肺癌患者外周血调节性T细胞检测的临床意义

目的:探讨肺癌患者外周血调节性T细胞(CD4+CD25+FoxP3+,Treg细胞)的变化及其与病理参数的相关性。方法:应用流式细胞仪检测56例肺癌患者和18名健康对照者(健康对照组)外周血单个核细胞(PBMC)中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率,分析其与年龄、性别、肺癌分期、病理类型以及是否合并胸腔积液等的关系。结果:①肺癌患者外周血Treg细胞百分率高于健康对照组[(6.15±3.15)%比(3.65±2.48)%,P<0.01]。早期组(TNM分期:Ⅰa期～Ⅲa期)[(5.04±2.40)%]、晚期组(TNM分期:Ⅲb期～Ⅳ期)[(6.83±3.09)%]分别与健康对照组[(3.65±2.48)%]比较,Treg细胞百分率均明显升高(P60岁,26例)明显升高[(8.79±3.49)%比(4.86±2.69)%],差异有统计学意义(P0.05)。④肺癌患者外周血中Treg细胞百分率与性别、有无胸水无相关性(P>0.05)。⑤回归分析显示晚期肺癌患者外周血中Treg百分率与年龄呈负相关(P<0.05)。结论:肺癌患者处于免疫抑制状态,其外周血中Treg细胞百分率与肺癌分期、年龄有关。     

异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞分泌细胞因子的格局

目的 研究异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞亚群分泌细胞因子的格局。方法 用单向异种混合淋巴细胞反应体系研究人－猪间细胞反应的细胞因子分泌格局。结果 γ干扰素的mRNA与蛋白质均强表达,而白细胞介素4（IL－4）均无表达,初次混合淋巴细胞反应时,IL－10的mRNA弱表达,但是猪抗原特异性T淋巴细胞系中未检测到IL－10mRNA表达。结论 异种淋巴细胞混合培养时以Ⅰ型细胞因子分泌为主,参与反应的细胞因子格局和同种移植时呈现相似性。     

用荧光定量法检测Caspase—3的活性

目的,通过检测Caspase-3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法,用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase-3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行闰行的方法学比较。结果Jurkat细胞经不同浓度（50μmol/L和100μmol/L)有放线菌素D诱导后,Caspase-3的活性显著增高,倍增值分别为10．091和10．818,相应的Caspase-3活性单位为0．641和0．659,而未经诱导的Jurkat细胞仅为0．061,加入Caspase-3抑制剂后,倍增值分别为0．101和0．119,Caspase-3的活性单位为0．006和0．007。而且Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase-3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。     

B淋巴细胞抗原互补决定区序列分析的应用

近年来,人们对Ｂ细胞的免疫应答的本质,生发中心的形成,细胞克隆的发生和发育,抗原细胞细胞相互作用,以及不同的Ｂ细胞亚群的调节,在分子水平上加又以重新认识。从而推动了对自身免疫病中Ｂ细胞的超突变、克隆性增生的研究。来自骨髓的Ｂ细胞迁移至外周淋巴组织如淋巴结、粘膜下和关节滑膜等,受到抗原刺激后开始分化,并形成生发中心。生发中心的Ｂ细胞一旦与抗原特异性结合,即可受到抗原的选择也称亲和力的筛选,发生类别转换与体细胞突变。而免疫球蛋白基因超突变ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ则为高亲和性Ｂ细胞的发生与发展提…     

骨关节炎与免疫关联性初探

为了探讨免疫因素是否介导骨关节炎的发病 ,应用直接免疫荧光法检测了 6例晚期骨关节炎患者滑膜液中浸润淋巴细胞分化抗原的表达 ,同时用微量酶联免疫技术测定了这些患者滑膜液中IL 10、IL 12和sFasL的含量。结果显示关节滑膜液中的淋巴细胞以CD8+ 细胞为主 (6 7 0 %± 14 6 %) ,远远高于CD4+ 细胞 (15 0 %± 12 8%) ,两者相差显著 (P <0 0 1)。CD4+ /CD8+ 比值 <1。进一步分析表明其T细胞受体主要为αβ型TCR (6 4 0 %± 12 6 %)。滑膜液中IL 12含量 (2 0 3 84±49 2 )pg/ml高于IL 10 (37 8± 14 5 )pg/ml,有明显统计学差异 (P <0 0 1)。外周血中IL 10和IL 12的含量分别为 (4 3 37±14 2 )pg/ml和 (4 5 5 8± 10 6 )pg/ml。血清中sFasL含量较高 (15 3 90± 5 6 )pg/ml,而滑膜液中则很低 (<5pg/ml,P <0 0 1)。提示在骨关节炎的晚期CD8+ 淋巴细胞和IL 12增高可能参与了关节的免疫损伤。     

BMSCs移植对单侧输尿管结扎大鼠CD4~+CD25~+Treg的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对单侧输尿管结扎(UUO)梗阻性肾病模型大鼠外周血调节性T细胞CD4+CD25+Treg以及肾脏组织CD4+CD25+Treg特异性标志物FoxP3表达影响。方法自Wistar大鼠分离BMSCs,经体外传代培养、成脂诱导及鉴定后制备细胞悬液。54只Wistar大鼠随机分为假手术组、BMSCs干预组和生理盐水注射组,每组18只。BMSCs干预组和生理盐水注射组大鼠经UUO建立梗阻性肾病模型,并于造模同时经下腔静脉分别注入BMSCs和等体积生理盐水。分别于造模后第3、7和14天,采集外周血后分批处死各组大鼠(每组6只),留取肾脏组织标本。流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg占CD4+Treg的百分比(CD4+CD25+Treg/CD4+Treg);HE染色光学显微镜观察肾脏组织病理学改变;免疫荧光组织化学方法检测肾脏组织CD4+CD25+Treg特异性标志物FoxP3表达。结果 BMSCs干预组和生理盐水注射组大鼠造模后各时点外周血CD4+CD25+Treg/CD4+Treg均明显高于假手术组(P<0.05),BMSCs干预组与生理盐水注射组比较差异无统计学意义...     

TRFIA检测胃蛋白酶原在溃疡型胃癌筛查中的价值

目的探讨时间分辨荧光分析法(TRFIA)检测血浆胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值(PGR)在溃疡型胃癌筛查中的价值。方法选取行胃镜检查的患者547例,根据胃镜和病理检查结果分为非萎缩性胃炎72例、非萎缩性胃炎伴有其他病理病变232例、萎缩性胃炎42例、消化性溃疡82例、上皮内瘤变15例、胃癌104例(溃疡型胃癌43例,其他型胃癌61例)。采用TRFIA和化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)分别检测其中447名胃病患者血浆PGⅠ、PGⅡ水平,并计算PGR值。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价PGR诊断溃疡型胃癌的效能。结果 TRFIA与CMIA检测PGⅠ和PGⅡ的结果均呈正相关(r值分别为0.894、0.982,P0.05)。TRFIA与CMIA检测PGⅠ高值(TRFIA检测PGⅠ的结果≥240 ng/mL)样本的一致性较差。与消化性溃疡组比较,胃癌组血浆PGⅠ水平及PGR显著降低(P0.05),溃疡型胃癌组PGR显著降低(P0.05),其他型胃癌组血浆PGⅠ水平显著降低(P0.05)。溃疡型胃癌组血浆PGⅡ水平及PGR显著高于其他型胃癌组(P0.05)。PGR诊断溃疡型胃癌的曲线下面积(AUC)为0.711,最佳临界值为18.20,敏感性为72.1%,特异性为70.8%;诊断胃癌的AUC为0.797,最佳临界值为18.37,敏感性为79.8%,特异性为70.8%。结论 TRFIA与CMIA检测PGⅠ、PGⅡ的结果相关性较好,TRFIA检测上限高于CMIA。PGR对溃疡型胃癌有一定的诊断价值。     

补肾强骨方含药血清对滑膜成纤维细胞增殖及PCNA和Bcl-2表达的影响

目的:探讨补肾强骨方是否可以抑制类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖及PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达。方法:制作补肾强骨方含药血清,体外分离培养类风湿关节炎患者的滑膜细胞,并鉴定、传代。实验分组:含20%空白血清组、20%补肾强骨方高剂量含药血清组、20%补肾强骨方低剂量含药血清组、20%雷公藤多苷片含药血清组。以雷公藤多苷片含药血清组含药血清作为阳性对照,将20%浓度的含药血清加入培养传代的第3代滑膜细胞,继续培养。观察药物对滑膜细胞增殖及PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。结果:与空白对照组相比,补肾强骨方含药血清具有抑制滑膜成纤维细胞增殖的作用(P<0.0001),且高剂量更显著。与空白对照血清相比,补肾强骨方含药血清均能显著抑制滑膜成纤维细胞PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达(P<0.0001)。结论:补肾强骨方含药血清能够显著抑制滑膜成纤维细胞增殖,可能是通过调节PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达来实现的。     

一种新前炎症因子-Cyr61参与类风湿关节炎发病的重要启示

基质蛋白是一大类由组织细胞分泌的蛋白分子,广泛参与多种生理活动,在炎症和组织损伤中也具重要作用[1-2].在自身免疫病中,目前已经发现许多基质蛋白直接介导组织损伤,如类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的滑膜细胞产生的基质金属蛋白酶能直接导致RA患者软骨和骨破坏[2]、骨桥蛋白可以介导单核巨噬细胞、T细胞活化从而加重炎症[1]等等.这些发现均表明炎症部位的组织细胞和基质蛋白对于炎症的过程十分重要,它们能与炎症环境中免疫细胞相互作用,共同促进炎症发展,导致组织损伤和疾病,是潜在的干预靶点.     

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理.方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性.结果100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性,但可诱导肿瘤细胞凋亡,不同的肿瘤细胞凋亡率有差异,凋亡范围在26%～57%.不同细胞表面TRAIL受体表达量不同,外周血淋巴细胞的死亡受体DR4、DR5受体表达5%,而诱骗受体DcRl表达55%,相反肿瘤细胞上的DR4、DR5表达高(40%～88%),而DcRl表达很低(8%～17%).rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡,其细胞内Caspase-3活性增高.ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性.结论重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关.