PI3K/AKT信号途径在大鼠脑源性神经干细胞中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K）/AKT信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用.方法 分为对照组、PI3K特异性抑制剂LY294002组（LY294002浓度分别为2 μmol/L,5 μmol/L,10 μmol/L）;采用间接免疫荧光法检测Nestin、NF-200和GFAP的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;Western Blot法检测磷酸化的AKT的表达.结果 随着LY294002浓度增大,神经干细胞的形态变化逐渐明显,而且细胞凋亡率也逐渐增加.低浓度时（2 μmol/L）神经干细胞凋亡率与对照组无显著性差异（P〉0.05）;高浓度时（5 μmol/L、10 μmol/L）神经干细胞凋亡率与对照组、低浓度组有极显著性差异（P〈0.01）.Western Blot结果提示,随着LY294002浓度增大,磷酸化AKT的表达逐渐减弱.结论 本研究提示神经干细胞存活依赖于PI3K/AKT途径的活化,其机制可能是PI3K/AKT活化后,抑制了细胞凋亡事件的发生,但PI3K/AKT途径可能在神经干细胞分化中的作用甚微.     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.     

慢性脑缺血大鼠脑OX1R表达的变化

目的：研究慢性脑缺血时脑食欲素受体-1（OX1R）的表达及其随缺血时间的变化。方法：通过结扎双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型，通过水迷宫对慢性脑缺血大鼠的行为学进行评价，免疫组化法观察OX1R的表达，双标免疫荧光进一步确定OX1R表达的定位。结果：缺血15d时大鼠的学习记忆能力明显减退，1月、2月较缺血15 d模型组的学习记忆能力有所好转。同时，从缺血急性期一直持续到15 d OX1R的表达明显增高，1月时OX1R的表达明显低于15d，2月时OX1R的表达再次增高。从组织学看：15d时部分细胞萎缩，1月时大部分细胞变形萎缩，2月时部分细胞形态恢复正常。双标免疫荧光证实OX1R确实在神经元有表达。结论：慢性缺血性脑损伤时OX1R的表达呈双相性变化,食欲素系统可能在缺血性脑损伤与修复过程中发挥一定的调节作用。     

体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的实验研究

目的：研究体外培养条件下大鼠胰岛凋亡发生及其机制。方法：采用网状纤维染色观察大鼠胰岛分离前后网状纤维分布情况;Hoechst 33258荧光染色法,透射电镜法测定培养1,3,7,14,21 d胰岛细胞凋亡率;放射免疫法测定胰岛素24 h累积分泌量;MTT比色法间接测定细胞存活率;免疫细胞化学ABC法评价Fas,Fas配体(Fas-L)阳性蛋白表达率。结果：大鼠分离后的胰岛网状纤维消失。培养3 d后,电镜观察可见胰岛细胞核皱缩,染色质边集于核膜处等典型的凋亡表现。培养3 d,胰岛凋亡率为(7.6±5.8)%;随培养时间延长,胰岛凋亡率逐渐增加,培养14,21 d,胰岛凋亡率分别为(63.0±2.6)%,(47.2±8.1)%。免疫细胞化学检测Catenin β表达培养7 d消失;Fas阳性蛋白表达率从培养3 d时(8.1±1.8)%上调至14 d,21 d时(38.5±4.7)%,(35.6±6.5)%;Fas-L在培养3 d前无表达,培养7 d为(6.8±3.2)%,14 d,21 d显著上调,分别达到(19.6±4.8)%,(12.4±7.1)%。同时,胰岛素24 h累积分泌量,细胞存活率逐渐下降。结论：大鼠胰岛在体外培养条件下易发生凋亡;Fas,Fas-L可能参与胰岛凋亡事件的发生和发展。     

Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞神经分化中的作用

目的: 探讨Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元中的作用。方法: 构建大鼠 Oct3/4慢病毒载体(Oct3/4 -LV)并感染大鼠MSCs;实验分为感染组(感染 Oct3/4 -LV)、阴性对照组(感染FU-PGC-NC-LV)和未感染组3组;采用β-巯基乙醇诱导各组大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后形态学变化;MTT法检测细胞存活率;免疫细胞化学法检测神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白 2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 和Oct3/4的表达变化;Western blotting法检测MAP-2和Oct3/4蛋白的表达变化;RT-PCR法检测MAP-2和Oct3/4 mRNA的表达变化。结果: (1)阳性克隆PCR证明大鼠 Oct3/4 慢病毒载体构建成功,孔稀释法测定病毒滴度为2×10¹¹ TU/L。(2)倒置显微镜下观察大鼠 Oct3/4 慢病毒载体感染成功,感染复数(MOI)值为10,感染48 h时感染率最高,荧光表达最强;感染率可达83.4%±2.2%。感染组中,MSCs形态发生变化;MTT提示感染组细胞存活率显著降低(P<0.05)。(3)β-巯基乙醇可以诱导大鼠MSCs向神经元分化,其中以感染组诱导效果最佳,具有比较典型的神经元形态,NSE和MAP-2的表达率与其它各组相比显著增高(P<0.05)。(4)感染组与其它各组同时点的Oct3/4表达相比均显著增高(P<0.01)。并且随着诱导时间的延长,各组Oct3/4表达持续减少,诱导后5 h与诱导前相比存在显著差异(P<0.05)。结论: Oct3/4在大鼠MSCs分化为神经元的过程中可能起到了重要的调控作用。     

电刺激小脑顶核治疗非器质性失眠症临床观察

目的:评价电刺激小脑顶核治疗非器质性失眠症的临床疗效.方法:根据ICD-10,选择非器质性失眠症患者80例,正常对照组20例.非器质性失眠症组用电刺激小脑顶核的方法治疗,结合体动记录仪评价电刺激小脑顶核治疗前后睡眠参数的变化;同时,测定匹茨堡睡眠质量指数和血浆食欲素Orexin-A、Orexin-B的水平.结果:非器质性失眠症患者电刺激小脑顶核治疗前与对照组相比,实际觉醒时间、睡眠潜伏期、平均每次觉醒时间显著延长(P<0.05),睡眠效率、平均静息状态时长显著降低(P<0.05),平均活动分数和割裂指数显著升高(P<0.05).治疗后,除了总睡眠时间外,其他参数较治疗前均有显著改善(P<0.05).与对照组相比,除了睡眠效率和平均每次觉醒时间2个参数外,其他参数差异均无统计学意义(P>0.05).匹茨堡睡眠质量指数也存在类似的趋势.各组间Orexin-A、Orexin-B的水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:电刺激小脑顶核可以作为一种治疗非器质性失眠症的新途径.     

EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡中的表达及天麻素的影响

目的： 探讨EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中的表达变化,及天麻素对EphA4表达的影响。方法：提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养,7 d后随机分为对照组、海人酸模型组、海人酸+天麻素干预组;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,Hoechst 33258荧光染色、AO/EB荧光染色、LDH活性测定检测神经元凋亡和坏死情况,CY3荧光染色检测EphA4表达变化。结果：海人酸模型组较对照组神经元凋亡率显著升高（P<0.01）,EphA4表达显著增高（P<0.01）;海人酸+天麻素干预组较海人酸模型组神经元凋亡率显著下降,EphA4表达上调显著受抑。结论：海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中EphA4表达增高,天麻素在这一过程中抑制EphA4表达,对神经元具有一定保护作用。     

脑梗死患者促生长激素释放肽水平的研究

目的探讨促促生长激素释放肽(Ghrelin)水平变化趋势与脑梗死及颈动脉内膜厚度的关系。方法筛选郑州大学附属郑州中心医院2014-01—2016-04住院脑梗死患者86例及同期健康对照组,测定血清Ghrelin含量,用彩色多普勒超声检测颈总动脉至颈内动脉分叉处的内-中膜厚度(carotid intima-media thickness,CIMT),分析脑梗死患者Ghrelin水平与颈内动脉斑块厚度之间的关系。结果脑梗死患者血清Ghrelin水平较正常对照显著降低,差异有统计学意义(P0.01);脑梗死患者CIMT明显增厚,差异有统计学意义(P0.01);Ghrelin水平与CIMT呈显著正相关(r=0.526,P0.01)。结论 Ghrelin在脑梗死的发生、发展中产生重要影响,可为脑梗死的早期干预和预后的评估提供参考依据。     

创伤性脑损伤后炎性小体介导细胞焦亡作用机制及靶向治疗药物研究进展

创伤性脑损伤(TBI)后,炎性小体作为胞质内一种免疫信号复合物,其组装和激活可介导细胞焦亡,引发广泛的炎症反应,加剧脑组织损伤,导致延迟性细胞死亡和进行性神经变性,造成神经功能障碍,在疾病的发展和预后中起到关键作用。TBI后炎性小体介导细胞焦亡的作用机制和靶向治疗已成为最近研究的热点。笔者就炎性小体介导细胞焦亡的相关通路与其在TBI后的活化和调控,以及抑制炎性小体介导细胞焦亡的靶向治疗药物在TBI研究中的应用进行综述,为临床TBI的治疗提供借鉴。     

200例多发性硬化临床分析

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统白质脱髓鞘病变为特点,遗传易感个体与环境因素作用发生的自身免疫性疾病.临床上以病变部位及发病次数的多发性为特点,病理上以中枢神经系统多灶性炎性脱髓鞘为特征.临床表现复杂,且不同种族以及不同地理位置的MS患者有不同的特点.该文报道总结200例MS患者临床特点的结果.