LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中布洛芬对映体的浓度

目的建立简便、快速、灵敏的LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中手性药物布洛芬浓度的分析方法,进行系统的方法学验证,并用于布洛芬在Beagle犬体内的药代动力学研究。方法以酮洛芬为内标,血浆样品经正己烷(含5%异丙醇)液萃取后,以甲醇:1 mmol·L-1甲酸铵(含0.2%甲酸,10%甲醇)(82∶18,V/V)为流动相,采用Lux 5u Cellulose-3(250 mm·4.6 mm,5μm)柱分离,流速为0.8 m L·min-1。通过电喷雾电离源以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 205.2/161.2(布洛芬)和m/z 253.1/209.2(内标,酮洛芬)。方法验证包括基质效应、提取回收率、线性、定量下限、批内与批间精密度、稳定性、稀释效应等。结果犬血浆中左/右旋布洛芬的线性范围为0.2~50 mg·L-1,最低定量限为0.2 mg·L-1,批内、批间精密度(RSD)介于1.01%~13.1%之间。Beagle犬单次口服给予右旋布洛芬后的主要药动学参数Cmax、T1/2、AUC(0-t)分别为:(82.98±14.83)mg·L-1、(3.217±0.7298)h、(362.0±58.67)h·mg·L-1。单次口服给予消旋布洛芬后,其左/右旋布洛芬的主要药动学参数Cmax、T1/2、AUC(0-t)分别为:(70.62±14.81)/(74.48±20.08)mg·L-1、(1.520±0.9286)/(5.432±1.234)h、(177.8±34.18)/(649.6±200.2)h·mg·L-1。结论该方法简便、快速、灵敏度高、重复性好,能够同时测量血浆中左/右旋布洛芬的药物浓度,可用于布洛芬在Beagle犬体内的药代动力学研究。     

ANXA2敲除的A549细胞系的构建及其对H1N1和H9N2流感病毒复制的影响北大核心CSCD

目的旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ANXA2敲除的A549细胞,并探索ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。方法本研究设计了3对靶向ANXA2基因外显子的特异性sgRNAs,分别将sgRNAs构建到LentiCRISPRv2载体上获得重组质粒,与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒后感染A549细胞,通过嘌呤霉素压力及有限稀释法筛选ANXA2基因敲除的单克隆细胞株,用靶基因测序及Western-blot验证ANXA2的敲除效果,并通过CCK-8试验比较ANXA2敲除细胞和野生型A549细胞的细胞活力。再分别用人流感病毒WSN(H1N1)和禽流感病毒SD98(H9N2)感染ANXA2敲除和野生型A549细胞,经TCID_(50)检测ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。结果成功获得了ANXA2敲除的A549细胞系,且与野生型A549细胞相比,细胞活力无显著差异;ANXA2敲除后WSN(H1N1)和SD98(H9N2)流感病毒的病毒滴度均升高,其中ANXA2对SD98(H9N2)流感病毒的影响要大于WSN(H1N1)。结论本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了ANXA2敲除的A549细胞,并发现ANXA2敲除促进了流感病毒的复制,本研究为流感病毒复制和致病机制的研究奠定了基础。     

基于非依赖性全扫描采集蛋白组学技术初步研究继发性细粒棘球蚴病小鼠肝脏差异表达蛋白

目的　寻找细粒棘球蚴病（CE）小鼠肝脏差异表达蛋白,为细粒棘球蚴病靶向治疗药物研发提供借鉴。方法　8只6～8周龄昆明种雌性小鼠随机分成CE组和对照组,CE组小鼠经腹腔注射接种约2 000个细粒棘球绦虫原头节,对照组小鼠注射等量生理盐水,饲养350 d后处死两组小鼠。收集CE组小鼠病灶肝脏（病灶组）、病灶旁肝脏组织（病旁组）及对照组小鼠肝脏组织（对照组）,采用非依赖性全扫描采集（data independent acquisition,DIA）蛋白组学技术比较病灶组与对照组、病旁组与对照组差异表达蛋白,并进行蛋白基因本体论（GO）富集分析、京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路分析。结果　病灶组与对照组、病旁组与对照组间同时存在26种差异表达蛋白,其中8种上调表达蛋白、18种下调表达蛋白。GO功能富集注释分析结果显示,这些差异表达蛋白主要富集在内质网膜等细胞内成分中,通过氧化还原酶实现催化等分子功能,参与氧酸代谢、羟基酸代谢等生物代谢过程。KEGG通路富集分析结果显示,酰基辅酶A氧化酶1(Acox1)参与脂肪酸氧化过程中的初级胆汁酸生物合成,影响过氧化物酶体信号通路;肝脏型脂肪酸结合蛋白（Fabp1）通过脂肪细胞因子信号通路参与脂肪酸转运,影响脂质代谢所参与的过氧化物酶体增殖激活受体（PPAR）信号通路。结论　与正常小鼠相比,CE小鼠肝脏组织蛋白质表达具有差异性,其中部分差异表达蛋白可能与CE潜在药物靶点相关。     

2014—2017年甘肃省结核分枝杆菌耐药监测结果分析

目的 分析甘肃省肺结核患者结核分枝杆菌分离株耐药情况。方法 2014年9月1日至2017年8月31日,采用整群分层等比例随机抽样方法,选取甘肃省30家县级结核病定点诊疗机构作为监测点,排除痰涂片抗酸染色阴性且调查期间正在接受抗结核治疗或不同意接受调查的肺结核患者,对培养阳性的≥15岁的肺结核患者分离的1931株结核分枝杆菌分离株(初治患者分离株1815株,复治患者分离株116株)进行10种抗结核药品[异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(Sm)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、氧氟沙星(Ofx)、卷曲霉素(Cm)、丙硫异烟胺(Pto)、对氨基水杨酸钠(PAS)]的比例法表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。结果 1931株结核分枝杆菌分离株的总耐药率、耐多药率、单耐药率、多耐药率和广泛耐药率分别为26.26%(507/1931;95%CI:24.30%~28.22%)、8.44%(163/1931;95%CI:7.20%~9.68%)、11.39%(220/1931;95%CI:9.98%~12.81%)、6.42%(124/1931;95%CI:5.33%~7.51%)和0.41%(8/1931;95%CI:0.13%~0.70%)。其中,初、复治患者分离株的总耐药率[分别为25.45%(462/1815;95%CI:23.45%~27.46%)和38.79%(45/116;95%CI:30.10%~47.84%)]和耐多药率[分别为7.82%(142/1815;95%CI:6.59%~9.06%)和18.10%(21/116;95%CI:11.10%~25.11%)]差异均有统计学意义(χ²=5.357,P=0.021;χ²=11.623,P=0.001),且初治患者分离株在男性、中部地区的总耐药率[分别为26.22%(284/1083)和24.96%(158/633)]均明显低于复治患者分离株[分别为41.49%(39/94)和51.43%(18/35)],差异均有统计学意义(χ²=5.241,P=0.022;χ²=5.888,P=0.015)。对10种抗结核药品的总耐药率前3位依次为INH[16.78%(324/1931)]、EMB[15.38%(297/1931)]、RFP[10.10%(195/1931)]。据此估算,甘肃省每年新发耐药、耐多药、广泛耐药患者分别为2341~2764、665~940、5~70例。结论 甘肃省结核病耐药情况严重,以一线抗结核药品耐药为主。同时,初治患者的耐药情况应引起重视。     

注射剂溶媒选择与说明书不符致医患矛盾3例分析

目的探讨药物溶媒选择与药品说明书不符致医患矛盾的处理,为医院多学科处理医患矛盾提供参考。方法对于注射用奥美拉唑钠、注射用丙氨酰谷氨酰胺及胺碘酮注射液3种药物因为稀释溶媒与药品说明书不符所引起医患矛盾进行了分析,药师发挥了在处理此类纠纷方面的积极作用。结果通过药师的药学服务和用药宣教工作,医患矛盾得以化解。结论医院应发挥药师专业技术特长,开展合理用药的药学服务工作,减少因不合理用药和药物配伍不当引起的医患矛盾和医患纠纷。     

住院患者胸腺法新超说明书用药分析点评

目的对住院患者胸腺法新的超说明书用药调查分析,为临床合理用药提供参考。方法随机抽查2014年1-6月我院使用胸腺法新的100例住院患者病历,对胸腺法新临床超说明书用药情况进行分析点评。结果胸腺法新存在明显的超说明书用药情况,主要表现为用药适应证、用法用量和配伍禁忌等不符(占抽样处方的69%)。结论应加强处方点评与反馈,对临床不合理的胸腺法新超说明书用药进行干预,促进合理用药。     

抗菌药物使用强度影响因子的概念及应用

目的：首次提出了抗菌药物强度影响因子（DIF）的概念,并将其应用于临床抗菌药物使用强度控制管理。方法：通过对临床科室抗菌药物使用频度（DDDs）和同期收治患者人天数（PDi）的数学分析,引入抗菌药物强度影响因子的概念,模拟计算各临床科室对全院抗菌药物使用强度影响因子的大小,并将其作为指标替代原有的药物固定分配方法。结果与结论：抗菌药物强度影响因子代表临床科室对全院抗菌药物使用强度的贡献,数值越高贡献越大。结果还表明,抗菌药物强度影响因子更能够公平地反映各临床科室的抗菌药物使用情况,方便医疗管理人员利用该因子对全院各科室抗菌药物使用情况进行指标管理。     

老年前列腺癌患者去势后性激素水平变化及对凝血和纤溶系统的影响

目的探讨老年前列腺癌患者去势后性激素水平变化及对血液凝血和纤溶系统活性的影响。方法27例早期前列腺癌经手术去势的患者作为研究组,39例非前列腺癌老年患者作为正常对照组。分别测定黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)、雌激素(E2)、部分凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶原活动度(PA)、纤溶酶原(PLG)活性、α2-抗纤溶酶(α2-PI)活性、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性、二磷酸腺苷(ADP)活性、D-二聚体(DD)含量、血小板聚集率和黏附率、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)抗原浓度。结果研究组中患者TT、FT、E2水平显著降低,E2降低幅度小于TT,LH、FSH、FT/TT、E2/TT显著升高;PT、APTT显著缩短,Fib及DD含量显著增加,血小板聚集率、黏附率及ADP活性均显著升高,PLG、α2-PI活性显著增强,t-PA抗原含量及t-PA/PAI-1显著下降,PAI-1含量显著增加。AT-Ⅲ活性无显著变化。结论前列腺癌患者去势后性激素比例严重失调;血小板活性及血液凝血活性显著增强,纤溶活性显著抑制,提示去势患者存在发生动脉硬化的高度危险性。     

近10年来克山病区高血压发病率的动态变化

背景与目的 克山病是一种以扩张型心肌病为临床主要症状的地区流行病,原因不明.本文旨在分析近10年来国家级克山病监测点甘肃西和县杨庄高血压与克山病的的流行情况.方法 按照<克山病监测方案>,每2年在该监测点开展1次普查,包括询问病史、测量血压、描记心电图等.连续跟踪13年.结果 1)杨庄克山病区13年累积的高血压总检出率(即患病率,下同)大于克山病检出率(高血压检出率13.4%比克山病检出率10.7%,χ2=8.555,P=0.002);2)克山病患者中高血压的患病率比非克山病人群高(Z=-2.43,P=0.015),克山病人群中高血压患病率增长速度明显高于非克山病人群,是非克山病人群的1.7倍(166.3%比99.1%);3)13年克山病检出率增长2.3倍,总增长速度132.8%,低于高血压增长速度;4))13年克山病地区原发性高血压检出率增长3.4倍,总的增长速度为240.0%,高于全国其他地区同期水平;女性与男性之间的差异无统计学意义.结论 杨庄克山病检出率增长缓慢,但是高血压检出率增长迅速;高血压检出率增长迅速是否与克山病区地域及人群原有心血管患病有关,值得进一步研究.     

重庆市居民蛔虫感染流行病学调查分析

目的了解重庆市人群蛔虫感染情况和影响蛔虫感染的相关因素分析,为制订防治措施提供依据。方法以全国第一次寄生虫病分布调查点为主层,在全市范围内抽取7个区县,每区县3个点,每个点检查500人,每人采集一份大便标本,采用KatoKatz厚涂片法计数检查蛔虫卵。结果共调查7个县21个点,检查10575人,蛔虫感染率在1.13%～50.33%之间,平均为20.91%;与第一次分布调查比较感染率下降幅度在41.75%～97.34%之间,平均下降了69.29%;性别间差异无统计学意义(χ2=0.53,P>0.05);年龄以30岁以下3个组感染率最高,显著高于其他年龄组(P<0.01),但此3组之间差异无统计学意义(P>0.05);大于60岁组显著低于其他年龄组(P<0.01);文化程度以学龄前儿童与初中、小学学历感染率最高。蛔虫感染因素分析,有6个变量的回归系数差异存在统计学意义,危险因素强度排序依次为生吃蔬菜(X10)、喝生水(X11)、未服驱虫药(X13)、低年龄组(X14)、不良厕所类型(X6)、饭前不洗手(X8)。结论蛔虫感染率较20世纪90年代大幅度下降,感染度亦相应减轻,蛔虫感染的主要方式是经口吞入感染期虫卵。生吃蔬菜、人畜粪便未经无害化处理和饭前不洗手是最危险因素。