国产浓缩型酶法二氧化碳试剂盒的应用研究

目的 探讨浓缩型酶法二氧化碳(CO2)试剂盒在Roche Modular生化分析仪中的检测性能.方法 根据CLSI系列文件(EP15-A2,EP6-A,EP9-A2,C28-A3)和其他相关文献的实验方案,对迈克浓缩型酶法CO2的精密度、线性范围、参考区间及其与Roche配套试剂进行可比性分析,结果与厂商声明的性能或者公认的质量目标进行比较.同时比较分析迈克与罗氏试剂检测参数,高中低浓度标本结果及其检测点吸光度值变化.结果 精密度性能通过验证；呈一次线性,线性范围为5.8～43.8 mmol/L；与罗氏原装试剂具有较好的可比性,回归方程为Y-0.982 2X+0.020 8,相关系数r=0.9916；参考区间验证结果均在该实验室给出的参考区间内；迈克和罗氏试剂的参数设置略有不同,高中低浓度标本检测点吸光度值差异具有统计学意义(P＜0.05),但检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 迈克浓缩型酶法CO2试剂盒在Roche Modular检测中的主要分析性能均符合质量目标要求,满足临床需要.     

不同厂家校准品校准同一检测系统检验结果的实验研究

目的 观察不同厂家的校准品能否直接校准非配套的检测系统.方法 参考美国临床实验室标准化委员会的EP9-A2文件,以罗氏检测系统为目标检测系统(系统1),用罗氏C-fas、朗道校准品Level2和Level3分别与国内某一厂家生产的生化分析仪器、试剂和检测程序组成待评检测系统(系统2～4),然后用上述四个检测系统分别检测40份新鲜患者血清中的总胆红素(TBil)等10个项目,每个标本测定两次,结果取均值.计算待评检测系统(Y)与目标检测系统(X)之间的相对偏倚,以美国临床医学检验部门修正法规(CLIA'88)允许总误差的1/2为标准,判断检验结果的可比性.结果 系统2与系统1的TBil,DBil,ALP和CK具有可比性,其他项目不具有可比性.系统3与系统1的TBil和GGT具有可比性,其他项目不具可比性.系统4与系统1的Glu具有可比性,其他项目不具可比性.结论 不同厂家生产的校准品不能直接用于校准非配套检测系统,每一检测系统都必须具有自己的配套校准品.     

构建survivin shRNA重组载体及靶向下调PC3细胞survivin mRNA的表达

背景:survivin 基因特异性表达于肿瘤和胚胎组织,与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移以及多药耐药密切相关.目的:构建靶向survivin 基因的shRNA 重组质粒表达载体,转染前列腺癌细胞PC3,验证该载体能否下调细胞survivin 基因mRNA 水平.方法:以survivin 基因为靶点设计具有短发夹结构的shRNA 序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6 建立重组表达载体pENTR/U6-SUR ;转化E.coli TOP10 菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR 和测序鉴定;将重组质粒转染前列腺癌细胞株PC3 细胞,RT-PCR 检测重组质粒对细胞survivin 基因mRNA 水平的抑制效果.结果与结论:将设计合成的shRNA 序列经退火后克隆至pENTR/U6 载体中,菌落PCR 可扩增出目的条带,测序结果证实插入片段为所需序列;pENTR/U6-SUR 重组质粒转染后PC3 细胞survivin 基因mRNA 表达水平显著下降,且24 h 比48 h 作用更明显.成功构建了靶向survivin 基因的shRNA 质粒表达载体,并证实该载体显著下调了PC3 细胞中survivin 基因mRNA 水平.     

5种浓度水平冰冻混合人血清ALT、AST二级标准品的研制

目的：研制5个浓度水平冰冻混合人血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）二级标准品,为常规检测ALT、AST提供稳定性和互通性良好的准确度验证材料和校准品。 方法：收集无脂血、溶血的含ALT和AST 的5个浓度水平的混合人血清,滤菌后分装于冻存管中,（-70±2） ℃保存。采用单因素方差分析检验该标准品的均匀性,并观察其在15~25 ℃（室温）、2~8 ℃和-70 ℃的稳定性。4家实验室采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的含和不含磷酸吡哆醛（PLP）参考方法对标准物质定值,并评定不确定度。观察血清物质在7种进口配套检测系统的互通性,并用直线回归分析进行评价。 结果：血清物质均匀性良好（P＞0.05）,稳定性在15~25 ℃和2~8 ℃时能满足使用要求,-70 ℃保存至少稳定1年。4家实验室对该标准品的定值结果具有一致性,总体不确定度较小。血清物质的互通性良好,仅浓度4和5在含PLP的方法间互通性稍差。 结论：研制的5水平冰冻混合人血清均匀性、稳定性、互通性良好,定值准确,可用作ALT、AST的二级标准品。     

化学发光免疫技术检测鳞状细胞癌抗原的性能验证

目的：验证和评价雅培i2000SR全自动化学发光仪定量检测鳞状细胞癌抗原（SCCAg）的分析性能。方法：对雅培i2000定量检测SCCAg的精密度、线性进行验证。用i2000和酶联免疫吸附技术（ELISA）方法检测相同标本SCCAg,对检测结果进行比较分析。结果：精密度均符合雅培性能标准;SCCAg检测呈一次线性（r=0．999,P〈0．05）,线性范围为：0．24—61．9ng／mL;两种方法检测相同标本,i2000的阳性率为60％,ELISA的阳性率为35％。以恐000为标准,ELISA的相对敏感度为54．2％、相对特异性为93．8％,两种方法的总符合率为70％。结论：雅培i2000检测SCCAg的主要分析性能验证结果与厂商声明的基本一致,与旧方法ELISA的总符合率良好,符合质量目标要求,可应用于临床标本检测。     

复溶过程中多种因素对干粉质控品检测结果的影响评估

目的 探讨复溶过程中人员操作、温度、水质等因素对干粉质控品检测结果的影响,规范复溶过程,减小非产品因素导致的瓶间差,保证质控结果的可靠性.方法 选用迈瑞正常值和病理值干粉质控品,按照人员、温度、水质等因素随机分为8组,将分好组的干粉质控品按要求复溶后,分别测定24个常规项目,计算出各组各项目测定结果的均值和标准差,比较各组与标准组之间的统计学差异以及临床差异.结果 一般技术人员组多个项目测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.008 3);温度15和30℃复溶时,TBIL测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.016 7);用电导率为1.711和3.500 μs/cm的纯水复溶时,Ca、Mg等项目测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.016 7).部分有统计学意义的项目同时具有较显著的临床差异.结论 应加强实验人员复溶操作过程的培训以减少因复溶引入的新瓶间差,复溶时的温度以室温(24±2)℃,水质选用电导率<小于μs/cm的纯水为宜.     

电化学发光法测定NT-proBNP的分析性能验证与评价

目的:验证与评价电化学发光法测定NT-proBNP的分析性能.方法:根据CLSI系列文件,对电化学发光免疫分析仪检测NT-proBNP的精密度、线性范围、可报告范围、干扰等性能进行验证与评价.结果:精密度符合厂家所提供的性能标准;NT-proBNP的检测呈一次线性(r=0.998,P＜0.05),其线性范围为5.86 ～ 31 557.5 pg/mL;可报告范围为5.86 ～3 155 750 pg/mL;干扰实验结果显示F-Bil 0.2 g/L、C-Bil 0.4g/L、Hb 5.0 g/L、乳糜3000浊度对NT-proBNP检测不存在干扰.结论:电化学发光免疫分析仪检测NT-proBNP的主要分析性能符合临床要求,CLSI实验评价方案具有实用性和可操作性.     

8个临床检测系统检测α-淀粉酶与参考测量程序的比对分析

目的观察不同临床检测系统与参考测量程序测定α-淀粉酶(Amy)的可比性。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件,用8个临床检测系统与参考测量程序分别测定患者血清、国际和国内实验室间比对样本、商用校准品及质控品的Amy活性水平,并进行比对。以卫生部临床检验中心室间质评Amy允许总误差的1/2为标准,评价临床检测系统检测血清Amy结果的临床可接受性。结果 8个临床检测系统(依次编号为Y1～Y8)与参考测量程序(X)测定血清样本的相关性方程分别为Y1=0.934 7X-2.375 0、Y2=0.801 6X+13.901 4、Y3=1.139 7X+13.979 5、Y4=0.829 3X+0.702 4、Y5=0.830 6X+5.826 9、Y6=0.791 0X+12.195 8、Y7=0.728 4X-0.826 5、Y8=0.721 9X+44.318 0。其中,Y1、Y2、Y5、Y6系统检测患者血清Amy结果为临床可接受,而Y4、Y7系统经参考测量程序赋值新鲜血清校准后检测结果为临床可接受。结论用参考测量程序赋值的新鲜血清对临床检测系统进行校准可提高不同检测系统间检测Amy的可比性;建立参考测量程序是保证不同检测系统间Amy检测结果可比性的关键。     

486株肠球菌菌型分布及耐药性研究

目的　分析临床分离的肠球菌的菌型特点和对常用抗生素的耐药性。方法　在VITEK 32仪器上用GPI鉴定卡及API系统鉴定感染性疾病各种临床标本分离的肠球菌 ;在VITEK 32仪器上用GPS 10 7药敏卡及K -B法测定肠球菌对药物的敏感性。结果　从痰或咽拭子、尿液、宫颈分泌物、伤口分泌物等处分离的 4 86株肠球菌分别占总数的 30 7% ,2 9 2 % ,16 5 % ,13 0 % ;粪肠球菌和屎肠球菌占总数的 92 4 %。高水平氨基糖苷类耐药(HLAR)粪肠球菌和屎肠球菌检出率高达 6 0 % ;屎肠球菌对青霉素等 β -内酰胺类抗生素耐药率明显高于粪肠球菌。未检出耐万古霉素肠球菌 (VRE)。结论　肠球菌是本地区呼吸道、泌尿系感染主要病原菌之一。临床应重视HLAR株引起的感染 ,根据药敏结果合理用药。