NADPH oxidase-derived reactive oxygen species involved in angiotensin Ⅱ-induced monocyte chemoattractant protein-1 expression in mesangial cells

Objective To investigate the origin of oxidative stress induced by angiotensin H (Ang Ⅱ ) in human mesangial cells and the role of reactive oxygen species ( ROS) in Ang Ⅱ -induced monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) expression.Methods MCP-1 expression was determined by real time RT-PCR.ROS production was measured by DCFDA fluorescence.Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase activity was examined by lucigenin chemiluminescence.p47phox and p67phox translocation was assayed by Western blot.Twenty-four male mice were randomly divided into three groups; the control,the Ang Ⅱ infusion [ Ang Ⅱ 400 ng/(kg±min) ],and the apocynin treatment.Ang Ⅱ was infused by subcutaneously osmotic minipump for 14 days.Urinary albumin and 8-isoprostane excretion were measured by ELISA.Results In cultured human mesangial cells,Ang Ⅱ induced the MCP-1 expression in a dose-dependent manner with 3.56 fold increase as compared with the control.Ang Ⅱ increased intracellular ROS production as early as 3 min with the peak at 60 min and was in a time and dose-dependent.Incubation with different dosages of Ang Ⅱ ( 1μmol/L,10μmol/L,and 100μmol/L Ang Ⅱ ) for 60 min,ROS production increased at 1.82,2.92,and 4.08 folds respectively.Ang Ⅱ-induced ROS generation was sensitive to diphenyleneiodonium sulfate (DPI,10 μmol/L) and apocynin (500μmol/L) ,two structurally distinct NADPH oxidase inhibitors.In contrast,inhibitors of other oxidant- producing enzymes,including the mitochondrial complex I inhibitor rotenone,the xanthine oxidase inhibitor allopurinol,the cyclooxygenase inhibitor indomethacin,the lipoxygenase inhibitor nordihydroguiaretic acid,the cytochrome P450 oxygenase inhibitor ketoconazole and the nitric oxide synthase inhibitor G-nitro-L- arginine methyl ester were without an effect Ang Ⅱ -induced ROS generation was inhibited by the ATI antagonist losartan (10μmol/L) but not the AT2 antagonist PD123319 (10μmol/L).Ang Ⅱ treatment induced translocation of cytosolic of p47 and p67 to the membrane.The antioxidants almost abolished Ang Ⅱ -induced MCP-1 expression.Ang Ⅱ infusion increased urinary and p67 translocation by 2.69-,2.97-,and 2.67-fold,respectively.Conclusions NADPH oxidase-derived ROS is involved in Ang Ⅱ-induced MCP-1 expression.Inhibition of NADPH oxidase alleviates Ang Ⅱ -induced renal injury.     

循环microRNA在肾脏病中的研究进展

众所周知,大多数肾脏病属于慢性病,若治疗不及时,有进展为终末期肾脏病的可能,预后较差,因此早期诊断和治疗有助于改善疾病的预后.目前肾脏病常用的诊断指标有尿微量白蛋白、血肌酐、胱抑素C等,但他们易受外界因素的影响,缺乏灵敏性.肾穿刺活检术是肾脏病诊断的金标准,但有创伤性,并具有一定的风险,不易被患者接受,更不易通过重复肾活检来动态判断治疗效果和评估预后.因此,有必要为肾脏病的早期诊断、及时治疗和预后评估寻找具有灵敏性、特异性、非侵袭性(或侵袭性较小)的生物学标志.     

Tamm—Horsfall蛋白的研究进展及临床意义

Tamm-Horsfall蛋白(THP)是肾脏亨利氏袢升支粗段(ALH)上皮细胞及远曲小管(DCT)上皮细胞高尔基体产生并分泌的一种糖蛋白,于1950年首次被发现并从尿中提纯。许多学者对其生理生化特征及致病机理进行了一系到的探讨,然而它在临床上的确切地位及意义至今尚未明了。本文就THP研究的有关进展及THP的临床意义加以阐述。     

儿童过敏性紫癜补体C4基因多态性分析

目的探讨补体C4基因多态性与中国汉族儿童过敏性紫癜(HSP)的关系。方法 HSP汉族儿童188例(HSP组)分为肾炎组(74例,合并紫癜性肾炎)和无肾炎组(114例,无肾炎)。健康汉族儿童130例为对照组。ELISA法检测HSP组血清补体C4水平。结果 HSP组C4AQ0频率高于对照组(7.98%vs.0.77%)(P<0.01)。肾炎组与无肾炎组的C4AQ0频率相仿(8.11%vs.7.89%)(P>0.05)。HSP组和对照组均无C4BQ0。HSP患儿中,C4AQ0患儿血清补体C4水平低于无C4AQ0者[(0.216±0.045)g/L vs.(0.262±0.064)g/L](P<0.05)。结论补体C4基因多态性与汉族儿童HSP的发生有关,提示C4AQ0可能是汉族儿童HSP的易感基因。     

低血磷性佝偻病20例患儿诊断与治疗分析北大核心CSCD

目的分析20例低血磷性佝偻病（HR）患儿临床诊断及治疗资料,以提高临床对HR的诊断和治疗水平。方法回顾性分析2010年5月至2016年4月南京医科大学附属儿童医院收治的20例HR患儿的临床资料,总结其临床特点。20例HR患儿均行X染色体上与内肽酶同源的磷调节基因（PHEX）直接测序,未发现PHEX基因突变的患儿进一步采用多重连接探针扩增技术进行基因分析。结果20例HR患儿均有不同程度的生长迟缓、双下肢弯曲及典型的X线佝偻病表现。经治疗后临床表现好转,身高标准差数值（HSDS）随治疗时间的延长而明显改善,差异有统计学意义（P=0．027）。患儿血磷波动与继发性甲状旁腺功能亢进之间呈正相关（P〈0．05）。19例患儿检测到PHEX基因突变,以截断型突变为主,其中4种PHEX基因突变为首次报道。结论临床表现、实验室及影像学检查是HR诊断的临床指标,PHEX基因检测可作为本病诊断的重要辅助标准,早期诊断、及时治疗可明显改善患儿临床表现。     

姜黄素在肾毒血清肾炎中防治作用的初步研究

目的:探讨姜黄素对大鼠肾毒血清肾炎的防治作用,为将其应用于临床治疗肾小球肾炎提供实验依据。方法:将雄性SD大鼠随机分成3组:①正常对照组:从尾静脉注射0.5ml/d生理盐水,连用2日;②模型组:从尾静脉注射免抗鼠肾毒血清0.5ml/d,连用2日;③姜黄素组:于尾静脉注射免抗鼠肾毒血清0.5ml/d,连用2日,同时腹腔注射姜黄素50mg·kg~(-1)·d~(-1)。3组大鼠分别于第3、7、14、28天处死,测定各批次大鼠24h尿蛋白,并观察肾脏病理组织学改变。结果:姜黄素组24h尿蛋白明显低于模型组(P<0.01),半定量分析显示,姜黄素组肾小球细胞数明显低于模型组(P<0.01);间质炎细胞浸润亦少于模型组(P<0.01);14天后肾小管间质损伤指数姜黄素组也明显好于模型组(P<0.01)。结论:姜黄素能明显减轻肾毒血清肾炎蛋白尿程度,抑制肾小球内细胞增殖,减轻肾小管间质损伤及炎细胞浸润,具有肾脏保护作用。     

初发过敏性紫癜患儿肾脏受累危险因素分析

目的对初发过敏性紫癜（HSP）患儿进行随访,探讨HSP患儿肾脏受累的危险因素。方法前瞻性纳入2009年12月至2010年11月在南京医科大学附属南京儿童医院肾脏科住院的初发HSP患儿,随访6个月,根据肾脏受累定义,将HSP患儿分为肾脏受累组和无肾脏受累组。复习文献提取与肾脏受累可能相关的3项人口学特征、8项临床症状和17项辅助检查指标进行分析,先行单因素分析,对有统计学意义的变量行Logistic回归分析。结果研究期间共纳入初发HSP患儿283例,平均发病年龄为（7.2±2.6）岁（8月龄至16岁）。239/283例（84.5%）完成随访。283例初发HSP患儿均有紫癜样皮疹表现,分别有194/283例（68.6%）和224/283例（79.2%）患儿有消化道和关节症状。80/239例（33.5%）患儿在随访过程中出现肾脏受累,以孤立性蛋白尿为主（44/80例,55.0%）。发病1个月内出现肾脏受累者占50.0%（40/80例）,3个月内出现肾脏受累者占88.8%（71/80例）。单因素分析提示年龄≥8岁、皮疹反复、皮疹持续≥2周、无菌性白细胞尿、血清白蛋白、血小板平均容积（MPV）≥10fL、胱抑素C（CysC）≥0.8mg·L^-1和血清C3≤0.88g.L-1在肾脏受累组和无肾脏受累组间差异有统计学意义（均P〈0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,无菌性白细胞尿：OR=4.178,95%CI：2.061～8.468,皮疹持续≥2周：OR=2.474,95%CI：1.367～4.478,MPV≥10fL：OR=2.948,95%CI：1.533～5.667,CysC≥0.8mg·L^-1：OR=2.101,95%CI：1.067～4.134。结论无菌性白细胞尿、皮疹持续≥2周、MPV≥10fL和CysC≥0.8mg·L^-1为初发HSP患儿肾脏受累的独立危险因素。     

儿童C1q肾病4例报告

目的提高对儿童C1q肾病的认识。方法回顾性分析4例确诊为C1q肾病患儿的临床、病理及预后特点。结果4例患儿临床表现及病理均符合C1q肾病诊断标准,其中2例临床表现为难治性肾病,1例为镜下血尿合并蛋白尿,1例为肾炎性肾病、高血压脑病及肾功能异常。光镜下2例呈轻至中度系膜增生性肾炎表现,1例为轻微病变,1例呈硬化性肾炎。免疫荧光下2例呈满堂亮表现。电镜下均未见明显电子致密物沉积。1例镜下血尿合并蛋白尿患儿加服泼尼松1年后痊愈;1例难治性肾病予足量泼尼松并加用CTX治疗4个月,临床仍无效。1例表现为肾炎性肾病及高血压脑病患儿予泼尼松、骁悉、洛汀新等治疗,随访17个月,肾功能逐步恶化,进展至慢性肾功能不全;另1例失访。随访末患儿自身抗体及血补体均正常。结论C1q肾病是一种较少见的肾小球疾病,临床及病理表现多样,治疗效果和长期预后与临床表现、病理改变密切相关。     

血管紧张素Ⅱ通过ROS-EGFR-JNK-AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是否通过活性氧-表皮生长因子受体-c-Jun氨基末端激酶-活化蛋白1（ROS-EGFR-JNK-AP-1）信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖。 方法 体外培养人肾小球系膜细胞，用AngⅡ（100 nmol/L）、葡萄糖氧化酶（GO）（1 U/L）、血管紧张素受体拮抗剂洛沙坦（10 μmol/L）、乙酰半胱氨酸（NAC，10 μmol/L）、NADPH氧化酶抑制剂apocynin（10 μmol/L）、硫酸二亚苯基碘（DPI，10 μmol/L）、EGFR阻断剂AG1478（10 μmol/L）处理细胞。以未处理细胞为阴性对照。应用3H-胸腺嘧啶（3H-TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖；荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内ROS 的产生；Western 印迹检测EGFR 和JNK 活化。 结果 AngⅡ（100 nmol/L） 可显著促进肾小球系膜细胞ROS 产生，AngⅡ 刺激60 min，系膜细胞产生ROS是对照组2.26 倍。AngⅡ可呈时间和剂量依赖性诱导系膜细胞EGFR 磷酸化，AngⅡ刺激5 min，EGFR 活化明显增加，至30 min 达到高峰，随AngⅡ刺激剂量增加，EGFR活化亦显著增强，AngⅡ（100 nmol/L） 刺激30 min，EGFR 磷酸化是对照组的3.96 倍。洛沙坦、NAC以及apocynin和 DPI 显著抑制AngⅡ诱导的EGFR 磷酸化，同时AG1478 几乎完全阻断AngⅡ诱导的系膜细胞增殖；洛沙坦、NAC、apocynin、DPI 和AG1478 显著抑制AngⅡ诱导的JNK 活化。 结论 ROS-EGFR-JNK-AP-1信号通路参与AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖。NADPH 氧化酶抑制剂和EGFR 受体拮抗剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖，可能是一种新的治疗途径。     

儿童孤立性血尿临床病理分析

孤立性血尿是指仅尿中红细胞数量超过正常,而无明确的全身性和(或)泌尿系疾病及其相关的检查异常.我们回顾性分析我院近6年来收治的126例孤立性血尿患儿,探讨其病理特点与临床表现之间的关系,并分析学龄前儿童与学龄儿童孤立性血尿病理的差异,进一步加深对其认识.