抗CD3单克隆抗体重、轻链可变区基因的克隆及序列分析

目的：抗CD3单克隆抗体（WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法；采用RT-PCR技术，从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH，VL片段，经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体，测序鉴定。结果：通过国际联机检索发现VH，VL基因与Ig同源，分别符合小鼠IgVH,Vк基因特征。VH基因属于鼠重链VH第ⅡB亚类，全长363bp，可编码121个氨基酸；VL基因属于鼠к轻链第Ⅲ亚类，全长330bp，可编码110个氨基酸，结论：成功获得WuT3单抗的重，轻链可变区基因。     

噻氯匹定对脑梗塞患者血小板聚集功能和血液流变学的影响

以50例脑梗塞为观察组，45例健康人为对照组，观察噻氯匹定对脑梗塞血小板聚集功能和血液流变学的影响。（1）治疗前，观察组血小板聚集率（PAR）非常显著地高于对照组（P＜0.01），（2）治疗后，观察组PAR非常显著地低干治疗前（P＜0.01），与对照组比较已无显著性差异（P＞0．05），（3）观察组各亚组治疗后PAR大多非常显著地低于治疗前（P＜0．01）。（4）观察组治疗前后血液流变学指标无显著性变化（P＞0．05），（5）神经功能缺损评分：治疗前15．8±0．98；治疗后8．2±5.4，差异有非常显著意义（P＜0．01）。     

抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因。将scFv基因克隆至pMD18T,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将scFv基因连接到pBAD/gⅢA表达载体,转化Top10表达菌。阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,竞争抑制ELISA实验检测其活性。结果:scFv基因长度约为700 bp。通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A,使Linker其中一位Gly→Ser)。其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类,全长351 bp,可编码117个氨基酸;其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类,全长318 bp,可编码106个氨基酸。TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-mycMr约为31 000,结果符合scFv的Mr。竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性。结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性。为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础。     

Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用

目的 探索Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用,为砷中毒的人群防治提供依据。方法 收集贵州省兴仁县雨樟镇交乐病区砷中毒人群以及格沙屯正常人群分别作为砷中毒组和对照组,实时荧光定量PCR检测各组人群Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平。同时,分别以不同剂量亚砷酸钠、不同时间处理MIHA细胞,流式细胞术测定细胞周期改变情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平和蛋白表达情况。在上述实验基础上,针对Gadd45β和Gadd45γ基因分别设计的siRNA作用于染砷的MIHA细胞,反向验证Gadd45β和Gadd45γ基因在砷致细胞周期改变过程中的影响。统计学分析采用独立样本t检验比较两组间差异,采用单因素方差比较多组间差异。结果 人群实验研究发现,与对照组相比,砷中毒患者Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平升高（t = 2.576,P = 0.011;t = 2.312,P = 0.022）;MIHA细胞中,随亚砷酸钠染毒剂量、染毒时间增加,细胞G2/M期比例明显升高（F剂量 = 340.136,P＜0.001;F时间 = 49.194,P＜0.001）;在相对较低亚砷酸钠浓度（低于20 μmol/L）、一定时间内（低于48 h）Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA和蛋白表达水平随染砷剂量、染砷时间升高而升高,超过该浓度范围和作用时间后,出现表达下降的现象（Gadd45β:F剂量-蛋白 = 37.568,P＜0.001;F剂量- mRNA = 9.771,P＜0.001;F时间-蛋白 = 61.144,P＜0.001;F时间- mRNA = 46.366,P = 0.001;Gadd45γ:F剂量-蛋白 = 12.989,P = 0.001;F剂量- mRNA = 23.613,P＜0.001;F时间-蛋白 = 27.425,P＜0.001;F时间- mRNA = 37.969,P＜0.001）。转染siRNA分别下调Gadd45β和Gadd45γ的表达后,细胞周期都出现G2/M期比例下调（t = 3.053,P = 0.038;t = 14.47,P＜0.001）。结论 砷致Gadd45β和Gadd45γ基因表达水平升高在其诱导MIHA细胞出现G2/M期阻滞过程中发挥重要作用。     

特大面积烧伤病人切痂术中的监测与护理

特大面积烧伤不仅皮肤损伤大 ,而且可深达肌肉、骨骼 ,并常伴有呼吸道烧伤等 ,存在脱水、休克、心肾功能衰竭、呼吸困难、严重感染等多器官功能衰竭的严重问题[1] 。血压、心电、中心静脉压、尿量监测能为病情监测、治疗和护理提供重要依据 ,现就我院 1989～ 1999年 118例特大面积烧伤病人的监测和护理报告如下。1　临床资料本组 118例 ,男 72例 ,女 4 6例 ,年龄最大 84ａ ,最小 3个月 ,平均 4 1.6ａ。烧伤面积大于 50 % ,其中大于 70 % 35例 ,伴呼吸道烧伤 2 7例 ,术中留置导尿管 118例 ,动脉测压 55例 ,中心静脉压监测 98例 ,皮下针型电极…     

氧瓶燃烧法测定奥美拉唑含量

奥美拉唑 (Ｃ17Ｈ19Ｎ3Ｏ3Ｓ)是一种治疗消化性溃疡的药物 ,其含量测定方法已报道了间接银量法、高效液相色谱法、紫外分光光度法 ,本文采用氧瓶燃烧法将奥美拉唑化学结构中的有机硫转变为硫的氧化物 ,并以吸收液吸收后用标准氯化钡滴定测定其含量 ,获满意结果。1　试药与试液　 ( 1 )过氧化氢、高氯酸均为分析纯 ,吐啉 (Ｔｈｏｒｉｎ)指示剂。 ( 2 ) 0 0 1ｍｏｌ/Ｌ氯化钡标准溶液 (用苄基异硫脲盐酸盐按分析方法进行标定 )。2　测定方法　取本品约 3～ 5ｍｇ,精密称定 ,以 1 %过氧化氢溶液 1 0ｍＬ为吸收液 ,置氧瓶中燃烧完全后 ,放置 30…     

经右胸心脏不停跳下心内直视手术5例报告

我院于1996年4月～1998年4月经右胸第4肋间前外侧切口建立体外循环,不阻断主动脉及灌注停跳液,在心脏不停跳下行心内直视手术5例。较同期胸骨正中切口建立体外循环应用托马液冷灌,心搏停止后心内直视手术比较疗效较好,报告如下。1　临床资料本组5例,女3例,男2例。年龄最小6岁,最大32岁。房间隔缺损3例,室间隔缺损2例。直接缝合3例,补片2例。手术在全麻浅体温或常温体外循环下进行。均采用全晶体液预充,中度血液稀释,术中中流量灌注。2　手术方法与结果全麻气管插管后,患者取右侧垫高30°仰卧位,经右侧第4肋间前外侧切口长约15cm。常规开胸后…     

应用双针头防止药物稀释中胶塞碎屑脱落的研究

在静脉输液药物稀释配制中 ,由于反复穿刺橡胶瓶塞抽吸药液 ,易造成或胶塞碎屑脱落而危害病人健康。我们经过临床观察发现 ,胶塞脱落的主要原因是由于针头马蹄面的根部刮胶塞所致。根据这一原因 ,我们设想 ,在稀释药液穿刺瓶塞时控制进针深度 ,1 6号针头 (针长 0 8ｃｍ)留在胶塞中以避免其根部切刮胶塞达到减少胶塞碎屑脱落的目的。1　方法为了掌握好进针深度 ,我们根据药瓶胶塞的厚度 ,将针头的针梗处套上长度适宜的硅胶管以起阻挡作用。收到了较满意的效果。但由于硅胶管硬度欠佳 ,穿刺时用力稍大 ,针头的马蹄面即可全部进入药瓶内。为了…     

宫颈麻醉在人工流产术中的应用

人工流产术作为避孕失败的补救措施已被广泛应用,因手术操作简单多不使用麻醉,大多数受术者出现不同程度的下腹痛．甚至出现人工流产综合征、自１９９６年以来,我院应用２％利多卡因行宫颈局部浸润麻醉和宫颈管内膜表面麻醉,取得满意效果。资料与方法一、研究对象;为确保资料的准确性,采用单盲法,选择１５０例孕６～１２周要求终止妊娠,且无心血管系统疾病病史的健康孕妇,随机分为三组,每组各５０名。Ⅰ组：宫颈局部浸润麻醉组;Ⅱ组：宫颈管内膜表面麻醉组;Ⅲ组：对照组。三组孕妇年龄,孕产次,既往分娩方式,闭经天数比较无显…     

铬酵母中铬的含量测定

目的 研究铬酵母中铬的含量测定方法。方法 采用氧化－光度法。结果 铬的平均回收率及相对标准偏差分别为１００．３％、２．７％（ｎ＝５）。结论 本方法可用于测定铬酵母中铬的含量,方法简便,易行。