人类卵母细胞减数分裂进程及形态学研究

目的对人类未成熟卵母细胞进行体外培养，观察卵母细胞直径和卵周隙随卵母细胞成熟所发生的形态学改变，并按照其染色体变化确定人类卵母细胞减数分裂进程。方法穿刺收集多囊卵巢患者未成熟卵母细胞进行体外培养成熟，分别于体外培养4、8、12、16、20、24和28h进行卵母细胞直径及最大卵周隙测量，然后行染色体形态学观察并进行分析。结果未成熟卵母细胞体外培养10h约有50％发生生发泡破裂（GVBD）恢复减数分裂；减数分裂Ⅰ（MⅠ）前中期由培养8h的31．37％上升到16h的45％，然后下降；MⅠ中期（Meta-MⅠ）在培养20h进入高峰，占到40．63％，MⅠ后、末期（Ana／tel-MⅠ）维持时问相对较短，24h后多数已进入减数分裂Ⅱ（MⅡ）成熟期，28h未成熟卵母细胞体外培养的成熟率为68．85％。另外发现随着卵母细胞的体外成熟，其直径不会发生明显改变，但卵周隙（PVS）却在逐步增加。结论按照常规的体外培养方法可大致确定人类未成熟卵母细胞的体外成熟进程，且认为卵周隙的扩大可作为卵母细胞成熟分期的另一标志。     

口腔黏膜下植入软组织扩张器对局部血液微循环的影响

目的 探讨软组织扩张器移植术以及术后扩张器扩张过程中对术区血运微循环的影响.方法 选取7只成年比格犬,拔除比格犬双侧所有前磨牙,并去除部分下颌牙槽骨以及软组织,建立下颌牙槽骨及软组织缺损模型.6周后,在实验侧黏膜下植入软组织扩张器,对照侧不进行处理.并在手术前、局麻后2min、即刻手术后以及术后3天和5周的5个时间点,利用多普勒激光对局部血供水平进行检测.结果 术后术区未出现任何并发症.局麻后2min实验侧血供检测值出现显著下降,即刻手术后并未出现持续性下降.血供检测值在术后3天较局麻后2min以及即刻手术后显著性上升,恢复至基线水平,与对照侧无明显差异.术后5周,实验侧血供检测值维持在基线水平,与对照侧无明显差异.结论 黏膜下植入软组织扩张器,仅引起术区局部暂时性短时间的血供不足,对术区局部愈合以及软组织扩张过程中的血液微循环并未造成长时间的持续性损害.     

不同浓度维生素D干预急性溃疡性结肠炎β-防御素-2表达及意义

目的探讨不同剂量维生素D(本实验采用VD_3)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠β-防御素-2的表达及意义。方法建立C57BL/6小鼠UC模型,并分别给予不同浓度VD_3干预,疾病活动指数(DAI)、组织学评分、免疫组化检测小鼠结肠黏膜中β-防御素-2表达。结果高、低剂量VD_3干预组DAI、组织学炎症、β-防御素-2表达明显低于UC组(P0.05),高、低剂量VD_3组比较差异有统计学意义(P0.05),小鼠组间炎症同β-防御素-2表达具有相关性(P0.05)。结论维生素D对DSS诱导的急性UC小鼠具有一定的缓解作用,并存在剂量效应关系。     

做孩子的心理医生（二十九）

56．什么是创伤后应激障碍 小学六年级女孩眉眉,原本性格活泼开朗,但是一场交通事故改变了她的生活,事故造成眉眉右腿残疾。从此,眉眉总是独自发呆,对小朋友的来访表情漠然。父母对女儿性情的变化焦急万分而束手无策。经过专业医生检查,认为眉眉的症状及病程持续时间都符合创伤后应激障碍的诊断。     

做孩子的心理医生(二十四)

46.孩子和好朋友闹别扭了应该怎样疏导俏俏9岁,是个活泼开朗、性格外向的女孩子。但是最近家长发现她总是闷闷不乐,在家里不像以前那么爱说爱笑了,放学后回家也不爱和同学玩耍了,就连以前爱吃的、爱玩的也都不怎么感兴趣了。家长经了解才知道,原来是俏俏和好朋友闹别扭了,一直都没有解决才会变得心情低落,沉默寡言。孩子们生活在学校中,会结交很多朋友,但是朋友间难免会发生一些矛盾,像俏俏的     

siRNA介导RRM2基因沉默治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤

目的 探讨siRNA沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的可行性。 方法 常规体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用皮下注射法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、顺铂组、siRNA组、siRNA联合顺铂组,每组6只,分组给药。观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算肿瘤生长抑制率。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白表达。 结果 对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组平均肿瘤体积分别为(358.28±46.40)、(261.38±52.49)、(261.65±31.97)、(189.37±41.67)mm³,单药作用后肿瘤体积差异有统计学意义(F_siRNA-RRM2=22.399,P_siRNA-RRM2<0.001;F_顺铂=22.254,P_顺铂<0.001);两药间无交互作用(F=0.474,P=0.499)。对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组肿瘤生长抑制率分别为0、36.39%、41.10%、64.33%。siRNA-RRM2与顺铂单药各自均能降低RRM2 mRNA表达水平(F_siRNA-RRM2=9.37,P_siRNA-RRM2=0.006;F顺铂=11.90,P顺铂=0.003)和蛋白表达水平(F_siRNA-RRM2=8.71,P_siRNA-RRM2=0.008;F顺铂=13.01,P顺铂=0.002);两药间无交互作用(F_{RRM2 mRNA}=3.93,P_{RRM2 mRNA}=0.061;F_RRM2蛋白=1.72,P_RRM2蛋白=0.204)。 结论 单用siRNA或联用顺铂均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤瘤体的生长,可能与其沉默RRM2基因表达有关,特异性沉默RRM2或可成为卵巢癌治疗的一个新思路。     

小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达

目的：构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况。方法：利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹（Western blot）法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况。结果：经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot 结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白。结论：成功建立Tox3基因慢病毒表达载体LV-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础。     

益智方联合西药治疗脑梗死临床观察

目的:观察益智方联合西药治疗脑梗死的临床疗效及其对患者肾功能的影响。方法:选取本院收治的80例脑梗死患者为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组各40例。对照组给予阿托伐他汀钙片与阿司匹林肠溶片治疗,观察组在对照组用药基础上加用自拟益智方治疗,2组均治疗3疗程。比较2组临床疗效,以及治疗前后内皮细胞上清液一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的含量,比较2组治疗前后的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)与日常生活能力(MBI)评分,检测2组血清胱抑素C(Cys C)和血尿素氮(BUN)水平,观察2组不良反应发生情况。结果:总有效率观察组为90.00%,高于对照组的72.50%,2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。治疗前,2组NO、ET-1、Cys C、BUN水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。治疗后,2组NO、ET-1、Cys C、BUN水平均较治疗前降低(P0.05),观察组4项指标的水平均低于对照组(P0.05)。治疗前,2组NIHSS及MBI评分比较,差异均无统计学意义(P0.05)。治疗后,2组NIHSS评分均较治疗前降低(P0.05),MBI评分均较治疗前升高(P0.05),观察组的NIHSS评分低于对照组(P0.05),MBI评分高于对照组(P0.05)。治疗期间2组均无不良反应情况发生。结论:采用益智方联合西药治疗脑梗死患者,可有效改善患者的内皮细胞损伤、肾功能、神经受损状况以及提高患者日常生活能力,且用药安全。     

GLI1及Shh在卵巢型子宫内膜异位症恶变过程中的表达及其意义

目的:探讨神经胶质瘤相关基因同源蛋白1（GLI1）及超音刺猬蛋白（Shh）在卵巢型子宫内膜异位症（EM）恶变过程中的表达及其临床意义。方法:收集2000年4月—2018年4月在青岛大学附属医院及山东省威海市立医院行手术治疗的EM相关性卵巢上皮性癌（EAOC,即卵巢型EM恶变）患者50例（EAOC组）,其年龄为（49±7...