2型糖尿病合并动脉粥样硬化大鼠模型的建立

目的：制备一种发病过程类似人类普通2型糖尿病合并动脉粥样硬化的大鼠模型。 方法： 取出生 3 d 的Wistar大鼠20窝，随机分正常对照组和造模组两组，造模组按75 mg/kg体重剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)（临用前用pH 7.4，0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠溶液配制成2%的溶液），正常对照组腹腔注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠溶液，1次性注射，1月后断乳，挑选血糖值在11.1-20 mmol/L雄性大鼠，随机选出20只作为模型对照组，喂以普通饲料，其余作为糖尿病合并动脉粥样硬化造模组喂以高胆固醇高脂高糖饲料，全部动物于喂饲料后第0、2、5个月测体重及尾静脉采用测血糖、血脂、胰岛素，各阶段处死部分动物作病理观察。 结果： 高热量组大鼠体重高于正常组，血糖、血脂、血清胰岛素水平及胰腺和主动脉病理学观察与正常组差异不明显；模型对照组大鼠体重轻于对照组，血糖、血脂、血清胰岛素水平也与对照组有明显差异(P<0.05)；胰腺和主动脉病理学观察与对照组比较有明显改变；模型组大鼠体重明显大于对照组，血糖、血脂、血清胰岛素水平显著增加(P<0.01)；胰腺和主动脉病理学观察有非常显著改变。 结论： 该大鼠模型是研究糖尿病血管并发症的一种理想模型。     

葆乐辉对慢性阻塞性肺疾病患者的平喘作用及安全评价

葆乐辉是近年用于临床的新型无水茶碱控释制剂，由美国仙灵葆雅药物有限公司研究，它具有速效及长效控释的特点。本文研究口服葆乐辉对慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）患者的平喘作用、副作用及血药浓度，以评价其临床疗效与安全性。１ 材料与方法１．１ 病例 慢性支气管炎急性发作、慢性阻塞性肺气肿患者１４例，其中男性１１例，女性３例，平均年龄５７．７８±１３．９８岁（３６～８２岁）。合并呼吸衰竭者２例。患者均无糖尿病、肾炎等疾病，肝、肾功能正常。１．２ 一般治疗及给药方法 患者入院后给予吸氧、抗感染、祛痰等综合治疗，不…     

缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的效应

目的探讨缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的效应.方法应用免疫组织化学染色、3 H-TdR掺入、流式细胞仪检测技术探讨缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响.结果缺氧12 h其增殖细胞核抗原(PCNA)阳性反应颗粒增加,24 h明显增加,其含量是常氧组2.1倍.低氧8 h可使ASMC的3 H-TdR摄取量减少(P＜0.05),12 h则促进其摄取,24 h则明显较常氧对照组增多(P＜0.05).流式细胞仪检测显示其G2/M期细胞比例明显增多(P＜0.01),G0/G1期细胞比例明显减少(P＜0.01),细胞内总蛋白含量有所降低(P＜0.01).结论缺氧早期抑制或损害ASMC增殖,而后促使PSMC的表型改变,出现增殖,从一侧面证实缺氧可以直接促进ASMC增生.     

RNA干扰技术对人U937巨噬细胞株糖皮质激素受体表达及功能的抑制效应

目的利用载体介导的RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(GR)基因阻断的人U937巨噬细胞株模型.方法构建两个针对GR的RNAi重组表达载体,分别命名为pSilencer 3.1-GR1和pSilencer 3.1-GR2,经测序确认后,转染人U937巨噬细胞株.RT-PCR、Western blot分别检测糖皮质激素受体mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测地塞米松作用后GR转录激活功能的变化.结果经测序证实:成功构建两个针对GR的RNAi表达载体(pSilencer 3.1-GR1和pSilencer 3.1-GR2);转染pSilencer 3.1-GR2可明显降低细胞内GR mRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞内GR转录激活功能明显降低;转染pSilencer 3.1-GR1与对照组相比无显著变化.结论成功地构建并筛选出一个高效且特异阻断GR表达及功能的RNAi质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法.     

油酸/脂多糖致伤老年大鼠MODS的Toll样受体4 mRNA表达变化及意义

目的观察油酸/脂多糖(OA/LPS)致伤的老年大鼠多器官功能障碍综合征(MODSE)主要脏器组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化,探讨TLR4在MODSE发生中的作用.方法80只SD大鼠分为老年组及青年组,予以油酸(OA,0.25ml/kg)和脂多糖(LPS,3.5 mg/kg)分次静脉注射(间隔4 h),建立二次打击MODSE和青年MODS模型.观察对照组及伤后2、6、24h,重要器官(肺、心、肝、肾)病理及功能的变化,分别检测肺、心、肝和肾组织中TLR4 mRNA表达变化.结果OA/LPS致伤后,肺脏损害出现最早,PaO2于2 h降至最低值,而心、肝、肾功能损害指标于6 h达峰值.在同一时相点,老年鼠脏器损害重于青年鼠(P＜0.05,P＜0.01).致伤后肺、心、肝和肾组织中TLR4mRNA表达均显著升高(P＜0.05,P＜0.01);其中以肺组织中最高,升高幅度最大,于2 h达峰值;心、肝、肾组织中于6 h达峰值.在相同时相点老年鼠各组织中TLR4 mRNA表达高于青年鼠(P＜0.05,P＜0.01).结论油酸 脂多糖所致老年鼠多器官功能障碍重于青年鼠,以肺损伤出现最早,损伤最重.致伤后大鼠肺、心、肝、肾组织中TLR4 mRNA表达升高,老年组高于青年组,以肺组织中最高,升高幅度最大,在MODSE发病机制中起重要作用,可能是MODSE发生过程中肺脏最先且严重受损的原因之一.     

外源性一氧化氮对LPS诱导的人单核巨噬细胞株NFκB活性的影响

目的研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside, SNP)对脂多糖(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937 核转录因子κB(NFκB)活性的影响.方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为4组,分别为正常对照组(不给任何药物)、LPS组(10 ng/ml LPS 100 ng/ml rhLBP)、低剂量SNP组(LPS rhLBP 50 mol/L SNP)、高剂量SNP组(LPS rhLBP 500 mol/L SNP).用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Western blotting)测定U937细胞中NFκB的活性;ELISA测定U937细胞培养上清液中TNF-α的含量.结果 LPS刺激后NFκB P65进入核内,而LBP抑制肽组核易位明显减少.低、高剂量SNP组P65胞浆灰度比较LPS组明显减小(P<0.01,P<0.05).各SNP组细胞核P65的D(450)较LPS组降低;各抑制肽组细胞浆P65的D(450)较LPS组升高.低、高剂量SNP组TNF-α较LPS组显著降低(均P<0.05).结论 SNP能显著抑制LPS诱导的U937细胞NFκB的活化,并降低其TNF-α的释放.表明SNP对急性肺损伤或脓毒血征可能具有潜在的预防和早期治疗作用.     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的效应

本实验应用免疫组织化学染色 ,3H TdR掺入 ,流式细胞仪检测技术探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PSMC)增殖的影响。结果 :缺氧 12h其增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性反应颗粒增加 ,2 4h明显增加 ,其含量是常氧组 2 1倍 ;低氧 8h可使PSMC的3H TdR摄取量减少 (P <0 .0 5) ,12h则促进其摄取 ,2 4h则明显较常氧对照组增多 (P <0 .0 5) ;流式细胞仪检测显示其G2 /M期细胞比例明显增多 (P <0 .0 1) ,G0 /G1期细胞比例明显减少 (P <0 .0 1) ,细胞内总蛋白含量有所降低 (P <0 .0 1)。说明 ,缺氧早期抑制或损害PSMC增殖 ,而后促使PSMC的表型改变 ,出现增殖 ,从一侧面证实缺氧可以直接促进PSMC增生     

一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞低氧性增殖反应的作用

目的 :观察低氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)受血管舒张因子一氧化碳的作用。方法 :随机分为常氧组、低氧组 ( 1%O2 5 %CO2 94%N2 )、一氧化碳组 ( 3%CO 5 %CO2 92 %N2 ) ,采用流式细胞仪、增殖细胞核抗原 (PCNA)、[3H]-胸腺嘧啶 ( [3 H]-TdR)摄取量 ,检测PASMC增生的情况。结果 :( 1)流式细胞仪检测低氧组PASMCG2 M期细胞比例明显增多(P <0 .0 1) ,G0 /G1 期细胞比例明显减少 (P <0 .0 1) ,CO组与常氧组的PASMC各期细胞数差异不显著 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )PCNA免疫组化染色 ,低氧组PASMC细胞核阳性反应颗粒明显增加 ,而CO组为弱阳性。 ( 3) [3 H]-TdR的摄取量 ,低氧组可明显促进PASMC摄取 [3H]-TdR (P <0 .0 5 ) ,CO组与常氧组比没有明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :低氧可以促进PASMC的增殖 ,而CO可以部分抑制低氧对PASMC的作用     

全氟化碳对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的 观察全氟化碳(PFC)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC)表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的影响,探讨PFC的抗炎作用及其对PMVEC的保护机制.方法 采用组织块法培养大鼠PMVEC,将细胞接种于Transwell小室,按随机数字表法分为空白对照组(C)、PFC干预组(F)、LPS刺激组(L)、LPS刺激 PFC干预组(LF),以处理0 h为空白对照,各处理组分别给予PFC或100 μg/L LPS共孵育3、8、24 h,通过MTT法观测PFC作用后正常大鼠PMVEC细胞活力变化,应用逆转录PCR(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测各组各时相点大鼠PMVEC ICAM-1 mRNA和蛋白表达量.结果 PFC作用后,正常大鼠PMVEC的细胞活力未见明显改变.各组各时相点ICAM-1 mRNA表达的变化规律与蛋白质水平基本一致,F组各时相点ICAM-1的表达量与C组比较均无显著性差异(P＞0.05);L组各时相点细胞的ICAM-1表达均较C组显著增强(P＜0.05,P＜0.01);LF组与L组同时相点比较,3 h组ICAM-1表达量无明显差异(P＞0.05),但8 h和24 h组均有显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 PFC通过抗炎效应直接下调LPS诱导PMVEC表达ICAM-1,发挥PMVEC保护作用.     

顺铂诱导人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞的凋亡

背景与目的:近年的研究表明,诱导细胞凋亡是多种作用于核酸代谢不同环节的化疗药物抗肿瘤的重要机制。但顺铂杀灭人小细胞肺癌(SCLC)细胞的药物效应除了损伤其DNA外,诱导该类恶性肿瘤细胞凋亡是否是其杀灭细胞的重要机制尚无相应研究。基于此,本研究旨在探讨顺铂诱导人SCLC细胞系H446细胞凋亡的机制及其在SCLC化疗中的作用。方法:分别采用形态学观察、流式细胞仪分析技术和原位DNA断裂点的末端标记法,检测顺铂诱导H446细胞的凋亡作用。结果:终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/m l的顺铂均可诱导H446细胞凋亡,且呈浓度依赖性(处理48 h时,其凋亡指数分别为1.47±0.03、8.28±0.54、11.02±1.05、12.74±1.08、27.16±1.15);终浓度为2μg/m l的顺铂在24~72 h持续诱导细胞凋亡且诱导凋亡作用逐渐增强,呈时间依赖性;终浓度为5μg/m l的顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的S期,终浓度<5μg/m l顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的G2期和S期。结论:诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。