一例化疗致Ⅳ度口腔黏膜炎患者的循证护理

口腔黏膜炎是肿瘤化疗患者常见的不良反应之一,与患者接受大剂量化疗、口腔菌群失调等因素有关［1］。口腔黏膜炎可增加全身感染的风险,延长患者的住院时间,影响患者的生活质量［2］。2013年9月,南京医科大学第一附属医院收治了1例化疗致口腔黏膜炎患者,对其进行循证护理,收到了较好效果,现介绍如下。     

靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

肝癌组织特异性蛋白磷酸酶2A催化性C亚基α亚型显性负性突变体表达载体抑制肝癌移植瘤生长的体内研究

目的 构建腺病毒为载体的肝癌组织特异性启动子驱动的蛋白磷酸酶2A催化性C亚基α亚型显性负性突变体(domina negative form of protein phosphatase 2A catalytic subunit α,DN-PP2Acα)表达载体,研究其对肝癌生长的影响.方法 前期研究已构建了甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)基因增强子和磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,pgk)基因启动子组合形成的肝癌组织特异性AFpg启动子,并将AFpg启动子和DN-PP2Acα编码序列构建成AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体.将该载体重组到腺病毒载体中.Western印迹法检测PP2Ac表达水平.MTT法检测细胞生长.用荷瘤裸鼠进行体内研究.结果 AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体可特异性地使DN-PP2Acα表达于AFP阳性肝癌细胞HepG2,并抑制细胞及移植瘤的生长,而对AFP阴性肝癌细胞株SK-HEP-1、正常肝细胞株L-02和移植瘤的生长无明显影响.结论 AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体能特异性地抑制AFP阳性肝癌细胞的生长,可用于肝癌组织特异性基因治疗.     

EGFR-TKIs一线治疗根治术后复发的EGFR基因突变型非小细胞肺癌

目的 探讨表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)一线治疗根治术后复发的EGFR基因突变型非小细胞肺癌(NSCLC)患者的有效性和安全性。方法 62例NSCLC根治术后复发患者接受EGFR-TKIs一线治疗,患者均携带EGFR基因突变。回顾性分析EGFR-TKIs一线治疗的疗效、不良反应以及患者无进展生存期(PFS)和3年总生存率。结果 EGFR-TKIs一线治疗的客观缓解率和疾病控制率分别为51.6%和91.9%。2例(3.2%)患者出现3级及以上不良反应,其中1例为中性粒细胞减少,1例为手足综合征。随访4～36个月,自开始EGFR-TKIs治疗的中位PFS为10.3个月。一、二代和三代EGFR-TKIs治疗的中位PFS分别为8.0个月和16.5个月,3年总生存率分别为6.5%和22.5%。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示奥希替尼能延长患者的PFS(P=0.004)。结论 EGFR-TKIs一线治疗根治术后复发的EGFR基因突变型NSCLC是一个合理的选择。奥希替尼具有延长PFS的趋势。     

蛋白磷酸酶2A抑制剂通过c-Jun氨基末端激酶/蛋白激酶B通路抑制胰腺癌细胞生长的机制

斑蝥素是蛋白磷酸酶2A( protein phosphatase 2A,PP2A)的抑制剂[1].PP2A可使c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)等参与细胞生长的多种激酶去磷酸化而失活.本研究拟检测斑蝥素和经典的PP2A抑制剂冈田酸对胰腺癌细胞JNK/Akt信号通路的活性及细胞生长的影响.     

497例子宫内膜癌的临床诊断治疗以及预后因素分析

目的评价国际大样本数据库子宫内膜癌的临床诊治和预后因素分析。方法选取1995年6月—2013年12月国际TCGA组织诊断治疗的子宫内膜癌患者连续病例,分析临床诊疗的特征,评价临床客观疗效和生存时间。结合lncRNA RP11-350N15.6基因的表达和相关性分析,评价患者的预后指标。结果共497例子宫内膜癌入选。71.6%的患者为Ⅰ~Ⅱ期,白种人为72.6%,子宫内膜腺癌为75.9%,81.1%患者为绝经后患者。RP11-350N15.6基因表达与肿瘤组织病理和分级以及7个重要的肿瘤驱动基因具有明显相关性,高表达组总生存时间明显延长。结论国际TCGA子宫内膜癌研究的诊断治疗符合临床规范,高表达RP11-350N15.6是患者具有良好预后的重要指标。     

HIV-1型病毒蛋白R基因表达载体的构建及其在前列腺癌细胞系PC-3中的表达

目的：利用AdEasy腺病毒载体系统构建含HIV-1病毒蛋白R（viral protein R,Vpr）基因的重组腺病毒,使之有效感染靶细胞前列腺癌细胞系PC-3,并在其中表达Vpr。方法：自表达载体pCI—neo—Vpr中扩增出Vpr基因,插入到pAdTrack—CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack—Vpr,经限制性内切酶Pme I酶切线性化后,利用磷酸钙介导法将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转化到BJ5183大肠埃希菌。挑选同源重组质粒,经Pac I酶切后回收大片段,并将其转染包装细胞AD293。利用荧光显微镜观察AD293细胞中绿色荧光蛋白（GFP）表达。收集第一代重组病毒上清,使之感染AD293细胞得到第二代病毒,如此反复感染AD293细胞3—4轮,使病毒大量扩增。梯度稀释法测定病毒滴度后,分别以感染复数（MOI）为1、5、10的病毒量感染靶细胞PC-3,荧光显微镜观察细胞中GFP表达,并利用RT＋PCR和蛋白质印迹技术分别从mRNA和蛋白水平检测目的基因的转录与表达情况。结果：经限制性内切酶检测、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功构建了携带Vpr基因的重组腺病毒,滴度为3．0×10^8efu／ml。以MOI为5的重组腺病毒感染24h后,80％以上的靶细胞能够表达GFP,RT—PCR和蛋白质印迹能够同时检测到目的基因Vpr的转录与表达。结论：成功构建含Vpr基因重组腺病毒,并且病毒能够有效感染PC-3细胞,使得目的基因在其中获得大量表达,为进一步研究Vpr蛋白对PC-3肿瘤细胞的影响及其可能涉及的信号通路奠定了基础。     

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

D2-40标记阳性淋巴管密度在非小细胞肺癌中的临床作用

目的探讨D2-40标记阳性淋巴管密度(LVD)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达以及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测46例NSCLC组织标本及10例肺良性病变组织标本中D2-40表达,计数D2-40阳性LVD,分析NSCLC周边区LVD与临床病理特征的关系。结果 NSCLC组织中肿瘤周边区LVD明显高于肿瘤中心区和良性病变组织[(11.83±4.15)个vs.(5.34±2.26)个和(4.73±2.62)个](P<0.05)。肿瘤周边区LVD与NSCLC的肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.01),与患者的性别、年龄、病理类型以及肿瘤分化程度无关(P>0.05);肿瘤中心区LVD与上述临床病理参数均无明显相关性(P>0.05)。结论 D2-40可以特异性识别NSCLC组织中淋巴管内皮细胞;其标记的淋巴管主要位于癌周组织。LVD与NSCLC的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移密切相关,可用来评估肿瘤淋巴转移风险。