基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

不同代谢活化条件对N-亚硝胺类化合物细菌回复突变结果的影响

目的 检测N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的致突变风险,探讨不同肝微粒体S9混合液对N-亚硝胺类化合物致突变结果的影响.方法 将鼠疫伤寒杆菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537和待测化合物分别与SD大鼠、CD-1小鼠和人的肝脏S9混合液混合后于37℃预培养1 ...     

生脉注射液HPLC指纹图谱的建立

目的:建立生脉注射液的HPLC指纹图谱。方法:采用Waters Symmetry ShieldTMRP18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL.min-1,检测波长203 nm,柱温30℃。结果:本色谱条件下生脉注射液各成分得到了良好分离,指纹图谱由23个特征峰组成。结论:所建立的指纹图谱分离效果好,信息量大,可作为生脉注射液的指纹图谱使用,以便更好地控制该产品的质量。     

经尺骨鹰嘴V形截骨治疗肱骨髁间骨折

目的探讨经尺骨鹰嘴V形截骨入路治疗肱骨髁间骨折的手术方法和疗效。方法采用经尺骨鹰嘴V形截骨内固定治疗肱骨髁间骨折25例,对手术入路方法及内固定方式等进行分析。结果术后随访8个月～18个月,平均15个月,肘关节功能评分参照Cassebaum标准,本组优19例,良3例,可2例,差1例,优良率为88%。结论经尺骨鹰嘴V形截骨是治疗肱骨间骨折较好的入路,具有暴露关节充分、减少软组织损伤、骨折易于复位、术后肘关节功能恢复良好及并发症低的特点。     

以MRP2/MRP3转运体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分筛选

目的 建立以胆红素外排转运体多药耐药相关蛋白2（MRP2）、MRP3为靶点的何首乌中潜在肝毒性成分的快速筛选方法,并评价相关化合物的肝毒性大小。方法 采用计算机分子对接方法对何首乌中的主要单体成分进行高通量筛选,以MRP2、MRP3转运体底物胆红素为参考对象,将48个目标单体与MRP2、MRP3蛋白进行分子对接,实现虚拟筛选;采用CCK-8细胞计数试剂盒法考察目标单体对肝细胞HepaRG的毒性作用;应用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）测定目标单体对HepaRG细胞外排转运体MRP2、MRP3 mRNA相对表达量的影响。结果 MRP2对接结果显示,大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-（6?-O-乙酰基）-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷高于底物胆红素与MRP2对接打分值的80%;MRP3对接结果显示,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-（6?-O-乙酰基）-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷及芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷高于底物胆红素与MRP3对接打分值的80%,因此上述单体可被初步推测为潜在肝毒性成分。体外细胞毒性实验结果表明,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷［半数抑制浓度（IC₅₀）为21.37 μg·mL^–1］和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（IC₅₀为6.96 μg·mL^–1）表现出较明显的肝细胞毒性,并可显著影响外排转运体MRP2、MRP3 mRNA表达水平（P<0.05）。结论 建立的以MRP2、MRP3为靶点的分子对接法初步筛选得到了何首乌中潜在的肝毒性成分,并对其毒性大小进行了评价,为何首乌的临床安全用药提供了参考。     

三明治肝细胞培养模型及其在中药肝毒性评价中的应用

随着中药的广泛使用,安全性逐渐成为影响其临床应用的关键因素之一。肝脏作为机体主要的代谢场所,是药物毒性反应主要的靶器官之一,而使用高效、简便且可靠的体外模型对中药肝毒性进行评价和预警是当前毒理学研究的热点。三明治肝细胞培养模型能表达肝细胞血窦侧与胆管侧的转运体,形成功能性胆小管网络,并具有代谢能力,是研究药物肝胆转运和胆汁淤积的重要工具。对三明治肝细胞培养模型的特点、构建、影响因素及其在中药肝毒性评价中的应用进行综述,为中药肝毒性的评价方法研究提供参考。     

基于化学计量学分析方法黄芪药材质量评价体系的建立

目的采用化学计量学分析方法,建立黄芪Astragalus membranaceus药材质量评价体系。方法收集20批不同产地不同品种黄芪药材,建立皂苷、黄酮类成分特征图谱。运用主成分分析、聚类分析方法深入研究不同黄芪药材中化学成分量的变化趋势及规律。结果 17个特征成分中,黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷ⅣV、芒柄花素和2个未知皂苷成分的差异显著,可作为区分不同产地或不同品种黄芪的关键性指标成分。结论通过化学计量学分析方法,建立的黄芪药材中皂苷、黄酮类成分评价体系专属性强、准确性高,可有效控制和评价黄芪药材质量。     

染料苏丹红的高通量致突变性筛选

目的 初步建立Ames波动试验酶标仪结果判定标准,并对染料苏丹红I~IV的DNA碱基突变风险进行评价。方法 不同浓度的阳性对照2-（2-呋喃基）-3-（5-硝基-2-呋喃基）丙烯酰胺（AF-2）、2-氨基蒽（2-AA）分别作用于鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100后,分别经人工识别或用酶标仪在492和623 nm波长下进行读数,确立基于吸光度的阳性孔判定标准。无或有代谢活化（-S₉）条件下使用鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100开展基于96孔液态培养法的细菌回复性突变试验,苏丹红I~IV终浓度分别为0.625、1.250、2.500、5.000和10.000 μg/mL。结果 非S₉代谢条件下酶标仪读板结果与人工计数结果一致性达98.1%,S₉代谢条件下酶标仪读数与菌落生长情况无法建立良好关联。在非代谢活化条件下,苏丹红I与IV对TA98的致突变性作用相对较弱;苏丹红I~IV对TA100存在明显的致突变性作用,并呈一定的浓度相关性。在S₉代谢活化条件下,苏丹红III对TA98和TA100均未见致突变作用;苏丹红I在最高浓度10 μg/mL时对2者均有明显的致突变作用,苏丹红IV浓度高于2.5 μg/mL、苏丹红II浓度高于5 μg/mL时,对2者致突变作用均显著。结论 首次使用Ames波动试验检出苏丹红I~IV的基因突变风险,吸光度读数可在非S₉代谢条件下准确判断Ames波动试验结果,为染料的高通量遗传毒性筛选奠定基础。     

生脉注射液中聚山梨酯80含量测定

目的：建立HPLC法测定生脉注射液中聚山梨酯80含量,并与分光光度法测定结果进行比较.方法：采用TSKgeL G2000SWXL（300 mm×7.8 mm,5 μm）色谱柱;流动相为0.02 mol·L-1 乙酸铵-乙腈（90：10）;流速为0.6 ml·min-1;柱温为30℃;ELSD检测条件：漂移管温度110℃,氮气流速2.3 L·min-1.结果：聚山梨酯80在4.046～20.230 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.997 6）,平均回收率为98.9%,RSD为2.7%（n=9）.HPLC法与分光光度法测定结果的差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：HPLC法操作简便,重复性好,结果准确可靠,可用于聚山梨酯80含量控制.     

HPLC 电化学检测法用于黄芩苷和黄芩素大鼠血浆稳定性研究

目的：考察黄芩苷(BG)和黄芩素(B)在缓冲液及大鼠血浆中的稳定性，建立测定二者在大鼠血浆中含量的样品处理方法，并初步探讨二者在血浆中稳定性的影响因素。方法：采用HPLC电化学检测法，分别考察BG，B在不同条件下的稳定性及使二者稳定的条件。结果：BG，B在大鼠血浆中较在pH 74的缓冲液中更不稳定。在pH 74缓冲液中加入抗氧化剂可使BG和B的稳定性明显提高，剩余百分含量达到102%和100%；在大鼠血浆中加入抗氧化剂及1 mol·L-1 HCl可使BG和B的稳定性明显增加，剩余百分含量可分别达到98%和103%。结论：BG和B在pH 74缓冲液中的稳定性主要受氧化影响，BG和B在血浆中的稳定性不仅与氧化有关，还受血浆中的内源物质影响，最终确定每1 mL大鼠血浆中加入抗氧剂及100 μL 1 mol·L-1HCl为血浆样品的处理条件，此条件可使样品稳定。