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81.
反义寡脱氧核苷酸抑制丁型肝炎病毒基因链核酶活性的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨反义寡脱氧核苷酸(asODN)抑制丁型肝炎病毒(HDV)核酶活性以阻断HDV复制的作用,方法在构建含HDV基因链和抗基因链核酶cDNA片段的重组质粒pHDVrz277的基础上,体外转录出112聚核苷酸(nt)的基因链核酶,观察5条asODN抑制核酶活性的作用,并对作用最好的一条进行序列优化。结果 互补于683-703nt的自裂位点和茎样结构(stem)1区的asODN可完全抑制该112nt核酶的活性,互补于756-770nt(SSrB区)和721-735nt(SSrA区)的asODN亦有较高活性,抑制率分别为69.36%和48.64%,而对应于736-750nt(stemw区)和704-720nt<SSrC区)者几乎无抑制作用。对互补于683-703nt的asODN进行序列优化发现,封闭自裂位点在内的13nt(683-695nt)的asODN仍保留很高抑制作用,抑制率大于90%。结论stexnl和SSrB在基因链核酶中起重要作用,asODN可有效抑制HDV基因链核酶活性。 相似文献
82.
目前对流感的治疗尚无良药,已有报导用反义寡核苷酸可抑制流感病毒复制,人工合成一小段寡核苷酸特异性地互补到靶基因序列上以关闭基因功能。本文根据流感甲型病毒RNA(vRNA)基因组8个片段的保守区3′-端同源部分,合成了12个碱基的反义寡核苷酸(ASON-12),以病毒(京防A1/E12/86)为靶,观察其抗病毒致细胞病变效应。为了提高宿主细胞对寡核苷酸的捕获率,其末端将预先合成的十四碳烷氧基-β-氰乙基亚磷酸脂连接到寡核苷酸的5′-末端,用次黄苷(I-nosine)取代5′端第四位碱基。 鸡胚细胞接种流感病毒3天后,细胞发生病变,细胞病变程度与病毒接种量成正相关。细胞感染病毒同 相似文献
83.
乙肝病毒感染是肝癌的主要诱因之一。最近几年的研究重点是病毒的组分与宿主细胞因子之间的相互作用。越来越多的与病毒有相互作用的细胞因子被发现,这可能意味着乙肝病毒复制的每一个步骤都有许多宿主细胞因子参与。本文将讨论近年来这方面的研究进展,并对乙肝病毒感染尚未解决的问题进行讨论。 相似文献
84.
性传播疾病病原体检测方法的研究现状 总被引:1,自引:0,他引:1
性传播疾病是一类严重危害人类健康的疾病,带来一系列严重的公共卫生和个人健康问题。随着分子生物学的发展,性传播疾病的新的诊断方法不断涌现。综述了对新近出现的酶联免疫吸附试验、链置换扩增反应、聚合酶链反应、荧光聚合酶链反应、生物芯片等诊断方法及其特点。 相似文献
85.
反义核酸药物是能与特定mRNA序列互补的不同长度的短小DNA片段,能够通过与靶mRNA形成杂交双链而干扰基因表达.反义核酸药物的合成、纯化是新药临床前评价的基础.本文就国内外反义核酸药物合成中常用的载体、硫代试剂、脱保护试剂的发展,纯化常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳、薄层色谱、高效膜吸附色谱、寡核苷酸纯化柱芯和高效液相色谱等方法进行了综述,对其各自的特点、应用前景及优缺点等进行了介绍. 相似文献
86.
动物的发育是一个严格受控的复杂过程,需要在时空上精确控制相关基因的表达.miRNA通过抑制靶mRNA翻译或使之降解失稳从而在转录后降低基因的活性.近期的实验研究表明,miRNA在动物发育的诸多方面发挥着重要调控功能,并表现出特有的调控模式.本文对miRNA参与动物发育过程的调控研究进行了综述. 相似文献
88.
分子伴侣热休克蛋白90(HSP90)在肿瘤细胞中处于活化状态,呈现高表达,在维持肿瘤细胞生存、增殖、侵袭、转移,以及血管增生过程中具有关键作用,作用于HSP90 N端ATP结合域的天然产物格尔德霉素及其衍生物在体内对多种肿瘤具有抑制活性,因此,HSP90已成为抗肿瘤药物研发的热门靶点。基于片段的药物设计是HSP90抑制剂开发的重要策略,已发现了众多结构新颖的高效率配体的小分子片段,依据结构信息进行优化,开发了许多具有良好活性的先导物乃至临床候选物。本文分析了一些基于片段方法的HSP90抑制剂开发案例,并基于X线衍射晶体结构信息,综述了这些从片段到先导物乃至候选药的理性优化过程。 相似文献
89.
探讨抗基因及反义寡核苷酸对肝癌的潜在治疗作用。方法合成了针对N-ras转录、翻译起始区的12mer硫代磷酸抗基因寡脱氧核苷酸(S-ODHan)、19mer硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸(S-ODNAas)。采用ELISA、斑点杂交法分别检测了寡脱氧核苷酸处理的肝癌BEL7402细胞内p21、N-rasmRNA水平,观察了对BEL7402肝癌细胞生长的影响。结果处理细胞内N-rasmRNA水平低于对照组,以S-ODNan组更明显。两者对p21合成的抑制率达80%,67.5%。两者的细胞生长抑制率达88%、77%,并呈剂量依赖性。两者处理的细胞3H-TdR掺入降低为对照组的21.8%、30.55%;AFP水平明显低于对照组(P直<0.001)。结论S-ODNan.S-DDNas能有效抑制N-ras表达及相关肝癌细胞增殖;也进一步说明N-ras在肝癌发生中起作重要作用。 相似文献
90.
脱氧核酶对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察丙型肝炎病毒(HCV)RNA特异性脱氧核酶的体外剪切活性,探讨其用于抗病毒基因调控的可能性。 方法 以HCV 5’-非编码区及部分C区(5’-NCR-C)中两个具有5’…A ↓ U…3’特征的序列为靶位,以5’GGCTAGCTACAACGA3‘为活性中心,设计并合成两端经硫代修饰的脱氧核酶(TDRz),即TDRz-127和TDRz1。用Nar 1将质粒pHCV-neo完全线性化后,以之为模板体外转录获取HCV 5’-NCR-C;用碱性磷酸酶去除其5’端磷酸,再用T4聚核苷酸激酶和γ-32P-ATP进行5’端放射陛标记。在pH7.5、Mg2 10 mmol/L等条件下,将两种TDRz分别(5μmol/L)或共同(各2.5μmol/L)与底物RNA(200 nmol/L)混合,经变性、复性后于37℃孵育,分别于不同的时间点取出等份终止反应。以8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影分离、显示剪切产物,在凝胶成像分析仪上分析各条带光密度值并计算剪切百分率。 结果 在所设常用反应条件下于37℃孵育15、30、45、60、75、90min后,TDRz-127的剪切百分率分别达8.3%、16.1%、24.3%、26.2%、29.4%和31.1%,TDRzl的剪切百分率分别达7.4%,13.0%、15.6%、18.7%、19.4%和20.3%,两者同时剪切时的百分率约15.1%、29.6%、37.8%、39.1%、41.5%、42.6%。结论 TDRz-127和TDRzl对HCV 5’-NCR-C的剪切百分率随时 相似文献