PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的:探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞(MSC)分化为成骨细胞的影响。方法:采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC,体外扩增,应用地塞米松、β-甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD98059,观察其对成骨细胞形成的影响。结果:MSC体外扩增15代可获得(3-4)×10¹²个细胞。在成骨诱导液作用下,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD98059均可抑制MSC分化为成骨细胞,并有剂量依赖关系;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论:ERK信号传导途径可能在MSC分化为成骨细胞和脂肪细胞过程中起关键作用。     

大鼠大脑皮质胆囊收缩素受体的体外结合分析法研究

用Ｂｏｌｔｏｎ－Ｈｕｎｔｅｒ试剂联结法标记胆囊收缩素（ＣＣＫ８）,得１２５Ｉ－ＢＨ－ＣＣＫ８,其比放射性为３．４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ,放射化学纯度大于９６％。取其与自制的大鼠大脑皮质细胞膜进行受体放射分析,发现标记配体与大鼠大脑皮质ＣＣＫ受体的结合具有温度和时间依赖性,可饱和性,可逆性及特异性。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析获大鼠大脑皮质细胞膜ＣＣＫ受体Ｋｄ值为１．０９８ｎｍｏｌ／Ｌ,Ｂｍａｘ为１９７．５ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。     

缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,从大鼠颅骨分离出成骨细胞,并于ＤＭＥＭ培养基中进行传代培养。锌特异性络合剂ＴＰＥＮ络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型。采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法确定成骨细胞在不同时点ＤＮＡ的合成状况,同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析;采用组织学方法观察细胞骨架的变化、３Ｈ－脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果表明,缺锌组成骨细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量在各个时点明显低于对照组,细胞被阻滞于细胞周期中Ｇ２／Ｍ期,这与细胞骨架受损密切相关。缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组。但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异。因此,缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化。     

双膝关节内侧盘状半月板1例报道及文献回顾

正患儿,女,7岁,因双侧膝关节疼痛1年,加重1周于2013年12月26日收入院。患者1年前无明显诱因出现双膝关节疼痛,左侧重于右侧,未做系统治疗,疼痛间歇性加重。近1周疼痛加重遂来我院就诊,平素身体健康,无外伤手术史。入院后查体:双侧膝关节略肿胀,轻度外翻。膝关节内侧间隙压痛阳     

P75在小鼠肾脏组织中的特异性表达鉴定

目的探讨肾脏中是否存在神经嵴来源的细胞,体外分离后培养,检测其细胞特性。方法通过免疫荧光染色方法及Q-PCR技术,检测P75在小鼠肾脏中是否有表达及在各时间段(1、2、4周)的表达规律;用免疫荧光共染的方法,分别行P75抗体与Nestin抗体、Nephrin抗体共染,观察P75+细胞表达位置;磁珠分选P75+的细胞,并在体外培养及鉴定。结果P75在小鼠肾脏中有表达,在7 d时表达含量最高,达18.7%;随小鼠年龄的增长,P75表达含量降低;P75与Nestin、Nephrin的表达部位一致,在肾小球中表达,而未在肾小管表达;磁珠分选得到的P75+细胞经可体外培养;并在诱导液诱导下,这些细胞可以分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论P75表达阳性的肾脏细胞,有可能起源自神经嵴,且具有部分干细胞特性。     

丹参酮ⅡA定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,FGF-2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元样细胞,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10⁶,15代可获得(2-3)×10¹²个细胞,流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。FGF-2促进hMSC生长,并且对MSC的分化能力基本没有影响。丹参酮ⅡA诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:丹参酮ⅡA可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

人卵黄囊间质干细胞的分离纯化及诱导成脂的实验研究

目的:分离纯化及体外定向诱导人卵黄囊间质干细胞(YS-MSC)分化为脂肪细胞。方法:显微分离人卵黄囊, 经酶消化得到卵黄囊细胞, 卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到人YS-MSC, 流式细胞仪检测YS-MSC表面抗原表达, 钙钴法测定碱性磷酸酶(AKP)活性;地塞米松、消炎痛、胰岛素定向诱导YS-MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪。结果:人卵黄囊间质干细胞易于分离、纯化, 体外培养增殖潜能大。卵黄囊间质干细胞CD29、CD44、CD166及CD105表达阳性, CD34、CD45和CD86为阴性;AKP弱阳性。卵黄囊间质干细胞经成脂诱导转化为大小不等的园形或椭圆形细胞, 可见胞浆内有少量微小脂滴形成, 随时间延长, 胞浆中脂滴相互融合, 胞核被挤于细胞的一侧, 经油红O染色脂滴染橘红色, 符合脂肪细胞的生物学特征。结论:人卵黄囊间质干细胞与成体间质干细胞表型一致, 在体外可以分化为脂肪细胞。     

间充质干细胞分化为脂肪细胞蛋白组学分析

目的 利用蛋白组学技术,分析成脂分化过程中蛋白表达改变,探讨脂肪形成机制.方法 以体外诱导人体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化脂肪细胞作为模型,收集诱导0,1和3周细胞,制成蛋白裂解液;采用双向电泳结合质谱分析方法,以0周为对照组,比较诱导1周或3周蛋白质表达改变.结果 成脂分化引起44个蛋白表达上调或下调水平超过2倍.这些蛋白功能类型主要属于代谢(39%)、细胞骨架(11%)、氧化还原(6.8%)、蛋白合成与分解(15.9%)、信号传导(6.8%)和分子伴侣(4.5%)等蛋白.结论 生物学信息分析表明,被调节的蛋白在脂肪形成过程中起重要作用;MSCs是研究多能前体细胞向包括前脂肪细胞在内的个体细胞系定向分化的有利工具.     

第三方骨髓来源间充质干细胞治疗异基因造血干细胞移植后难治性迟发性出血性膀胱炎20例临床研究北大核心CSCD

目的观察第三方骨髓来源间充质干细胞(MSC)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后难治性迟发性出血性膀胱炎(LOHC)的疗效和安全性.方法回顾性分析2018年7月至2020年6月allo-HSCT后发生难治性LOHC 20例患者在常规治疗基础上联合第三方骨髓来源MSC治疗.MSC以每次1×10^(6)/kg、每周1次输注,直至症状改善或连用4次无效停用.在MSC治疗前及治疗后第8周应用定量PCR法检测患者尿液标本中BK病毒(BKV)、JC病毒(JCV)、巨细胞病毒(CMV).结果①20例难治性LOHC患者中,男15例、女5例,中位年龄35(15~56)岁;急性淋巴细胞白血病(ALL)5例,急性髓系白血病(AML)9例,骨髓增生异常综合征(MDS)5例,母细胞性浆细胞样树突细胞瘤(BPDCN)l例;HLA全相合移植4例,HLA不全相合移植16例.②MSC输注中位次数为3(2~8)次.17例患者获得完全缓解,1例获得部分缓解,总缓解率为90.0%.移植后中位随访397.5(39~937)d,13例存活、7例死亡,死亡原因包括急性GVHD 1例、感染5例、血栓性微血管病(TMA)1例.③MSC输注后第8周尿BKV-DNA及CMV-DNA拷贝数较治疗前显著降低(11342.1×10^(8)拷贝/L对5.2×10^(8)拷贝/L,P=0.016;3170.0×10^(4)拷贝/L对0.2×10^(4)拷贝/L,P=0.006),而JCV-DNA与治疗前相比无明显改变(P=0.106).④未发生MSC输注相关不良反应.结论第三方骨髓来源MSC对allo-HSCT后难治性LOHC具有显著疗效且安全性良好.