结核杆菌保护性抗原-遍在蛋白质系统的建立

目的：将结核杆菌4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质（泛素）基因融合，建立抗原－遍在蛋白质系统。方法：通过RT－PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质cDNA，同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出4种保护性抗原编码区，然后通过柔性接头将遍在蛋白质与4种抗原的基因分别融合在一起，并插入到pVAX质粒中。结果：扩增出来的4种抗原基因大小分别为0.3,0.7,1.0,1.65kb，遍在蛋白质PCR产物约为0.2kb，均与GenBank中登录的相符；pVAX重组质粒酶切结果显示融合基因正确地插入到pVAX载体中，全自动测序显示抗原基因和遍在蛋白质基因均为所需基因，柔性接头序列也完全正确。结论：成功地构建了中国株结核杆菌的4种保护性抗原基因－遍在蛋白质融合系统，为结核病的防治打下了基础。     

生物技术药物实验课程建设的探索与实践?

为了使学生能够在学习理论知识的同时,获得动手实践的机会,进行了生物技术药物实验课程的建设,提出了"四个一"的实验课程建设目标,即编写一本易用的实验讲义、制作一套生动的媒体课件、培养一支专业的教学团队、搭建一个完善的实验平台。该实验课程的建设和实施提高了学生的学习兴趣,增强了教学效果,积累了课程建设经验,也为其他实验课程的建设和改革提供了有益借鉴。     

稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定

目的:筛选并建立稳定表达亚洲人常见的adr亚型HBsAg的P815细胞株,为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型.方法:用PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入pcDNA3载体,并通过脂质体转染P815细胞,G418筛选.结果:构建了重组质粒pcDNA3-HBsAg(S),转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg(S)的存在,PCR扩增也证实HBsAg(S)基因已稳定整合于P815细胞的染色体中.结论:获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株,为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础.     

GATA-3与支气管哮喘

GATA 3是能与〔T/A(GATA)A/G〕序列结合的锌指结构家族的转录因子之一。目前研究认为它是T细胞发育中关键的调节因子 ,能诱导TH2 型细胞分化 ,调控TH1/TH2 平衡 ,在支气管哮喘的发病中起重要作用 ,使用GATA 3反义寡核苷酸阻断GATA 3的表达可以抑制各种TH2 型前炎性细胞因子的产生 ,从而减轻肺部过敏性炎症。     

萘磺酰胺衍生物对细菌脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的影响

研究了6种氯代萘磺酰胺衍生物对细菌脂多糖(LPS)诱导经卡西霉素A₂₃₁₈₇体外激活的巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)作用的影响。表明:将氯代萘磺酰胺的氨基接以亲水性不同长度碳链的胺基,所得衍生物可明显抑制LPS诱生TNF的作用;接以疏水性烷基,则可明显增强亚适剂量的LPS诱生TNF的作用,且碳链长度对化合物的作用强度有一定的影响。     

蛋白激酶C抑制剂抑制白细胞介素1对骨细胞的作用

用富含成骨细胞的小鼠头颅骨细胞测试白细胞介素１（ＩＬ－１）对骨细胞的作用以及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ－７对ＩＬ－１作用的影响。结果表明ＩＬ－１（２５～１００Ｕ／ｍｌ）呈剂量依赖方式抑制骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性；而对耐酒石酸酸性磷酸酶活性有增强作用。Ｈ－７（５～２０μｍｏｌ／Ｌ）对ＩＬ－１上述作用具有剂量依赖抑制作用。提示ＩＬ－１对骨细胞的作用可能与ＰＫＣ有关。     

乙肝核酸疫苗安全性的初步研究

目的:研究乙肝核酸疫苗对小鼠和豚鼠的长期毒性.方法:健康小鼠和豚鼠分别按体重随机分为低、中、高剂量组(小鼠剂量分别为0.5,1.5,4.5 mg·kg-1,豚鼠剂量分别为0.1,0.4,0.8 mg·kg-1)和溶媒对照组.2种动物均每周后肢肌内注射2次,共8周.末次给药后24 h和停药后30 d分别测血液学、血液生化、病理检查和小鼠的各项免疫指标(包括IgG 1和IgG 2a亚型血清水平、血清抗核抗体、血清抗体总水平、γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)血清水平、外周血中各淋巴细胞亚群的分布情况和染色体整合检测).结果:两种动物各剂量组的各项常规检测指标均未见有任何异常变化,与空白及溶媒对照组相比均无显著性差异.小鼠免疫指标未出现与治疗目的无关的改变.结论:受试疫苗在两种动物未观察到明显的生化、病理学、免疫学指标异常.小鼠和豚鼠肌内注射乙肝核酸疫苗的安全剂量分别为4.5和1.2 mg·kg-1.     

一种高血浆纤维蛋白原动物模型的建立*

纤维蛋白原是一种急性应激蛋白质，在机体的凝血机制中发挥核心作用。近年来流行病学研究表明，高水平血浆纤维蛋白原是一个重要、独立的心脑血管疾病危险因素［１］。为深入研究高水平血浆纤维蛋白原的致病机制，并寻找有效防治药物，我们建立了一种小鼠高血浆纤维蛋白原...     

稳定表达结核分枝杆菌38抗原的EL-4细胞株的建立及鉴定

将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中，通过脂质体转染EL-4细胞，经G418筛选，用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3—38抗原重组质粒，转染细胞中可检测到38抗原的存在，PCR扩增也证实38抗原基因已稳定整合于EL-4细胞的染色体中。本实验为今后在小鼠体内检测结核DNA疫苗激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应奠定了基础。     

卡介苗及其衍生物与支气管哮喘的治疗

192 1年Ｍｏｎｓｉｅｕｒ经过 13年 2 3 1次传代培养获得了世界上第 1株减毒结核杆菌疫苗———卡介苗 (ＢＣＧ) ,从而改变了整个人类防治结核的历史。半个多世纪后 ,由其衍生出的ＢＣＧ ＤＮＡ、ＣｐＧ寡核苷酸 (ＣｐＧ ＯＤＮ)等不但在防治肿瘤、控制感染、免疫佐剂等方面显示出极大的应用价值 ,由于没有糖皮质激素引起的免疫抑制的副作用 ,在支气管哮喘 (简称哮喘 )等变态反应性疾病防治中的地位也备受关注。我们就ＢＣＧ及其衍生物在哮喘防治中的作用综述如下。一、哮喘发病的免疫学基础哮喘是一种呼吸系统常见的慢性气道炎症性疾病。目…