靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

ADAM33基因单核苷酸多态性及单体型与慢性阻塞性肺疾病的关联性研究

目的 探讨中国华北地区汉族人群ADAM33基因S1、S2位点单核苷酸多态性及单体型与慢性阻塞性肺疾病(COPD)及肺功能的关联性.方法 应用DNA直接测序的方法,对90例COPD患者和90名健康对照者的ADAM33基因S1、S2位点基因型进行检测;应用SHEsis在线软件构建单体型并进行单体型关联分析.结果 ①病例组和对照组中S1位点基因型及等位基因频率分布比较差异无统计学意义(P＞0.05),S2位点基因型及等位基因频率分布比较差异有统计学意义(P ＜0.05).②Logistic回归分析表明:ADAM33基因S1位点不同基因型COPD发生的相对危险度比较差异无统计学意义(P＞0.05);S2位点不同基因型COPD发生的相对危险度比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其中G/G+C/G基因型的OR值为2.364(95％CI 1.251～4.466).③COPD病例组S2位点基因型与肺功能相关临床指标的关系显示:3种基因型FEV1％预计值比较差异无统计学意义而FEV1/FVC比较差异有统计学意义,其中G/G基因型与C/C、C/G基因型相比FEV1/FVC下降更明显.④SHEsis在线软件对S1、S2位点进行单体型分析结果显示,单体型CG在COPD组和对照组中比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在中国华北地区汉族人群中,ADAM33基因与COPD的易感性有关,但与疾病的严重程度无关.     

Keap1-Nrf2-ARE通路与脑缺血

Keap1 -Nrf2-ARE通路在抗肿瘤、抗应激、抗凋亡、抗炎症等方面具有广泛的细胞保护功能.其在神经系统疾病中的神经保护作用已成为目前的研究热点之一.文章综述了Keap1-Nrf2-ARE通路在脑缺血中的神经保护作用.     

腺病毒siRNA抑制RhoA基因并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的建立RhoA基因的腺病毒siRNA系统,并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡,分析RhoA在肿瘤细胞中的功能和作用。方法用已构建的RhoA干扰质粒构建RhoA的腺病毒siRNA系统,筛选重组病毒并感染HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测RhoA蛋白表达和基因表达水平。感染Ad-siRNA-RhoA腺病毒的肝癌细胞用TNF-α诱导后进行MTT以及细胞内DNA片段化检测。结果成功构建RhoA基因的siRNA腺病毒系统。用重组病毒感染肝癌细胞,RhoA蛋白表达抑制率为76.48%;RhoA基因的mRNA转录水平降低74.46%。MTT检测显示,感染腺病毒Ad-U6-control对照组以及感染腺病毒Ad-siRNA-RhoA实验组的细胞A值差异无统计学意义(F=5.41,P>0.01),即利用siRNA抑制肝癌细胞中RhoA表达,肿瘤细胞凋亡不明显。TUNEL检测显示,RhoA腺病毒siRNA联合TNF-α致肿瘤细胞凋亡作用显著。结论构建的腺病毒siRNA载体系统能抑制目的基因RhoA的表达,联合TNF-α能抑制肿瘤细胞生长和增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤基因功能的基础研究和肿瘤基因治疗打下了实验基础。     

肾上盏通道经皮肾镜取石术的安全性和疗效观察

目的：探讨。肾上盏通道经皮肾镜取石术治疗肾结石的安全性和疗效。方法：回顾性分析2008年6月～2012年5月采用肾上盏通道经皮肾镜取石术治疗的140例肾结石患者的临床及随访资料。结果：140例患者采用肾上盏通道经皮肾镜取石术治疗,平均手术时间（42±6）min;术中平均血红蛋白丢失量（8．2±2．5）g／L;一期净石率91．4％（128／140）;并发症发生率10．7％（15／140）,其中术中穿刺失败、通道丢失或出血严重2例,胸膜损伤或（和）胸腔积液2例,肾盂或输尿管穿孔1例,术后出血2例,其中需要输血者1例,发热6例,尿外渗2例,无肾丢失或死亡患者;术后平均住院天数（7．5±1．2）d。结论：肾上盏通道经皮肾镜取石术治疗肾结石具有手术时间短、术中出血量少、净石率高、并发症发生率低、术后住院天数少等优点,是安全、有效的手术方法。     

膀胱炎性肌纤维母细胞瘤2例报告并文献复习

目的：探讨膀胱炎性肌纤维母细胞瘤的临床、病理、组织生化特性和诊治方法及预后。方法：报告2例肉眼血尿伴重度贫血的膀胱炎性肌纤维母细胞瘤患者的诊治资料,并结合文献进行探讨。结果：膀胱炎性肌纤维母细胞瘤以肉眼血尿和尿痛为最常见症状,肿瘤好发于膀胱底部、顶壁、侧壁;组织学由具有平滑肌细胞和纤维母细胞特征的梭形细胞、大量慢性炎性细胞及血管样黏液构成。1例随访3年,1例随访6个月,均无瘤存活。结论：膀胱炎性肌纤维母细胞瘤为低度恶性肿瘤,罕见。确诊依据病理学检查,应与平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、梭形细胞癌等鉴别;治疗原则以切除肿瘤、保留膀胱功能为主,TUPKBT、TURBT或膀胱部分切除术,术后辅以化疗药物膀胱灌注,效果佳。     

微弧氧化ZK60镁合金生物安全性和降解性的体内实验研究

目的:研究经微弧氧化处理的ZK60镁合金(MAO-ZK60)植入动物体内后的组织毒性和降解性来探讨其作为骨科植入材料的可能。方法:将18只SD大鼠随机均分为3组(A、B、C组):A组为实验组,在大鼠股骨髁内植入经微弧氧化处理的ZK60镁合金(MAO-ZK60)棒;B组植入表面未经处理的ZK60镁合金(ZK60)棒;C组植入医用高分子左旋聚乳酸(PLLA)棒,B、C组分别为对照组。观察并比较不同组之间的血生化指标的动态变化。12周后处死实验动物后取材,病理切片观察肝、肾组织形态变化,判断有无肝肾毒性。micro-CT检查观察镁合金在大鼠体内降解情况及植入体-骨组织界面,并用GEHC Micro View软件计算镁合金植入体体积的变化。结果:各组随时间变化生化指标无显著变化,差异无统计学意义。各组肝、肾组织病理组织切片均未见异常。micro-CT显示A组4周时骨-植入体界面有空隙开始形成,8周时空隙开始逐渐减小,至12周时空隙继续减小并且植入物与骨质结合较好。A组的体积随时间的改变小于B组(P<0.05)。结论:经微弧氧化处理的ZK60镁合金在动物体内表现出良好的完全性,其耐腐蚀性较未经处理的ZK60镁合金有所提高。     

控制性超排卵中黄体生成素的过度抑制和黄体生成素预处理

体外受精-胚胎移植(IVF-ET)降调方案中,使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)降调后,部分患者可能出现卵巢过度抑制,对卵泡刺激素(FSH)的反应延迟.而GnRH-a主要抑制黄体生成素(LH),因此可能存在LH不足,对IVF中出现卵巢过度抑制的患者可考虑LH预治疗.     

腰椎后路椎旁肌间隙入路的解剖学与影像学观察

目的:观察腰椎周围肌间隙的解剖学与影像学特点,为腰椎后路椎旁肌间隙入路的选择和操作提供形态学依据.方法:选取18具成人尸体湿性躯干标本,一侧行局部解剖观察腰椎周围肌肉及其毗邻结构,另一侧行模拟肌间隙手术入路,观察不同肌间隙的解剖构成及其显露腰椎相关结构的特点;同时选取30例健康志愿者的腰部MRI与CT图像,观察肌间隙的影像学显示特点.结果:Wiltse间隙位于多裂肌与最长肌之间,由脂肪及疏松结缔组织填充,无血管、神经穿行;通过该间隙可清晰显露腰椎关节突关节、椎间孔及横突;75.0％的CT片和93.3％的MRI片可显示Wiltse间隙.LIMP间隙位于最长肌与髂肋肌之间,由一层薄而透明的筋膜分隔两肌,69.4％标本可见脊神经后支的肌支穿行间隙内;该间隙可满意显露椎间孔区及椎弓根;41.6％的CT片和56.6％的MRI片可显示LIMP间隙.Watkins间隙位于髂肋肌与腰方肌之间,由腰背筋膜中层及少量脂肪分隔肌肉形成,75.0％标本可见脊神经后支的皮支及伴行血管走行;该间隙可满意显露椎间孔及椎体两侧;63.3％的CT片和86.6％的MRI片可显示Watkins间隙.结论:熟悉腰椎不同肌间隙的形态特点及穿行结构,术前影像学准确观测有助于椎旁肌间隙入路的选择与操作.     

小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞的表达

目的 观察小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞(MDSCs)的表达.方法 将10只BALB/c小鼠随机分为两组:正常组和荷瘤组,后组是将H22肝癌细胞注射到肝左外叶,制作小鼠原位肝癌移植模型.10d后处死小鼠.流式细胞术检测两组小鼠外周血、骨髓、脾脏及肝脏组织中MDSCs的表达.结果 荷瘤组小鼠外周血、骨髓和脾脏中的MDSCs比例为[(47.73±6.00)、(71.90±4.30)、(11.21±1.19)％],均明显高于正常组小鼠[(18.33±2.31)、(59.03±4.50)、(5.82±0.58)％];正常小鼠肝组织中MDSCs占肝内白细胞6.5％,荷瘤小鼠肝癌组织、癌旁组织中MDSCs占肝内白细胞分别为43.8％和12.8％.结论 在小鼠原位肝癌移植模型中,MDSCs表达明显上调,为研究MDSCs在肝癌发生发展中的作用提供了良好的动物模型.