hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化

目的：构建带有6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒，在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法：利用高效真核表达载体phCMV1，构建phCMV1-6His-hCGβ和phCMV1-6His-hCGβ-C3d3，脂质体法转染CHO细胞，G418(800μg/ml)筛选抗性克隆。放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量，Western blotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ-C3d3融合蛋白。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。结果：酶切及测序结果显示，phCMV1-6His-hCGβ及phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确。在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达，phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的1．6倍。表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白。结论：hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ-C3d3融合蛋白免疫动物的体液免疫效应和抗生育效果奠定了基础。     

桂枝茯苓丸对PCOS模型小鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响

目的 探讨桂枝茯苓丸对多囊卵巢综合征（PCOS）模型小鼠颗粒细胞自噬的影响。方法 20只SD小鼠中随机选取10只建立PCOS小鼠模型,并提取小鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养。设置正常小鼠颗粒细胞为空白组,PCOS小鼠颗粒细胞为模型组,模型组颗粒细胞分别给予10%体积的17.6,35.1,70.2 mg·kg^-1桂枝茯苓丸含药血清,10%体积的25 mg·kg^-1二甲双胍含药血清作为培养基培养颗粒细胞,空白组颗粒细胞用10%体积的空白血清培养72 h。造模期间,测量小鼠体质量变化;造模结束后用显微镜观察小鼠卵巢形态,检测空腹血糖;使用放射免疫法检测空腹胰岛素水平和睾酮水平;细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）检测卵巢颗粒细胞增殖情况,找到对于细胞活力无明显影响的最高含药血清剂量,用于后续实验;流式细胞仪检测颗粒细胞自噬情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞内微管相关蛋白1轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）,LC3Ⅱ,Beclin1,p62蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量增加、空腹胰岛素及空腹血糖水平增加、睾酮水平增加（P<0.05,P<0.01）,表明PCOS小鼠建模成功。与空白组比较,经10%桂枝茯苓丸含药血清培养基孵育后,各组细胞自噬率均有所下降（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组中Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平明显升高,p62的蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,桂枝茯苓丸中、高剂量组中Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平明显下降,p62水平明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 桂枝茯苓丸可以通过下调Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达,抑制卵巢颗粒细胞的自噬水平。     

可溶性PD-1在肿瘤中的研究进展

<正>程序性死亡蛋白1 (programmed death 1,PD-1)是一种重要的免疫抑制分子,作为膜结合型受体,与配体PD-L1结合可下调T细胞功能而造成免疫抑制,在肿瘤生长过程中发挥重要作用。自PD-1的可溶性形式PD-1 (soluble programmed death-1,sPD-1)在血浆中被检测出后,     

原发性骨髓纤维化合并ALK阴性的间变性大细胞淋巴瘤1例及文献复习

<正>原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis, PMF)其特征是造血干/祖细胞来源的克隆性骨髓增殖,是一种弥漫性骨髓纤维组织增生性疾病。临床症状多样化,常包括体质性症状(发热、乏力、骨痛及盗汗等)、贫血及脾大、髓外造血等。好发于中老年人,发病率约为0.3～0.6/10万^[1]。淋巴瘤是来源于淋巴结和淋巴组织的恶性肿瘤,     

桂枝茯苓丸调节PI3K/Akt/mTOR通路对PCOS-IR大鼠排卵障碍的影响

目的:探讨桂枝茯苓丸对来曲唑联合高脂乳剂导致的多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠排卵障碍的影响.方法 :将72只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组和桂枝茯苓丸低、中、高剂量组,每组12只.除空白组外,其余大鼠每日予来曲唑0.001 g·kg1结合高脂乳剂15 mL?kg1连续灌胃30 d建立P...     

CD1332/AC141——一种滋养层细胞新的细胞内标志

目的　了解CD133在滋养细胞的表达情况 ,为鉴定滋养细胞株及原代分离的滋养细胞提供新的细胞内标志。　方法　通过胰蛋白酶 /DNaseⅠ分步消化 ,Percoll密度梯度离心分离纯化滋养细胞 ,经抗角蛋白 (CK 7)、波形蛋白 (vimentin)单克隆抗体行免疫细胞化学和流式细胞仪 (FACS)鉴定 ,纯度达 95 %以上。采用三种不同的CD133荧光标记单克隆抗体在70 %的甲醇固定前后对原代分离的滋养细胞和绒毛膜上皮癌细胞株 (JAR)行FACS分析。　结果　 70 %甲醇固定前 ,三种CD133单克隆抗体均不能与滋养细胞反应 ;固定后 ,抗CD133 1(AC133 1 APC)、抗CD133 2 (2 93C3 PE)仍不能与滋养细胞反应 ,而抗CD133 2 (AC14 1 PE)与滋养细胞胞内抗原结合。而且AC14 1阳性的细胞也是CK 7阳性的细胞。　结论　CD133 2 /AC14 1可作为滋养细胞纯度鉴定的一种有用标志 ,但应用时应选择合适的抗体。     

25例儿童手足口病危重症的抢救治疗分析

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染引起的危重手足口病的有效治疗措施.方法 选取手足口病定点PICU收治的25例均合并有神经系统、呼吸系统或循环系统损害的危重手足口病病例,采取综合治疗措施,观察其预后,进行治疗效果评价.结果 25例危重症患儿,其中5例因起病急、病情进展迅速,经抢救无效死亡.2例因脑死亡放弃治疗.18例痊愈.结论 由EV71感染所致的重症手足口病,发病均为婴幼儿,其特点为起病急、病程短、进展迅速,因此强调早期发现,早期气管插管,并给予呼吸机支持,同时应积极脱水降颅压,采取大剂量丙种球蛋白及糖皮质激素冲击治疗,适当液体复苏,给予亚低温治疗,配合血管活性药物改善微循环等综合治疗,大部分病例可取得较好的疗效.     

肺炎支原体所致大叶性肺炎46例临床分析

目的探讨肺炎支原体(MP)所致大叶性肺炎的临床特点。方法对阜阳市人民医院2008年1月-2011年8月收治的46例MP所致大叶性肺炎患儿的临床资料进行回顾性分析。结果 MP所致的大叶性肺炎发病多见于学龄期儿童,临床表现为起病急,病程长,持续性高热不退,常为稽留热,阵发性剧烈咳嗽,具有肺部体征轻微,胸片表现重,病变多位于单侧肺,以右中下肺多见,可合并胸腔积液、肺不张等肺内并发症。且易合并肺外并发症及多脏器功能损害,早期易误诊。明确诊断后及时应用大环内酯类抗生素阿奇霉素治疗,合并全身炎症反应综合征应用小剂量肾上腺皮质激素治疗。本组病例45例(除1例转诊外)经治疗2～4个疗程全部治愈。结论掌握MP所致大叶性肺炎的临床特征,尽可能做到早期诊断,早期治疗,使用大环内酯类抗生素阿奇霉素治疗,及时应用小剂量肾上腺皮质激素和静脉丙种球蛋白治疗,提高治愈率,减少后遗症的发生。     

红杏妖娆，该出墙时就出墙

关于红杏出墙，套用托尔斯泰老人家的一句名言，那就是，墙里的红杏都是一样的，出墙的红杏各有各的姿态。但是，将这千姿百态细细梳理起来，也不外乎就是两种：一种是根基不动，只将枝枝叶叶伸展出来，和墙外的情郎暗渡陈仓搞嫁接。男一种是一不做二不休，破墙而出，推翻旧世界，奔赴新世界。[第一段]