IL-15真核表达质粒的构建及对乙肝疫苗诱导的体液免疫应答的影响

目的 研究两种不同的IL-15真核表达质粒对乙肝蛋白疫苗诱导的免疫应答的影响。方法：构建IL-15真核表达质粒(简称pIL-15)和含有IL-12信号肽的IL-15真核表达质粒(简称pIL-2s-15)，CTLL-2细胞增殖实验验证两种质粒真核表达产物的生物学活性。将这两种质粒分别与HBsAg共免疫BALB／C小鼠，用ELISA法检测小鼠血清抗-HBs IgG及IgGl、IgG2a亚类的效价。结果：与HBsAg蛋白疫苗共免疫时，pIL-15可使HBsAg诱导的抗-HBsIgG效价升高，显著高于载体pcDNA3．1与HB—sAg共免疫对照组，pIL-2s-15对HBsAg诱导抗-HBsIgC效价没有明显影响。与HBsAg pcDNA3．1组相比，HBsAg pIL-2s-15组和HBsAg pIL-15组诱生的抗HBsIgG2a亚类均升高，但前者IgG2a／IgG1比值最高，与HBsAg pcDNA3．1组相比差别有显著性；HBsAg pIL-15组IgG2a／IgG1比值与HBsAg pcDNA3．1组相比差别无显著性。结论 pIL-15真核表达质粒可增强蛋白疫苗诱导的体液免疫应答，pIL-2s-15真核表达质粒则主要使免疫应答趋向Th1型。     

基因疫苗pcDNA-AChRα211免疫小鼠建立重症肌无力动物模型

目的：用基因疫苗pcDNA-AChRα211，免疫C57BL／6小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力模型（EAMG）。方法：将人乙酰胆碱受体α亚基N端的主要免疫区（AChRα211）的基因片段插入到穿梭载体pcDNA3．0中，构建基因疫苗pcDNA-AChRα211。大量提纯质粒pcDNA-AChRα211后肌肉注射C57BL／6小鼠。用ELISA法检测小鼠血清中抗AChRα211，的IgG（ACh-RAb），并用PCR方法检测外源基因在小鼠各组织器官中的分布情况。结果：双酶切鉴定和序列测定表明构建了含正确目的基因阅读框的重组质粒pcDNA-AChRα211，ELISA分析表明该基因疫苗免疫的C57BL／6小鼠血清中含有AChRAb，且免疫三个月后在小鼠的肌肉、肝、脾、肾中仍可检测到目的基因AChRα211的存在。结论：重组质粒pcDNA-AChRα211作为基因疫苗能够诱导实验性自身免疫性重症肌无力。     

miR-139-3p在低氧诱导凋亡的心肌细胞中的表达及其作用研究

目的:探讨微小RNA-139-3p(miR-139-3p)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中的表达及其意义。方法:在正常和低氧条件下,采用RT-qPCR检测乳大鼠原代心肌细胞miR-139-3p的表达水平;进一步将miR-139-3p抑制剂和miR-139-3p抑制剂阴性对照转染到心肌细胞后,将细胞置于37℃密闭的缺氧盒中(95%N_2和5%CO_2)培养12 h,采用流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况。结果:低氧培养12 h后,与正常培养组(n=3)比较,低氧组(n=3)心肌细胞中的miR-139-3p相对表达量显著上调(P0.05)。低氧组心肌细胞凋亡率也显著升高(P0.05)。与miR-139-3p抑制剂阴性对照组(n=3)比较,miR-139-3p抑制剂组(n=3)的心肌细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论:miR-139-3p在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中表达上调。抑制miR-139-3p的表达能降低低氧诱导的心肌细胞凋亡。     

采用小波描述子实现表面渲染数据的渐进传输

为了实现医学可视化的网络应用,提出一种基于小波描述子的表面渲染数据渐进传输方法.首先针对用于表面重建的序列平面轮廓为周期序列的特点,提出数字轮廓小波描述子的概念.基于小波描述子进行渐进传输的基本思想是,在发送端将轮廓采用小波描述子表示,然后对这些小波描述子系数序列渐进发送.在接收端,利用陆续收到的描述子系数序列重构轮廓,进行表面重建与渲染,重建精度和渲染效果随着不断收到‘细节'部分数据而得到改善并最终达到发送端的效果.该方法可以在数据无损传输的情况下,降低对传输网络带宽的要求,文中实验研究表明了方法的可行性.     

双重实时荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌

目的 建立一种快速、灵敏、特异的鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌的双重实时荧光定量PCR方法.方法 以核糖体基因内转录间隔区Ⅱ(ITSⅡ)为靶目标,设计并合成分别针对克柔念珠菌、光滑念珠菌的种特异引物和探针.建立双重实时荧光定量PCR反应体系,并用该体系对呼吸道相关致病菌进行检测.鉴定结果与临床常规鉴定方法对照,评价其敏感度、特异度及重复性.结果 通过对100例样品的检测,结果显示该双重实时荧光定量PCR法检测标本的鉴定结果与常规鉴定方法的结果对照,特异度为100%,敏感度为100%;最小能检测到10个拷贝数的重组质粒;批内重复实验和批间重复实验结果均与常规鉴定方法结果相符.结论 双重荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌,特异度和敏感度高,重复性好,且快速、简便,该方法将有助于念珠菌病的早期诊断和针对性治疗.     

NM23基因相关信号通路在肿瘤转移中作用机制的研究进展

浸润和转移是恶性肿瘤的重要特征,也给肿瘤的治疗带来困难,是预后不良的重要因素.转移抑制因子23(non-metastasis,NM23)基因是最早发现的抗肿瘤转移基因之一.现在已经发现NM23是一个基因家族,包括NM23-H1、NM23-H2等重要的基因家族成员.研究表明NM23基因表达与实体瘤转移抑制有关,在很多实体瘤中可以作为进展和预后的分子标记.随着对NM23基因调控肿瘤转移的分子机制的研究的进一步开展,已经发现了一些NM23肿瘤转移抑制通路上下游的相关调控分子,为进一步的信号通路研究创造了条件.本文概述了近年来对NM23基因转移抑制通路研究的新近展,提出了以后可能的研究方向和需要解决的关键问题.     

N和M1受体介导乙酰胆碱对大鼠尾核痛兴奋神经元放电的抑制作用

目的研究不同胆碱能受体及其亚型在乙酰胆碱(ACh)对大鼠尾核痛兴奋神经元(PEN)放电影响中的作用。方法以电脉冲刺激左侧坐骨神经作为伤害性刺激,用玻璃微电极细胞外记录神经元的放电变化,观察脑室注射ACh和M1、M3、M4以及N受体阻滞剂对尾核PEN电活动的影响。结果(1)脑室注射ACh(2g/L)可抑制大鼠尾核PEN的电活动,使PEN痛诱发放电频率减少,潜伏期延长;(2)ACh对PEN放电的抑制作用可被N受体阻滞剂筒箭毒碱(tubocurare,0.08g/L)和M1受体阻滞剂哌仑西平(pirenzepine,1g/L)所拮抗。(3)M3受体阻滞剂4-DAMP(1g/L)和M4受体阻滞剂托品酰胺(tropicamide,1g/L)不能拮抗ACh对PEN的抑制作用。结论ACh参与尾核镇痛作用可能主要是通过N受体和M1受体介导。     

骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

骨髓基质细胞(BMSCs)在诱导剂的作用下在体外可以定向分化为神经元样细胞,但尚未在临床上广泛使用,主要的原因是神经元样细胞的数量和纯度不够。在骨髓基质细胞诱导分化为神经元样细胞的研究中,诱导剂的选择是关键,目前常见的诱导剂有β-巯基乙醇、细胞因子等。近年来发现利用中药也可以进行诱导分化。     

极低频脉冲电磁场对新生大鼠成骨细胞的影响

目的：观察极低频脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields，PEMF）对体外培养成骨细胞增殖、分化、体外矿化的影响。方法：采用频率为15Hz、强度为5mT、占空比为15％的PEMF作用于成骨细胞，检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性以及体外矿化指标。结果与结论：PEMF显著促进成骨细胞增殖和体外矿化，抑制ALP活性作用。     

窦性起搏对心室肌纤维自发节律位相重置性质的数值研究

本文应用Beeler-Reuter模型，选取损伤电流I＝23μA，产生自发振荡，施加不同程度的电流脉冲刺激，研究窦性起搏对心室肌纤维自节律位相重置的过程，结果表明：当外加电流脉冲强度小于14时，体现位相奇重置，反之，体现位相偶重置，并给出位相重置函数。