无显著差异(P0.05)。激素性股骨头坏死模型血液流变学显示,样品三和样品四高、低剂量组在血浆黏度、红细胞聚集指数水平上呈明显下降趋势(P0.01);在切变率水平上,除样品一高剂量组外各给药组均显著下降(P0.01)。病理分析显示,样品四高、低剂量组可明显改善股骨头坏死(P0.05,P0.01)。结论化瘀骨合片最优提取工艺为川芎、当归提取挥发油后,药渣与柳豆叶等其余饮片进行水提醇沉,它在止痛、活血化瘀、改善大鼠股骨头坏死作用上更明显。     

医疗机构中药制剂的研究——孙冬梅教授学术经验撷要

医疗机构中药制剂在继承中医药传统,保持和发挥本单位中医药特色和优势上具有重要的地位。孙冬梅教授从事医疗机构制剂研发工作近二十年,对临床应用安全、疗效确切的协定处方,按照医疗机构中药制剂研究有关规定,在制备工艺、质量标准、制剂稳定性、药效学和毒理学等方面进行了系统、规范研究,保证了中药制剂的安全、有效和稳定。医疗机构中药制剂的研发,填补了中成药在应用方面的不足,得到了患者的充分肯定,同时也取得了较大的社会效益和经济效益。     

金边土鳖HPLC指纹图谱及氨基酸含量测定

目的:建立金边土鳖氨基酸HPLC指纹图谱分析方法,并同时定量分析了6种氨基酸成分,为制订金边土鳖的质量标准提供参考。方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)-高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,以Waters XBridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;流动相A为0.1 mol·L-1乙酸钠(p H 6.5)-乙腈(95∶5),B为乙腈-水(4∶1);检测波长254 nm;流速0.8 m L·min-1梯度洗脱;柱温40℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"和SPSS 22.0软件分别对其进行相似度评价和聚类分析。结果:初步建立了金边土鳖游离氨基酸HPLC指纹图谱共有模式,确定了21个共有峰,并指认了13种氨基酸成分;综合14批金边土鳖相似度分析、聚类分析和定量分析,结果显示相似度分析和聚类分析基本一致,且发现精氨酸含量的高低可能与产地有一定的关系。结论:建立了金边土鳖HPLC指纹图谱分析方法,可较全面反映该药材中氨基酸成分的信息,为金边土鳖药材鉴定和质量标准的制订提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS结合多元统计分析不同产地布渣叶化学成分的差异

目的:应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术,结合多元统计分析技术考察不同产地布渣叶的差异性化学成分.方法:色谱条件为Waters CORTECS UPLC C18色谱柱(2.1 mmx150 mm,1.6 μm),以甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)流动相进行梯度洗脱,流速0.25 ml/min,进样量1μl.采用电喷雾电离(ESI)技术,在负离子模式进行采集检测.应用主成分分析(PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等多元统计技术对代谢轮廓及化学成分进行差异性聚类,并筛选布渣叶的差异化学成分.结果:安徽产地与其他产地布渣叶在化学成分上差异有统计学意义.鉴定出13个黄酮类差异成分(3个原花青素类、5个黄酮碳苷类、5个黄酮醇氧苷类).结论:通过该研究建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS 多元统计分析方法,明确了不同产地布渣叶的差异化学成分,为布渣叶的质量控制提供了依据,为揭示生态环境对布渣叶代谢物合成积累的影响规律提供了基础资料.     

健骨方对破骨细胞形成和成骨细胞增殖分化的影响

目的　探讨健骨方水提物对破骨细胞分化及成骨细胞增殖分化的影响。方法　制备健骨方水提物,通过MTT法测定药物对骨髓单核巨噬细胞（BMMs）细胞的毒性,采用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导BMMs分化形成破骨细胞,加入不同浓度药物进行干预,采用抗酒石酸酸性磷酸酶( TRACP) 染色法测定破骨细胞分化抑制作用,采用Western Blot 法测定RANKL诱导的NF-κB破骨细胞分化信号通路,运用RT-qPCR法测定信号通路下游破骨细胞分化关键基因NFATc1、C-FOS等的mRNA表达水平。以MC3T3-E1细胞作为前体成骨细胞,加入不同浓度药物进行干预,通过CCK8法测定细胞增殖能力、PNPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性、茜素红S染色法测定细胞矿化能力。结果　MTT法结果显示,健骨方细胞有毒性浓度大于500 μg/mL（P＜0.05）,破骨细胞分化抑制IC50为1.25 μg/mL。机制研究显示健骨方显著下调了RANKL-NF-κB信号通路中的p-P65、P53的蛋白表达（P＜0.05）,显著抑制了通路下游C-FOS、NFATc1等的mRNA表达水平（P＜0.01,P＜0.05）。此外,成骨细胞活性检测显示,健骨方能明显促进MC3T3-E1细胞增殖、提高ALP活性及增加成骨细胞钙化的能力。结论 健骨方具有抑制破骨细胞分化和促进成骨前体细胞增殖、分化、矿化的药效作用。其作用与抑制破骨细胞分化RANKL-NF-κB信号通路及其下游C-FOS、NFATc1等基因,上调成骨细胞分化促进因子CAL1A2、SPARC和FOSL1基因的表达有关。     

中风复元合剂的纯化工艺研究

目的:确定中风复元合剂的纯化工艺.方法:以纯化药液的固形物含量、芍药苷及橙皮苷的含量为评价指标,通过对比离心沉淀法、乙醇沉淀法、壳聚糖、ZTC1+1澄清剂和101果汁澄清剂法,优选适宜的纯化工艺,并采用L9(34)正交试验设计,以综合加权评分法进一步优选纯化工艺参数.结果:中风复元合剂适宜采用ZTC1+1澄清法纯化工艺,其最佳实验条件为:药液浓度1.0 g/mL,ZTC1+1澄清剂用量4.5％,水浴温度40℃.结论:该纯化工艺合理、稳定可行,可以用于中风复元合剂的纯化.     

HPLC法同时测定祛瘀止痛合剂中6种成分的含量

目的:建立同时测定祛瘀止痛合剂中芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Waters Xbridge C18,流动相为0.1%磷酸-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为203 nm,柱温为20℃,进样量为5μL。结果:芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1检测进样量线性范围分别为0.273 4~2.734μg(r=0.999 9)、0.119 1~1.191μg(r=0.999 9)、0.081 5~0.815μg(r=0.999 9)、0.622 8~6.228μg(r=0.999 9)、0.807 2~8.072μg(r=0.999 9)、1.036 4~10.364μg(r=0.999 9);定量限分别为0.082 0、0.029 8、0.028 5、0.436 0、0.403 6、0.310 9μg,检测限分别为0.027 9、0.009 5、0.010 2、0.124 6、0.121 1、0.093 3μg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为97.85%~100.34%(RSD=0.81%,n=6)、98.14%~101.22%(RSD=1.09%,n=6)、98.42%~102.15%(RSD=1.29%,n=6)、97.77%~100.25%(RSD=0.96%,n=6)、97.32%~99.53%(RSD=0.81%,n=6)、98.28%~101.51%(RSD=1.11%,n=6)。结论:该方法简便快速、稳定可行、重复性好,可用于祛瘀止痛合剂中6种成分含量的同时测定。